發(fā)布時間：2022-12-09 01:33

　　油棕莖干基腐病,又名油棕黑腐病是一種世界性的病害,油棕莖干基腐病病原菌為奇異根串珠霉Thielaviopsis paradoxa,主要侵染油棕的果實(shí)、葉片和莖干造成油棕的落果與死亡,進(jìn)而對全球的油棕產(chǎn)業(yè)造成一定的影響。目前針對該病害主要采用化學(xué)防治與物理防治方法,化學(xué)防治用藥量大、防治成本高且污染環(huán)境,物理防治主要是砍掉染病株消毒后集中焚燒,造成損失較大且對環(huán)境有害,更容易引發(fā)火災(zāi)。因此油棕莖干基腐病的綠色防控需要另辟蹊徑,開發(fā)新技術(shù)�？咕模ˋntimicrobial peptides,AMPs）是一類具有廣譜抑菌活性的小分子多肽,廣泛的分布在自然界的各種生物體中,因其高效、環(huán)保、不易產(chǎn)生抗性且對人畜無害而被廣泛應(yīng)用在植物病害防治領(lǐng)域中。本論文通過生物信息學(xué)技術(shù)與基因工程技術(shù)在油棕全基因組范圍內(nèi)進(jìn)行抗菌肽基因的預(yù)測、篩選與抑菌活性分析,獲得具有廣譜、高效抑菌作用的油棕抗菌肽。根據(jù)油棕莖干基腐病的發(fā)病特點(diǎn),將對病原菌廣譜、高效的油棕抗菌肽轉(zhuǎn)化到擬南芥中并穩(wěn)定的表達(dá),為油棕莖干基腐病的防治提供了新途徑,主要研究結(jié)果如下:（1）以胚誘導(dǎo)的方法成功培養(yǎng)出89棵無菌油棕苗,誘導(dǎo)成活率為4.57... 

