細(xì)菌非編碼sRNA是一類長度范圍在50-500bp之間的核酸分子,對靶基因的表達(dá)調(diào)控主要是與靶基因的mRNA序列通過堿基互補(bǔ)配對的方式來完成的。多數(shù)sRNA是由位于編碼蛋白質(zhì)的基因的5’和3’端之間的基因間區(qū)域或非翻譯區(qū)編碼。sRNA是生物體內(nèi)重要的調(diào)控因子,參與生物體內(nèi)的很多活動。為篩選出與稻黃單胞菌Xanthomonas oryzae pv.oryzae PX099A中與致病性相關(guān)的非編碼小RNA,將PX099A分別在普通生長培養(yǎng)基PSA和hrp基因簇誘導(dǎo)培養(yǎng)基XOM2中進(jìn)行培養(yǎng),分別提取菌體總RNA,送公司進(jìn)行高通量測序。對高通量測序結(jié)果進(jìn)行分析,構(gòu)建水稻白葉枯病菌Xoo PX099A sRNA文庫。根據(jù)編碼區(qū)域的不同及在基因組中的位置信息將測序得到的sRNA分為順式（cis-）和反式（trans-）兩類,其中cis-sRNA有337個,trans-sRNA有264個;對比sRNA在兩種培養(yǎng)基中的表達(dá)水平,篩選出差異性表達(dá)比較明顯的10個sRNA,通過qRT-PCR對高通量測序結(jié)果進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,得到的結(jié)果基本上一致;通過TargetRNA軟件預(yù)測表達(dá)差異明顯的sRNA的靶標(biāo)基因,... 

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
上篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 水稻黃單胞菌致病相關(guān)sRNA的作用機(jī)制
        1 sRNA種類與結(jié)構(gòu)特性
        2 sRNA基本功能
        3 sRNA調(diào)控病菌致病性的機(jī)制
            3.1 sRNA對T3SS的影響
            3.2 sRNA對細(xì)菌運(yùn)動性的影響
            3.3 sRNA與hrp基因的功能關(guān)系
    第二章 水稻黃單胞菌致病相關(guān)sRNA的研究意義
        1 研究現(xiàn)狀
        2 篩選與鑒定方法
            2.1 高通量測序技術(shù)
            2.2 Northern印跡
            2.3 熒光定量PCR
        3 存在的問題與研究設(shè)想
        4 研究目的
    第三章 Harpin蛋白研究進(jìn)展
        1 Harpin蛋白的遺傳學(xué)特性
            1.1 植物病原細(xì)菌hrp基因簇
            1.2 Ⅲ型分泌系統(tǒng)及效應(yīng)蛋白
            1.3 Harpin在植物細(xì)胞中的致病性作用
        2 Harpin蛋白的生物學(xué)效應(yīng)
            2.1 誘導(dǎo)植物抗病性
            2.2 促進(jìn)植物生長發(fā)育
            2.3 增加凈光合效率
        3 Harpin蛋白的信號傳導(dǎo)機(jī)制
        4 Harpin蛋白的研究目的
下篇 研究內(nèi)容
    第一章 水稻白葉枯病致病相關(guān)sRNA的篩選與鑒定
        1 材料與方法
            1.1 供試菌株
            1.2 培養(yǎng)基
            1.3 菌株培養(yǎng)條件與保存
            1.4 基因表達(dá)量分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 Xoo PXO99~A sRNA文庫的概況
            2.2 候選sRNA的分類
            2.3 sRNA的差異表達(dá)分析
            2.4 sRNA基因組位置信息
            2.5 sRNA靶基因的篩選
        3 討論
    第二章 水稻白葉枯病致病相關(guān)sRNA的功能研究
        1 材料與方法
            1.1 供試菌株和質(zhì)粒
            1.2 培養(yǎng)基與抗生素
            1.3 植物材料
            1.4 sRNA突變體的產(chǎn)生
            1.5 sRNA缺失突變菌株的獲得
            1.6 sRNA突變體回補(bǔ)菌株的產(chǎn)生
            1.7 sRNA的突變對水稻致病性的測定
            1.8 過敏反應(yīng)的測定
        2 結(jié)果與分析
            2.1 sRNA突變體的產(chǎn)生
            2.2 PX099~A trans191、trans217、trans3287回補(bǔ)菌株的構(gòu)建
            2.3 通過qRT-PCR驗(yàn)證成功敲除、回補(bǔ)
            2.4 sRNA敲除突變體的生長
            2.5 水稻上致病力的測定
            2.6 煙草上過敏性反應(yīng)的測定
            2.7 不同突變體中hrp基因簇相關(guān)基因的表達(dá)
        3 討論
    第三章 Hpal與質(zhì)膜嵌入蛋白PIP1;4互作對光合作用的影響
        1 材料與方法
            1.1 植物材料
            1.2 供試菌株及載體
            1.3 基因表達(dá)分析
            1.4 BiFC方法驗(yàn)證蛋白互作
            1.5 植株光合作用值的測定
        2 結(jié)果與分析
            2.1 AtPIP1;4基因表達(dá)
            2.2 Hpa1與PIP1;4在細(xì)胞膜上的BiFC驗(yàn)證
            2.3 植株光合作用值的測定
        3 討論
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3653200