甘蔗（Saccharum spp.hybrids）是最重要的糖類作物,甘蔗花葉病是一種世界性的甘蔗主要病害,影響甘蔗產(chǎn)量及含糖量。該病有多種病原,其中高粱花葉病毒（Sorghum mosaic virus,SrMV）是近十多年來我國蔗區(qū)甘蔗花葉病的優(yōu)勢病原。有關該病的研究集中在病原菌分布情況、致病機制、檢測方法以及通過沉默病毒蛋白基因改良抗病性的研究,但對甘蔗受花葉病毒侵染過程相關信號通路、差異表達基因與蛋白、互作基因與蛋白等還未深入研究。miRNA作為植物生長發(fā)育與抵御逆境的關鍵調節(jié)因子,能夠通過調控靶基因的表達參與植物的各項生命活動。因此,本研究利用高通量測序和生物信息學技術,首次構建了甘蔗抗病和感病基因型受SrMV侵染后的miRNA富集文庫;根據(jù)miRNA表達豐度的變化,鑒定SrMV誘導的差異表達miRNA及其靶基因;通過熒光定量PCR（qRT-PCR）及在本氏煙（Nicotiana tabacum）中瞬時過表達miRNA,驗證差異表達miRNA的功能,揭示其在SrMV侵染下調控的分子機理,并進行抗病相關基因挖掘和鑒定,以期為利用基因工程技術創(chuàng)制抗病材料與培育抗花葉病品種提供抗病... 

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1 甘蔗花葉病
        1.1 甘蔗花葉病的發(fā)生與流行
        1.2 甘蔗花葉病的病原物
        1.3 SrMV的基因組結構
        1.4 花葉病毒的系統(tǒng)侵染
    2 miRNA的研究現(xiàn)狀
        2.1 miRNA的概述
        2.2 miRNA的合成及作用機制
        2.3 植物miRNA研究現(xiàn)狀
        2.4 甘蔗miRNA研究現(xiàn)狀
        2.5 高通量測序鑒定miRNA及其靶基因
    3 植物病程相關基因PR10研究進展
    4 本研究的目的及意義
    5 技術路線
第二章 SrMV侵染前后甘蔗miRNA數(shù)據(jù)集的構建與分析
    1 材料與方法
        1.1 植物材料及處理
        1.2 總RNA提取及質量檢測
        1.3 基因組DNA去除及第一鏈cDNA的合成
        1.4 小RNA文庫的構建、測序
        1.5 小RNA數(shù)據(jù)集的生物信息學分析
    2 結果與分析
        2.1 總RNA的質量檢測
        2.2 小RNA測序數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
        2.3 小RNA序列的比對清理
        2.4 miRNA分析
        2.5 miRNA靶基因的預測
        2.6 差異表達miRNA靶基因的注釋
    3 討論
第三章 差異表達miRNA及其靶基因的主要功能分析
    1 材料與方法
        1.1 植物材料的準備
        1.2 cDNA的合成
        1.3 引物設計
        1.4 qRT-PCR表達分析
        1.5 miRNA前體的克隆
        1.6 甘蔗miRNA瞬時表達分析
    2 結果與分析
        2.1 miRNA及其靶基因的定量引物特異性分析
        2.2 miRNA表達量數(shù)據(jù)可靠性分析
        2.3 候選miRNA及其靶基因的表達分析
        2.4 甘蔗miRNA前體的克隆
        2.5 甘蔗miRNA的瞬時表達分析
    3 討論
        3.1 miRNA表達量測序結果準確性分析
        3.2 miRNA及其靶基因的qRT-PCR分析
        3.3 miRNA的煙草瞬時表達分析
第四章 甘蔗病程相關蛋白基因ScPR10的克隆與鑒定
    1 材料與方法
        1.1 植物材料及處理
        1.2 總RNA提取及質量檢測
        1.3 基因組DNA的去除及cDNA的合成
        1.4 甘蔗ScPR10基因的克隆及序列分析
        1.5 甘蔗ScPR10基因表達模式分析
        1.6 甘蔗ScPR10蛋白亞細胞定位分析
        1.7 甘蔗ScPR10瞬時表達分析
    2 結果與分析
        2.1 甘蔗ScPR10基因的克隆及序列分析
        2.2 甘蔗ScPR10基因表達模式分析
        2.3 甘蔗ScPR10蛋白亞細胞定位分析
        2.4 甘蔗ScPR10基因瞬時表達分析
    3 討論
第五章 結論與展望
    1 結論
    2 特色與創(chuàng)新點
    3 展望
參考文獻
讀學位期間的學術論文與研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[3]水稻抗黑條矮縮病相關miRNA鑒定及功能分析[D]. 李艷舞.南京師范大學 2015
[4]甘蔗受黑穗病菌脅迫下microRNA差異表達及其靶基因功能分析[D]. 張玉葉.福建農林大學 2015
[5]基于高通量測序的中國甜柿microRNAs鑒定及分析[D]. 羅玉潔.華中農業(yè)大學 2014
[6]利用高通量測序技術鑒定棉纖維發(fā)育相關miRNAs及其靶基因[D]. 南文智.西北農林科技大學 2013
[7]水稻硫酸鹽轉運蛋白OsSultr1；1基因功能的研究[D]. 董婷.山東大學 2010
[8]植物NPR1及NPR1-like基因的克隆與功能分析[D]. 張穎.山東農業(yè)大學 2008
[9]葉綠體核糖體蛋白PSRP-1部分cDNA序列的克隆[D]. 袁旭.四川大學 2001



本文編號：3683419