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 油棕莖干基腐病概述
        1.1.1 油棕莖干基腐病的分布特點(diǎn)與發(fā)病癥狀
        1.1.2 奇異根串珠霉分類地位與特征
        1.1.3 根串珠霉的寄主范圍
        1.1.4 根串珠霉的國內(nèi)外研究進(jìn)展
    1.2 植物抗菌肽的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 抗菌肽及其發(fā)病機(jī)制相關(guān)(PR)防御蛋白
        1.2.2 抗菌肽主要類別
        1.2.3 抗菌肽的作用機(jī)制
        1.2.4 抗菌肽的數(shù)據(jù)庫
        1.2.5 抗菌肽的生產(chǎn)與應(yīng)用
    1.3 植物轉(zhuǎn)脂蛋白研究現(xiàn)狀
    1.4 油棕莖干基腐病防治研究進(jìn)展
    1.5 本研究的目的、意義和主要研究內(nèi)容
    1.6 技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 油棕的組織培養(yǎng)與真菌病害的病原鑒定的試驗(yàn)材料與方法
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 試驗(yàn)方法
    2.2 油棕抗菌肽的篩選與原核表達(dá)研究試驗(yàn)材料與方法
        2.2.1 試驗(yàn)材料
        2.2.2 試驗(yàn)方法
    2.3 油棕新型抗菌肽8-1 的原核優(yōu)化表達(dá)與活性檢測的實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.3.2 試驗(yàn)方法
    2.4 轉(zhuǎn)油棕抗菌肽基因擬南芥抑制莖干基腐病的實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.4.2 試驗(yàn)方法
3 結(jié)果與分析
    3.1 油棕的組織培養(yǎng)與真菌病害的病原鑒定
        3.1.1 油棕組培苗的獲得
        3.1.2 油棕莖干基腐病病原菌的鑒定
        3.1.3 油棕葉炭疽病原菌的鑒定
    3.2 油棕抗菌肽的篩選與原核表達(dá)研究
        3.2.1 油棕RNA的提取
        3.2.2 油棕cDNA的合成
        3.2.3 油棕抗菌肽基因的克隆
        3.2.4 油棕抗菌肽的表達(dá)與純化
        3.2.5 油棕抗菌肽的抑真菌活性測定
        3.2.6 油棕抗菌肽的抑細(xì)菌活性測定
    3.3 油棕新型抗菌肽8-1 的原核優(yōu)化表達(dá)與活性檢測
        3.3.1 油棕新型抗菌肽8-1 分離、鑒定與分子進(jìn)化分析
        3.3.2 油棕新型抗菌肽8-1 的表達(dá)與純化
        3.3.3 油棕新型抗菌肽8-1 的分子模型構(gòu)建與分析
        3.3.4 油棕新型抗菌肽8-1 的化學(xué)合成
        3.3.5 油棕新型抗菌肽8-1 的抑菌活性檢測
    3.4 轉(zhuǎn)油棕抗菌肽基因擬南芥抑制莖干基腐病研究
        3.4.1 轉(zhuǎn)基因載體構(gòu)建
        3.4.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥T_3 代株系的獲得
        3.4.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥的分子檢測
        3.4.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥的抑菌性鑒定
4 討論
    4.1 油棕的組織培養(yǎng)與真菌病害的病原鑒定
    4.2 油棕抗菌肽的篩選與原核表達(dá)
    4.3 油棕新型抗菌肽8-1 的原核優(yōu)化表達(dá)與活性分析
    4.4 轉(zhuǎn)油棕抗菌肽基因擬南芥抑制莖干基腐病研究
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蛹蟲草中異源表達(dá)天蠶菌素抗菌肽[J]. 黃開華,吳瑩瑩,唐慶九,李燕,茅文俊,候貝貝,汪瀅.  食用菌學(xué)報(bào). 2018(04)
[2]安徽省煙草根黑腐病病原鑒定及生物學(xué)特性分析[J]. 許大鳳,王文鳳,朱啟發(fā),汪文杰,周本國,王芳,檀根甲.  煙草科技. 2018(08)
[3]thanatin串聯(lián)抗菌肽原核表達(dá)研究[J]. 劉偉,李清海,劉仁虎.  浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2018(05)
[4]抗菌肽在洗發(fā)液中防腐效能及安全性評價初探[J]. 桂銀雪,楊娜,滕達(dá),王秀敏,毛若雨,郝婭,滕國新,王建華.  生物技術(shù)通報(bào). 2018(10)
[5]農(nóng)桿菌介導(dǎo)木本植物遺傳轉(zhuǎn)化的研究進(jìn)展[J]. 王棟鑫,彭棣,張爽.  北方園藝. 2018(02)
[6]油棕組培苗Mantled變異研究進(jìn)展[J]. 張大鵬,王永,石鵬,金龍飛,曹紅星.  熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(12)
[7]煙草根黑腐病菌ISSR標(biāo)記的遺傳多樣性分析[J]. 竇彥霞,徐林,馬冠華,李六英,張世渠.  煙草科技. 2017(11)
[8]抗菌肽在免疫防御和抗腫瘤中的作用[J]. 張福梅,李明生.  國外醫(yī)藥(抗生素分冊). 2017(06)
[9]棘胸蛙抗菌肽Spinosan-C的串聯(lián)表達(dá)與活性檢測[J]. 劉悅,詹忠根,朱兵,鄭榮泉,程宏毅,聶作明.  生物工程學(xué)報(bào). 2018(01)
[10]細(xì)粒棘球絳蟲轉(zhuǎn)醛醇酶基因的克隆、表達(dá)及其潛在免疫診斷價值的研究[J]. 辛奇,景濤,宋曉霞,高海軍,孫旭東,呂薇,Nabil Pervaiz,魯俊.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2017(04)

博士論文
[1]油菜新型抗菌肽的篩選和一種油菜菌核病防治新策略的設(shè)計(jì)[D]. 曹慧慧.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2015
[2]人工合成抗菌肽抑制棉花黃萎病菌的機(jī)制及應(yīng)用研究[D]. 倪密.浙江大學(xué) 2012

碩士論文
[1]抗菌肽Mytichitin-A和Plantaricin ZJ5的重組表達(dá)純化及活性鑒定[D]. 高曉芳.天津科技大學(xué) 2016
[2]超量表達(dá)果蠅Drosomycin基因提高植株的抗病能力[D]. 任小東.西南大學(xué) 2012



本文編號：3714543