稻瘟病屬于世界范圍內的真菌性病害,嚴重威脅世界的糧食安全,由子囊菌亞門絲狀真菌稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）侵染引起。水稻-稻瘟病菌的互作模式符合經(jīng)典的“基因對基因”學說,通過篩選抗病基因和無毒基因的互作蛋白揭示各自參與的信號通路,有助于進一步闡明宿主與病原菌間的互作機制。Pik-H4由Pik₁-H4和Pik₂-H4組成,對廣東的稻瘟病菌生理小種大多都表現(xiàn)出高抗。Pik₁-H4蛋白含有NBS-LRR結構域,Pik₂-H4蛋白含有NB-ARC結構域,該類結構域在植物的免疫系統(tǒng)中扮演重要角色。稻瘟病菌生理小種容易發(fā)生遺傳變異,對抗病機制的詮釋才能從根本上解決該問題。本研究主要通過瞬時表達系統(tǒng)利用免疫共沉淀技術篩選Pik-H4及Avr-Pik互作蛋白,結果如下:1、本研究中將水稻種子剝殼后種植在1/2 MS中8-10天左右,利用纖維素酶降解水稻葉鞘得到水稻的原生質體,將構建好的瞬時載體通過PEG介導轉化到細胞中,能夠在14-16 h左右得到目標蛋白的高效表達。通過實驗發(fā)現(xiàn),酶解的最佳時間... 

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

瞬時表達體系簡化圖

合物定位調節(jié)、涉及轉錄后修飾的互作、監(jiān)視新的互作蛋白、架等（范安然等，2009）。BiFC 技術也存在相應的缺點，（有不可逆性，限制蛋白互作的動態(tài)學過程研究。（2）空間位的形成，造成結果假陰性。（3）對溫度要求比較敏感，一般4）雙分子熒光信號可能滯后于蛋白質相互作用過程，不同的一樣。隨著 BiFC 基礎理論研究的深入和新的性能優(yōu)異的互補研究蛋白組學方面會有更加廣泛的應用前景。

以及弱相互作用的蛋白。同時，也具備一些缺點限于核蛋白的篩選。（2）一些蛋白具有自身轉錄激活3）酵母細胞內的環(huán)境不能引導所有蛋白進行正）在酵母菌株中大量表達外源蛋白可能會產生毒�？傊�，酵母雙雜技術相對比較成熟，應用得比義，不僅可以篩選水稻自身蛋白的互作網(wǎng)絡還可絡。


本文編號：3653229