稻瘟病屬于世界范圍內(nèi)的真菌性病害,嚴(yán)重威脅世界的糧食安全,由子囊菌亞門(mén)絲狀真菌稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）侵染引起。水稻-稻瘟病菌的互作模式符合經(jīng)典的“基因?qū)颉睂W(xué)說(shuō),通過(guò)篩選抗病基因和無(wú)毒基因的互作蛋白揭示各自參與的信號(hào)通路,有助于進(jìn)一步闡明宿主與病原菌間的互作機(jī)制。Pik-H4由Pik₁-H4和Pik₂-H4組成,對(duì)廣東的稻瘟病菌生理小種大多都表現(xiàn)出高抗。Pik₁-H4蛋白含有NBS-LRR結(jié)構(gòu)域,Pik₂-H4蛋白含有NB-ARC結(jié)構(gòu)域,該類(lèi)結(jié)構(gòu)域在植物的免疫系統(tǒng)中扮演重要角色。稻瘟病菌生理小種容易發(fā)生遺傳變異,對(duì)抗病機(jī)制的詮釋才能從根本上解決該問(wèn)題。本研究主要通過(guò)瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)利用免疫共沉淀技術(shù)篩選Pik-H4及Avr-Pik互作蛋白,結(jié)果如下:1、本研究中將水稻種子剝殼后種植在1/2 MS中8-10天左右,利用纖維素酶降解水稻葉鞘得到水稻的原生質(zhì)體,將構(gòu)建好的瞬時(shí)載體通過(guò)PEG介導(dǎo)轉(zhuǎn)化到細(xì)胞中,能夠在14-16 h左右得到目標(biāo)蛋白的高效表達(dá)。通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),酶解的最佳時(shí)間... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

瞬時(shí)表達(dá)體系簡(jiǎn)化圖

合物定位調(diào)節(jié)、涉及轉(zhuǎn)錄后修飾的互作、監(jiān)視新的互作蛋白、架等（范安然等，2009）。BiFC 技術(shù)也存在相應(yīng)的缺點(diǎn)，（有不可逆性，限制蛋白互作的動(dòng)態(tài)學(xué)過(guò)程研究。（2）空間位的形成，造成結(jié)果假陰性。（3）對(duì)溫度要求比較敏感，一般4）雙分子熒光信號(hào)可能滯后于蛋白質(zhì)相互作用過(guò)程，不同的一樣。隨著 BiFC 基礎(chǔ)理論研究的深入和新的性能優(yōu)異的互補(bǔ)研究蛋白組學(xué)方面會(huì)有更加廣泛的應(yīng)用前景。

以及弱相互作用的蛋白。同時(shí)，也具備一些缺點(diǎn)限于核蛋白的篩選。（2）一些蛋白具有自身轉(zhuǎn)錄激活3）酵母細(xì)胞內(nèi)的環(huán)境不能引導(dǎo)所有蛋白進(jìn)行正）在酵母菌株中大量表達(dá)外源蛋白可能會(huì)產(chǎn)生毒�？傊�，酵母雙雜技術(shù)相對(duì)比較成熟，應(yīng)用得比義，不僅可以篩選水稻自身蛋白的互作網(wǎng)絡(luò)還可絡(luò)。


本文編號(hào)：3653229