枯萎病是一類危害嚴(yán)重的土傳類病害,其主要的致病菌是尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）,并且可以在多種植物中誘發(fā)枯萎病�？菸】梢园l(fā)生在植物整個生長期間,危害嚴(yán)重,目前尚無有效的方法防治枯萎病。為了通過改變土壤中微生物的營養(yǎng)環(huán)境、優(yōu)化微生物群落結(jié)構(gòu)、提高土壤中微生物多樣性而達(dá)到抑制枯萎病侵染植株,達(dá)到降低枯萎病發(fā)生的目的,同時研發(fā)生物誘抗分子和生防菌作為生防制劑,本研究在接種枯萎病病原菌條件下,開展了生防制劑使用效果和防治枯萎病的機(jī)理研究。主要實(shí)驗研究結(jié)果如下:（1）本文首先選擇殼聚糖和海藻多糖,采用雙氧水、氫氧化鈉等手段制備其寡糖,具體條件為:殼聚糖經(jīng)鹽酸和雙氧水在60℃下處理6小時后調(diào)節(jié)pH,三倍體積乙醇沉淀后烘干制得樣品;海藻多糖經(jīng)雙氧水在90℃下處理5小時后調(diào)節(jié)pH,50℃烘干制得樣品;地衣芽孢桿菌A2-10經(jīng)搖瓶優(yōu)化及單因素實(shí)驗優(yōu)化出最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基后經(jīng)過20 L發(fā)酵罐優(yōu)化發(fā)酵參數(shù),最后經(jīng)過500 L發(fā)酵罐中試放大得到聚谷氨酸,最終聚谷氨酸的發(fā)酵條件為蛋白胨2%,無水氯化鈣0.2%,麥芽糊精1%,無水硫酸鎂0.1%,氯化鈉0.5%,谷氨酸鈉5.4%,pH經(jīng)氨水調(diào)節(jié)... 

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 生物誘抗分子簡介
    1.2 生防菌簡介
    1.3 植物免疫系統(tǒng)的簡介
    1.4 枯萎病簡介
    1.5 論文的目的及意義
    1.6 本課題實(shí)驗技術(shù)路線
第2章 寡糖類誘抗分子的制備
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗材料
        2.2.1 實(shí)驗樣品
        2.2.2 實(shí)驗溶液配制
        2.2.3 實(shí)驗試劑
        2.2.4 實(shí)驗設(shè)備
    2.3 實(shí)驗方法
        2.3.1 菌種活化
        2.3.2 搖瓶發(fā)酵指標(biāo)的測定
        2.3.3 殼寡糖的制備及分子量的測定
        2.3.4 海藻寡糖制備及分子量的測定
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 聚谷氨酸的發(fā)酵及寡聚谷氨酸的制備
        2.4.2 殼寡糖的制備及分子量測定
        2.4.3 海藻寡糖的制備及分子量測定
    2.5 本章小結(jié)
第3章 生防菌劑的制備
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗材料
        3.2.1 實(shí)驗樣品
        3.2.2 實(shí)驗溶液配制
        3.2.3 實(shí)驗試劑
        3.2.4 實(shí)驗設(shè)備
    3.3 實(shí)驗方法
        3.3.1 菌種活化
        3.3.2 種子液的培養(yǎng)
        3.3.3 固體發(fā)酵培養(yǎng)基的準(zhǔn)備及滅菌
        3.3.4 固體發(fā)酵配方的單因素優(yōu)化
        3.3.5 固體發(fā)酵的正交試驗
        3.3.6固體發(fā)酵中試放大實(shí)驗
        3.3.7 真菌孢子粉的保藏及收集
        3.3.8 發(fā)酵水平及指標(biāo)測定
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 2種真菌固體發(fā)酵配方的優(yōu)化
        3.4.2 真菌孢子粉的收集及保藏
    3.5 本章小結(jié)
第4章 基于葉片侵染的防效初篩
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗材料
        4.2.1 實(shí)驗樣品
        4.2.2 實(shí)驗溶液配制
        4.2.3 實(shí)驗試劑
        4.2.4 實(shí)驗設(shè)備
    4.3 實(shí)驗方法
        4.3.1 病原菌的分離純化
        4.3.2 病害菌的鑒定
        4.3.3 尖鐮孢菌的培養(yǎng)
        4.3.4 葉片侵染實(shí)驗材料及侵染方式的篩選
        4.3.5 尖鐮孢菌侵染的正交試驗優(yōu)化
        4.3.6 葉片侵染實(shí)驗的生防效果分析
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 分離純化的病害菌C1-1 菌落及菌絲體鏡檢照片
        4.4.2 病害菌的鑒定
        4.4.3 實(shí)驗葉片材料的篩選
        4.4.4 葉片侵染方式的篩選
        4.4.5 尖鐮孢菌侵染的正交試驗優(yōu)化
        4.4.6 葉片侵染實(shí)驗的生防效果分析
    4.5 本章小結(jié)
第5章 誘抗分子及生防菌效應(yīng)分析
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗材料
        5.2.1 實(shí)驗樣品
        5.2.2 實(shí)驗溶液配制
        5.2.3 實(shí)驗試劑
        5.2.4 實(shí)驗設(shè)備
    5.3 實(shí)驗方法
        5.3.1 擬南芥的培養(yǎng)
        5.3.2 病原菌的侵染及生防實(shí)驗方法的建立
        5.3.3 免疫系統(tǒng)關(guān)鍵基因位點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄表達(dá)分析
        5.3.4 生防菌對根際土壤菌群結(jié)構(gòu)的影響
    5.4 結(jié)果與討論
        5.4.1 擬南芥的培養(yǎng)
        5.4.2擬南芥侵染實(shí)驗
        5.4.3 植物免疫系統(tǒng)關(guān)鍵位點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄分析
        5.4.4 土壤總DNA的提取
        5.4.5 土壤中總DNA的 PCR擴(kuò)增
        5.4.6 土壤中細(xì)菌的菌群群落的分析
        5.4.7 土壤中真菌的菌群群落的分析
    5.5 本章小結(jié)
第6章 總結(jié)與展望
    6.1 總結(jié)
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
在學(xué)期間主要科研成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]生防菌B579發(fā)酵條件優(yōu)化及生防效果的研究[D]. 張艷春.天津科技大學(xué) 2011



本文編號：3714788