南方水稻黑條矮縮病毒（Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV）是一種經(jīng)由遷飛性昆蟲白背飛虱（Sogatella furcifera）以持久性循回增殖型方式傳播的病毒。SRBSDV入侵白背飛虱體內(nèi)后,需要借助介體體內(nèi)相關(guān)蛋白來完成病毒基質(zhì)的合成,進(jìn)而得以復(fù)制和增殖。研究表明,SRBSDV編碼的非結(jié)構(gòu)蛋白P5-1是病毒基質(zhì)的重要組份。因此,為了探索蟲體內(nèi)與病毒P5-1互作的蛋白組份及其在病毒復(fù)制中的功能,本文以病毒P5-1作為誘餌蛋白,采用酵母雙雜交技術(shù)對(duì)白背飛虱的cDNA文庫進(jìn)行篩選,并得到了2個(gè)與P5-1互作的蛋白:核糖體蛋白L12（ribosomal protein L12）與烯醇酶（Enolase）。之后,經(jīng)由PCR擴(kuò)增得到這兩個(gè)蛋白的基因全長(zhǎng)序列,通過酵母雙雜交與雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn),證實(shí)了P5-1與它們的互作關(guān)系。進(jìn)一步地,通過RT-qPCR檢測(cè)分析了這兩個(gè)蛋白編碼基因在帶毒和無毒白背飛虱體內(nèi)表達(dá)水平的差異,為深入解析介體蛋白在病毒基質(zhì)形成過程中的作用奠定了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1、分析了病毒非結(jié)構(gòu)蛋白P5-1的結(jié)構(gòu)及功能... 

