卵菌綱隸屬于鞭毛菌亞門,分為4個(gè)目(水霉目、霜霉目、鏈壺菌目、水節(jié)霉目),其中霜霉目的腐霉菌、疫霉菌、霜霉菌等均是引起植物病害的主要致病菌。腐霉菌已知有120余種,大多數(shù)是腐生性植物病原菌,主要通過(guò)土壤傳播并具有廣泛的宿主范圍。它們通常侵染幼苗的根和種子,并引起苗期前后的猝倒,種子腐爛,根腐和果實(shí)腐爛等癥狀,造成嚴(yán)重的農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)損失。瓜果腐霉菌(Pythium aphanidermatum)能引物多種農(nóng)作物的猝倒病和果實(shí)、根部腐爛病,寄主范圍很廣,可以侵染玉米引起莖腐,侵染黃瓜、番茄等引起猝倒病、果腐,在苗期發(fā)病尤為嚴(yán)重,常造成大量死苗。終極腐霉(Pythiumultimum)是一種常見(jiàn)的土傳病原菌也是最有致病力的腐霉屬之一,終極腐霉能侵染大量的經(jīng)濟(jì)作物,包括小麥、玉米、大豆、馬鈴薯、番茄等。目前腐霉的分子檢測(cè)方法有普通PCR、Real-timePCR檢測(cè)技術(shù)均需要昂貴的儀器,檢測(cè)成本高,不利于在基層大范圍推廣。而環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)是一種新開(kāi)發(fā)的分子檢測(cè)技術(shù),其以強(qiáng)特異性、高靈敏度、快速性和低檢測(cè)成本的優(yōu)勢(shì),...

【文章頁(yè)數(shù)】：110 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
緒論
上篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 植物病原真菌和卵菌的分子檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展
        1. 病原真菌分子檢測(cè)技術(shù)
            1.1 普通PCR分子檢測(cè)技術(shù)
            1.2 多重PCR分子檢測(cè)技術(shù)
            1.3 Real-time PCR分子檢測(cè)技術(shù)
            1.4 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)分子檢測(cè)技術(shù)
            1.5 膠體金分子檢測(cè)技術(shù)
            1.6 高通量檢測(cè)技術(shù)
        2. 植物病原真菌檢測(cè)技術(shù)現(xiàn)存問(wèn)題與應(yīng)用前景
    第二章 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的研究進(jìn)展
        1. 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)引物設(shè)計(jì)和反應(yīng)原理
            1.1 LAMP技術(shù)引物設(shè)計(jì)原理
            1.2 LAMP反應(yīng)原理
        2. LAMP技術(shù)的檢測(cè)方法及優(yōu)缺點(diǎn)
        3. 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)在植物病原微生物檢測(cè)中的應(yīng)用
            3.1 細(xì)菌的檢測(cè)
            3.2 真菌的檢測(cè)
            3.3 病毒的檢測(cè)
            3.4 線蟲(chóng)的檢測(cè)
        4. 展望
    第三章 卵菌RxLR效應(yīng)子研究進(jìn)展及無(wú)序蛋白的特征與生物學(xué)功能
        1. 卵菌RxLR效應(yīng)子研究進(jìn)展
        2. 無(wú)序蛋白的特征與生物學(xué)功能
下篇 研究?jī)?nèi)容
    第一章 瓜果腐霉菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的研究
        1 材料與方法
            1.1 供試菌株
            1.2 試劑與儀器
            1.3 基因組DNA提取
            1.4 瓜果腐霉菌的鑒定
            1.5 瓜果腐霉靶標(biāo)基因篩選與引物設(shè)計(jì)
            1.6 瓜果腐霉LAMP反應(yīng)體系及條件的優(yōu)化
            1.7 瓜果腐霉LAMP特異性檢測(cè)
            1.8 靈敏度檢測(cè)
            1.9 人工接種瓜果腐霉并對(duì)植株的發(fā)病組織檢測(cè)
        2 結(jié)果與分析
            2.1 鑒定瓜果腐霉的ITS序列的引物設(shè)計(jì)
            2.2 鑒定瓜果腐霉的序列比對(duì)結(jié)果
            2.3 瓜果腐霉靶標(biāo)基因的篩選和LAMP特異性引物
            2.4 LAMP反應(yīng)體系的優(yōu)化
            2.5 LAMP檢測(cè)方法的特異性
            2.6 LAMP檢測(cè)方法的靈敏度
            2.7 LAMP方法在發(fā)病植株中的檢測(cè)
        3 討論
    第二章 終極腐霉菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的研究
        1. 材料和方法
            1.1 供試菌株
            1.2 實(shí)驗(yàn)所需試劑、儀器
            1.3 基因組DNA提取
            1.4 終極腐霉菌的鑒定
            1.5 終極腐霉靶標(biāo)基因篩選與引物設(shè)計(jì)
            1.6 可視化的終極腐霉LAMP反應(yīng)體系的建立
            1.7 終極腐霉LAMP引物特異性評(píng)估實(shí)驗(yàn)
            1.8 終極腐霉LAMP引物靈敏度評(píng)估實(shí)驗(yàn)
            1.9 終極腐霉菌侵染寄主實(shí)驗(yàn)
        2. 結(jié)果
            2.1 鑒定終極腐霉腐霉的ITS序列的引物設(shè)計(jì)
            2.2 鑒定終極腐霉的序列比對(duì)結(jié)果
            2.3 終極腐霉LAMP靶標(biāo)基因的篩選和引物序列
            2.4 LAMP檢測(cè)方法的特異性
            2.5 終極腐霉LAMP引物靈敏度評(píng)估實(shí)驗(yàn)
            2.6 LAMP方法在發(fā)病植株中的檢測(cè)
        3. 討論
    第三章 大豆疫霉菌RxLR效應(yīng)子中無(wú)序結(jié)構(gòu)的功能研究
        1. 材料和方法
            1.1 序列來(lái)源
            1.2 無(wú)序蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
            1.3 氨基酸組成分析
            1.4 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        2. 結(jié)果與分析
            2.1 RxLR蛋白含有大量的無(wú)序結(jié)構(gòu)
            2.2 RxLR效應(yīng)子富含長(zhǎng)片段的無(wú)序結(jié)構(gòu)區(qū)段
            2.3 氨基酸組成特異性
            2.4 RxLR-dEER區(qū)富含無(wú)序結(jié)構(gòu)
            2.5 無(wú)序結(jié)構(gòu)在W/Y/L元件分布少
            2.6 α-MoRFs廣泛分布在RxLR蛋白C端區(qū)
            2.7 無(wú)序結(jié)構(gòu)影響效應(yīng)分子誘導(dǎo)細(xì)胞死亡活性
        3. 討論
本論文結(jié)論和創(chuàng)新點(diǎn)
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果目錄



本文編號(hào)：4038900