硒是人體所必需的營養(yǎng)元素,硒酸鹽是土壤中可被植物利用硒元素的主要存在形態(tài),研究表明植物主要通過硫酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白來吸收硒酸鹽。其中屬于第一亞家族的SULTR1;1和SULTR1;2被認為是參與植物硒吸收的主效基因。課題組前期克隆到茶樹硫酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白基因家族的8條基因,初步研究發(fā)現(xiàn)CsSULTR1;1和CsSULTR1;2可能在茶樹硒吸收轉(zhuǎn)運過程中承擔重要作用。為了進一步明確茶樹硫酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白基因CsSULTR1;1和CsSULTR1;2在硒吸收過程中的功能,本論文采用基因克隆、生物信息分析、亞細胞定位、轉(zhuǎn)基因擬南芥和qRT-PCR等實驗技術研究了兩個基因啟動子的調(diào)控機制以及CsSULTR1;1和CsSULTR1;2對硒、硫（Se、S）處理的響應機制,為后續(xù)開展茶樹硒營養(yǎng)調(diào)控提供理論依據(jù)。本文的主要結(jié)果如下:1.明確了CsSULTR1;1和CsSULTR1;2對Se和S的響應。在缺S加Se⁶⁺的處理下CsSULTR1;1和CsSULTR1;2都出現(xiàn)了顯著的上調(diào)表達,但加S加Se⁶⁺的處理下,CsSULTR1;1并未出現(xiàn)特殊響應,這表明CsSULTR1...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 植物與硒元素
        1.1.1 硒的存在形態(tài)
        1.1.2 植物對硒的吸收
            1.1.2.1 植物富硒能力
            1.1.2.2 植物對硒酸鹽的吸收
            1.1.2.3 植物對亞硒酸鹽的吸收
            1.1.2.4 植物對有機硒的吸收
        1.1.3 硒的轉(zhuǎn)移
        1.1.4 硒的同化和代謝
    1.2 植物硫酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白(SULTR)研究進展
        1.2.1 硫酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白家族概述
        1.2.2 擬南芥SULTR研究概述
        1.2.3 SULTR在植物硒吸收過程中的作用
    1.3 茶樹硒吸收轉(zhuǎn)運研究進展
        1.3.1 不同因素對茶樹硒吸收的影響
            1.3.1.1 硒在茶樹不同組織的分布規(guī)律
            1.3.1.2 土壤含水量對茶樹硒吸收的影響
            1.3.1.3 土壤pH對茶樹硒吸收的影響
        1.3.2 茶樹硒吸收轉(zhuǎn)運相關基因的研究
            1.3.2.1 茶樹硒酸鹽處理的轉(zhuǎn)錄組分析
            1.3.2.2 茶樹亞硒酸鹽處理的轉(zhuǎn)錄組分析
            1.3.2.3 茶樹硒吸收調(diào)控相關基因的研究
    1.4 研究的目的和意義
    1.5 研究目標與技術路線
        1.5.1 研究目標
        1.5.2 技術路線
第二章 CSSULTR1;1和CSSULTR1;2 不同硒硫處理響應分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實驗材料與試劑
        2.1.2 實驗處理
        2.1.3 RNA提取
        2.1.4 cDNA的合成
        2.1.5 實時熒光定量PCR(q RT-PCR)
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 CsSULTR1;1和CsSULTR1;2 在不加Se添加不同濃度S處理下表達情況
        2.2.2 CsSULTR1;1和CsSULTR1;2 在不加S添加不同濃度Se⁶⁺處理下表達情況
        2.2.3 CsSULTR1;1和CsSULTR1;2 在正常S供應添加不同濃度Se⁶⁺處理下表達情況
        2.2.4 CsSULTR1;1和CsSULTR1;2 在正常S供應添加不同濃度Se⁴⁺處理下表達情況
    2.3 討論