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略詞及中英文對(duì)照
1 前言
    1.1 南方水稻黑條矮縮病毒的研究現(xiàn)狀
        1.1.1 病害癥狀
        1.1.2 病毒的寄主
        1.1.3 傳播介體
    1.2 南方水稻黑條矮縮病毒與傳毒介體白背飛虱之間的互作關(guān)系
        1.2.1 病毒基因組結(jié)構(gòu)及其編碼的蛋白功能
        1.2.2 病毒與白背飛虱互作研究現(xiàn)狀
    1.3 蛋白互作相關(guān)研究技術(shù)及進(jìn)展
        1.3.1 酵母雙雜交技術(shù)
        1.3.2 雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)
        1.3.3 其它技術(shù)
    1.4 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 水稻
        2.1.2 南方水稻黑條矮縮病毒
        2.1.3 白背飛虱
        2.1.4 白背飛虱cDNA文庫
        2.1.5 酶、載體和菌株
        2.1.6 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑
        2.1.7 培養(yǎng)基及溶劑配制
    2.2 方法
        2.2.1 病毒P5-1 蛋白結(jié)構(gòu)及功能分析
        2.2.2 病毒P5-1 基因的克隆及酵母表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.3 白背飛虱cDNA文庫的篩選
        2.2.4 互作候選蛋白基因的克隆
        2.2.5 酵母細(xì)胞中互作關(guān)系的驗(yàn)證
        2.2.6 互作蛋白結(jié)構(gòu)及功能分析
        2.2.7 靶標(biāo)蛋白基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.8 互作蛋白雙分子熒光試驗(yàn)驗(yàn)證
        2.2.9 互作蛋白基因在白背飛虱體內(nèi)的表達(dá)水平檢測(cè)
3 結(jié)果與分析
    3.1 SRBSDV P5-1 的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與功能
        3.1.1 一級(jí)結(jié)構(gòu)
        3.1.2 二級(jí)結(jié)構(gòu)
        3.1.3 性質(zhì)與功能
    3.2 白背飛虱與SRBSDV P5-1 互作的候選蛋白篩選及其基因克隆
    3.3 白背飛虱核糖體蛋白L12的生物信息學(xué)分析
    3.4 白背飛虱烯醇酶的生物信息學(xué)分析
    3.5 在酵母中驗(yàn)證候選蛋白與SRBSDV P5-1 的互作
    3.6 本氏煙中BiFC驗(yàn)證候選蛋白與SRBSDV P5-1 的互作
    3.7 白背飛虱體內(nèi)與病毒P5-1 互作蛋白基因的表達(dá)特征
4 結(jié)論與討論
    4.1 結(jié)論
    4.2 討論
        4.2.1 病毒P5-1 招募核糖體蛋白L12的機(jī)制及其功能
        4.2.2 病毒P5-1 招募烯醇酶的機(jī)制及其功能
        4.2.3 白背飛虱體內(nèi)SRBSDV病毒基質(zhì)形成及功能模型
        4.2.4 下一步研究建議
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄A 靶標(biāo)蛋白基因的核苷酸序列
附錄B 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)位論文
附錄C 攻讀學(xué)位期間參加的學(xué)術(shù)活動(dòng)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]抑制南方水稻黑條矮縮病毒非結(jié)構(gòu)蛋白P5-1的表達(dá)阻礙病毒在昆蟲體內(nèi)的增殖[J]. 曹金強(qiáng),王針針,陳紅燕,毛倩卓,賈東升,魏太云.  植物保護(hù)學(xué)報(bào). 2015(03)
[2]南方水稻黑條矮縮病毒非結(jié)構(gòu)蛋白的致病性分析[J]. 陳梅香,章松柏,袁正杰,張松柏,吳祖建,劉勇.  雜交水稻. 2015(03)
[3]GST pull-down聯(lián)合質(zhì)譜鑒定BAG結(jié)構(gòu)域相互作用蛋白[J]. 劉冬梅,孫佳楠,鄒佳凝,劉明偉,孫璐,劉瓊明.  中國生物工程雜志. 2015(04)
[4]南方水稻黑條矮縮病株對(duì)非介體稻飛虱-褐飛虱取食行為的影響[J]. 何曉嬋,徐紅星,周小軍,孫裕建,呂仲賢.  植物保護(hù)學(xué)報(bào). 2015(01)
[5]GST-pulldown技術(shù)在蛋白質(zhì)相互作用中的應(yīng)用[J]. 柴政斌,張更林,韓金祥.  中國生物制品學(xué)雜志. 2014(10)
[6]西南稻區(qū)稻飛虱及引起水稻矮縮病病毒的分布研究[J]. 梁燕,吳建祥,齊會(huì)會(huì),白玉路,許存賓,周雪平,胡培松,彭云良.  西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2014(04)
[7]雙分子熒光互補(bǔ)在蛋白質(zhì)相互作用中的應(yīng)用[J]. 任頁玫,張蕾,石亞偉.  湖北醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào). 2014(02)
[8]江西省南方水稻黑條矮縮病發(fā)生情況及防治建議[J]. 潘華,程奀蓮,鐘玲,陳齊信,李湘民.  生物災(zāi)害科學(xué). 2014(01)
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[10]雙分子熒光互補(bǔ)系統(tǒng)的構(gòu)建及其在病毒學(xué)中的初步應(yīng)用[J]. 張榮,陳春燕,韋祖樟,袁世山,童光志.  中國動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2013(03)

博士論文
[1]水稻黑條矮縮病毒基因組S5的編碼方式及其編碼蛋白的功能研究[D]. 羊健.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[2]核糖體蛋白R(shí)PS26和凋亡相關(guān)蛋白Bat3調(diào)控p53的分子機(jī)制[D]. 崔頔.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[3]南方水稻黑條矮縮病的監(jiān)測(cè)及其病原病毒Pns6與寄主水稻的互作[D]. 章松柏.福建農(nóng)林大學(xué) 2013
[4]南方水稻黑條矮縮病毒與白背飛虱基因互作研究[D]. 薛進(jìn).湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[5]灰飛虱體內(nèi)水稻條紋病毒（RSV）互作因子的篩選及其功能分析[D]. 李碩.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012

碩士論文
[1]SRBSDV非結(jié)構(gòu)蛋白P6在病毒侵染白背飛虱過程中的功能分析[D]. 鄭勝蘭.福建農(nóng)林大學(xué) 2014
[2]兩種植物呼腸孤病毒的小管蛋白鑒定及其功能結(jié)構(gòu)域研究[D]. 劉瑛.福建農(nóng)林大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3654039