水稻齒葉矮縮病是由水稻齒葉矮縮病毒（rice ragged stunt virus,RRSV）引起的病害,它在水稻分蘗前期發(fā)病會(huì)引起稻株無(wú)法抽穗;分蘗后期發(fā)病會(huì)導(dǎo)致稻株生長(zhǎng)速度減慢,抽穗不完全,谷粒不充實(shí),嚴(yán)重影響稻米產(chǎn)量,是我國(guó)及其他東南亞國(guó)家一種重要的水稻病害。RRSV屬于呼腸孤病毒科（Reoviridae）,水稻病毒屬（Oryzavirus）,主要由水稻害蟲褐飛虱以持久性增殖方式傳播。RRSV含有10條dsRNA,共編碼11種蛋白,包括8種結(jié)構(gòu)蛋白和3種非結(jié)構(gòu)蛋白。其中S10片段編碼的蛋白Pns10,參與病毒復(fù)制工廠（病毒原質(zhì)）的形成。有研究表明RRSV在Pns10缺失的情況下無(wú)法形成正常復(fù)制工廠,從而導(dǎo)致病毒復(fù)制、侵染、傳播能力下降。研究Pns10與褐飛虱的蛋白互作,揭示病毒在侵染和復(fù)制過程中與宿主之間的相互作用機(jī)理,有助于防治水稻齒葉矮縮病。本研究利用酵母雙雜交技術(shù),成功構(gòu)建了褐飛虱全蟲的酵母文庫(kù),篩選出與Pns10 互作的 MD-2-related lipid-recognition protein（ML）、Sorting and assembly machinery co... 

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 褐飛虱研究概況
        1.1.1 褐飛虱及其危害
        1.1.2 褐飛虱的防治
    1.2 水稻齒葉矮縮病毒(RRSV)的研究進(jìn)展
        1.2.1 RRSV特征及分類
        1.2.2 RRSV寄主及傳播介體
        1.2.3 RRSV基因組及編碼蛋白
    1.3 酵母雙雜交系統(tǒng)在研究中的應(yīng)用
        1.3.1 酵母雙雜交系統(tǒng)的原理
        1.3.2 酵母雙雜交系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)
        1.3.3 酵母雙雜交系統(tǒng)在病毒學(xué)中的應(yīng)用
    1.4 GST pull-down技術(shù)研究進(jìn)展
    1.5 研究的目的及科學(xué)意義
第二章 酵母雙雜交文庫(kù)構(gòu)建
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.2.1.1 褐飛虱
            2.2.1.2 酵母雙雜交載體及菌株
            2.2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑與工具
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.2.1 褐飛虱總RNA提取及鑒定
            2.2.2.2 cDNA的第一條鏈合成
            2.2.2.3 cDNA的第二條鏈合成
            2.2.2.4 雙鏈cDNA的柱純化
            2.2.2.5 Y187酵母感受態(tài)細(xì)胞的制備
            2.2.2.6 酵母感受態(tài)轉(zhuǎn)化及文庫(kù)收集
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 酵母雙雜交文庫(kù)雙鏈cDNA的合成與純化
        2.3.2 酵母雙雜交文庫(kù)轉(zhuǎn)化
        2.3.3 酵母雙雜交文庫(kù)收集
    2.4 討論
第三章 利用RRSV Pns10篩選褐飛虱全蟲文庫(kù)
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            3.2.1.1 RRSV病毒
            3.2.1.2 酵母雙雜交載體及菌株
            3.2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑與工具
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            3.2.2.1 cDNA的合成
            3.2.2.2 目的基因克隆與連接
            3.2.2.3 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化Y2H Gold菌株
            3.2.2.4 誘餌菌株檢測(cè)毒性和自激活效應(yīng)
            3.2.2.5 誘餌菌株篩選酵母cDNA文庫(kù)
            3.2.2.6 候選互作蛋白鑒定
            3.2.2.7 生物信息學(xué)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 誘餌載體構(gòu)建
        3.3.2 誘餌毒性與自激活檢測(cè)
        3.3.3 褐飛虱與RRSV Pns10互作蛋白的篩選
        3.3.4 陽(yáng)性克隆鑒定
        3.3.5 候選互作蛋白的生物信息學(xué)分析
    3.4 討論
第四章 NlML與Pns10互作驗(yàn)證
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            4.2.1.1 原核表達(dá)載體及菌株
            4.2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑與工具
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            4.2.2.1 序列全長(zhǎng)獲取
            4.2.2.2 NlML基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建
            4.2.2.3 NlML誘導(dǎo)表達(dá)
            4.2.2.4 Western blotting驗(yàn)證蛋白表達(dá)
            4.2.2.5 NlML融合蛋白大量表達(dá)及回收純化
            4.2.2.6 GST pull-down
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 NlML序列分析
        4.3.2 原核表達(dá)載體構(gòu)建
        4.3.3 誘導(dǎo)表達(dá)
        4.3.4 NlML回收及抗體制備
        4.3.5 GST pull-down
    4.4 討論
第五章 NlML功能分析
    5.1 引言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            5.2.2.1 NlML表達(dá)模式分析
            5.2.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            5.2.2.3 RNA干擾
                5.2.2.3.1 雙鏈RNA合成
                5.2.2.3.2 顯微注射dsRNA
            5.2.2.4 帶毒褐飛虱病毒量測(cè)定
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 NlML表達(dá)模式分析
        5.3.2 RNA干擾效果
        5.3.3 NlML與病毒復(fù)制增殖
    5.4 討論
第六章 總結(jié)與展望
    6.1 總結(jié)
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
在讀期問發(fā)表的論文
致謝



本文編號(hào)：3683521