        2.3.1 CsSULTR1;1和CsSULTR1;2 在不加Se添加不同濃度S處理下表達分析
        2.3.2 CsSULTR1;1和CsSULTR1;2 在不加S添加不同濃度Se⁶⁺處理下表達分析
        2.3.3 CsSULTR1;1和CsSULTR1;2 在正常S供應添加不同濃度Se⁶⁺處理下表達分析
        2.3.4 CsSULTR1;1和CsSULTR1;2 在正常S供應添加不同濃度Se⁴⁺處理下表達分析
第三章 CSSULTR1;1和CSSULTR1;2 啟動子信號響應機制分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗材料及試劑
        3.1.2 DNA提取
        3.1.3 啟動子克隆與測序驗證
        3.1.4 啟動子順式作用元件分析
        3.1.5 啟動子接GUS表達載體構(gòu)建
        3.1.6 農(nóng)桿菌介導的擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因純合株系的篩選
        3.1.7 GUS染色
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 CsSULTR1;1和CsSULTR1;2 啟動子克隆
        3.2.2 CsSULTR1;1和CsSULTR1;2 啟動子順式作用元件分析
        3.2.3 CsSULTR1;1和CsSULTR1;2 啟動子接GUS表達載體構(gòu)建
        3.2.4 p CsSULTR1;1::GUS和 p CsSULTR1;2::GUS轉(zhuǎn)化株組織特異性分析
        3.2.5 p CsSULTR1;1::GUS轉(zhuǎn)化株在不同Se/S處理下的分析
        3.2.6 p CsSULTR1;2::GUS轉(zhuǎn)化株在不同Se/S處理下的分析
    3.3 討論
        3.3.1 CsSULTR1;1和CsSULTR1;2 啟動子順式作用元件分析
        3.3.2 p CsSULTR1;1::GUS轉(zhuǎn)化株組織特異性分析
        3.3.3 p CsSULTR1;2::GUS轉(zhuǎn)化株組織特異性分析
        3.3.4 p CsSULTR1;1::GUS轉(zhuǎn)化株在不同Se/S處理下的分析
        3.3.5 p CsSULTR1;2::GUS轉(zhuǎn)化株在不同Se/S處理下的分析
第四章 CSSULTR1;1和CSSULTR1;2 功能初步分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗材料及試劑
        4.1.2 CsSULTR1;1和CsSULTR1;2 的克隆及組織表達特異性分析
        4.1.3 亞細胞定位載體構(gòu)建
        4.1.4 過表達載體構(gòu)建
        4.1.5 農(nóng)桿菌介導的過表達載體轉(zhuǎn)化、純合株系的篩選及表達量鑒定
        4.1.6 CsSULTR1;1和CsSULTR1;2 過表達擬南芥在不同硒處理下的根長測定
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 CsSULTR1;1和CsSULTR1;2 克隆
        4.2.2 CsSULTR1;1和CsSULTR1;2 在生長期和休眠期不同組織表達分析
        4.2.3 CsSULTR1;1和CsSULTR1;2 在煙草葉肉細胞中的亞細胞定位
        4.2.4 CsSULTR1;1和CsSULTR1;2 在水稻原生質(zhì)體中的亞細胞定位
        4.2.5 CsSULTR1;1 過表達轉(zhuǎn)基因擬南芥在不同濃度Se處理下的根長測定
        4.2.6 CsSULTR1;2 過表達轉(zhuǎn)基因擬南芥在不同濃度Se處理下的根長測定
    4.3 討論
        4.3.1 CSSULTR1;1和CSSULTR1;2 在生長期和休眠期不同組織表達分析
        4.3.2 CSSULTR1;1和CSSULTR1;2 的亞細胞定位結(jié)果分析
        4.3.3 CsSULTR1;1和CsSULTR1;2 過表達轉(zhuǎn)基因擬南芥在不同濃度Se處理下的根長測定
第五章 結(jié)論
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻
附錄 A
致謝
作者簡歷



本文編號：4019471