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甘藍(lán)型油菜二酰甘油;D(zhuǎn)移酶(BnDGAT3)基因克隆與表達(dá)研究

發(fā)布時(shí)間:2024-12-22 03:22
  在Kennedy途徑中,甘油-3-磷酸;D(zhuǎn)移酶(GPAT)、溶血磷脂酸;D(zhuǎn)移酶(LPAT)以及二酰甘油;D(zhuǎn)移酶(DGAT)依次將脂肪酸組裝到甘油上,形成三酰甘油。DGAT是Kennedy途徑中僅有的限速酶,在不同器官如葉片、花瓣、果實(shí)、花粉囊以及發(fā)育的種子等中廣泛存在,且在發(fā)育的種子和花瓣中的活性較高。但是對(duì)于油菜DGAT基因家族的研究很少,尤其是尚未見關(guān)于BnDGAT3基因的報(bào)道。本研究以高、低含油量?jī)蓚(gè)甘藍(lán)型油菜品系為背景,通過同源比對(duì),在油菜數(shù)據(jù)庫共發(fā)現(xiàn)6個(gè)同源片段,分別定位在A08和C08染色體上,其中A亞染色體上有4個(gè),分別命名為:BnDGAT3a、BnDGAT3ax1、BnDGAT3ax2、BnDGAT3ax3,C亞染色體組上有2個(gè),分別命名為:Bn DGAT3c-1、BnDGAT3c-2。通過同源克隆,本研究得到了一條A08染色體上長(zhǎng)為1071bp的完整CDS,該基因共編碼356個(gè)氨基酸。通過對(duì)氨基酸序列進(jìn)行理化性質(zhì)分析可知:該蛋白為穩(wěn)定性蛋白,穩(wěn)定性指數(shù)為39.01,脂肪族氨基酸系數(shù)為74.41,蛋白表現(xiàn)為親水性,無跨膜結(jié)構(gòu),為非膜結(jié)合蛋白。通過對(duì)該片段進(jìn)行酵母和擬...

【文章頁數(shù)】:59 頁

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

圖1-1三酰甘油合成途徑[5]Fig.1-1Synthesisoftriacylglycerol

圖1-1三酰甘油合成途徑[5]Fig.1-1Synthesisoftriacylglycerol

調(diào)節(jié)油脂的積累,在Kennedy途徑中,各;D(zhuǎn)移酶依次將脂肪酸組裝到而形成三酰甘油,若增加各;D(zhuǎn)移酶:甘油-3-磷酸;D(zhuǎn)移酶(GPAT)、酸;D(zhuǎn)移酶(LPAT)以及二酰甘油;D(zhuǎn)移酶(DGAT)的含量將有可能增的代謝作用,有利于提高油脂的含量。1植物三酰甘油組....


圖2-1WB06總RNA電泳圖

圖2-1WB06總RNA電泳圖

RNA(圖2-1),以物,擴(kuò)增出長(zhǎng)度約其用連接酶連接到,獲得陽性重組子。名為BnDGAT3。


圖2-2BnDGAT3PCR電泳圖

圖2-2BnDGAT3PCR電泳圖

提取甘藍(lán)型油菜WB06的總RNA(圖2-1),以反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板,利用AtDGAT3基因同源序列設(shè)計(jì)的引物,擴(kuò)增出長(zhǎng)度約為1000bp的基因片段(圖2-2)利用試劑盒純化回收該片段,將其用連接酶連接到T載體上,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌感受中,經(jīng)菌落PCR鑒....


圖2-3BnDGAT3菌落PCR鑒定電泳圖

圖2-3BnDGAT3菌落PCR鑒定電泳圖

提取甘藍(lán)型油菜WB06的總RNA(圖2-1),以反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板,利用AtDGAT3基因同源序列設(shè)計(jì)的引物,擴(kuò)增出長(zhǎng)度約為1000bp的基因片段(圖2-2)利用試劑盒純化回收該片段,將其用連接酶連接到T載體上,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌感受中,經(jīng)菌落PCR鑒....



本文編號(hào):4019353

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