細(xì)菌非編碼sRNA是一類(lèi)長(zhǎng)度范圍在50-500bp之間的核酸分子,對(duì)靶基因的表達(dá)調(diào)控主要是與靶基因的mRNA序列通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式來(lái)完成的。多數(shù)sRNA是由位于編碼蛋白質(zhì)的基因的5’和3’端之間的基因間區(qū)域或非翻譯區(qū)編碼。sRNA是生物體內(nèi)重要的調(diào)控因子,參與生物體內(nèi)的很多活動(dòng)。為篩選出與稻黃單胞菌Xanthomonas oryzae pv.oryzae PX099A中與致病性相關(guān)的非編碼小RNA,將PX099A分別在普通生長(zhǎng)培養(yǎng)基PSA和hrp基因簇誘導(dǎo)培養(yǎng)基XOM2中進(jìn)行培養(yǎng),分別提取菌體總RNA,送公司進(jìn)行高通量測(cè)序。對(duì)高通量測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析,構(gòu)建水稻白葉枯病菌Xoo PX099A sRNA文庫(kù)。根據(jù)編碼區(qū)域的不同及在基因組中的位置信息將測(cè)序得到的sRNA分為順式（cis-）和反式（trans-）兩類(lèi),其中cis-sRNA有337個(gè),trans-sRNA有264個(gè);對(duì)比sRNA在兩種培養(yǎng)基中的表達(dá)水平,篩選出差異性表達(dá)比較明顯的10個(gè)sRNA,通過(guò)qRT-PCR對(duì)高通量測(cè)序結(jié)果進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,得到的結(jié)果基本上一致;通過(guò)TargetRNA軟件預(yù)測(cè)表達(dá)差異明顯的sRNA的靶標(biāo)基因,... 

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
上篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 水稻黃單胞菌致病相關(guān)sRNA的作用機(jī)制
        1 sRNA種類(lèi)與結(jié)構(gòu)特性
        2 sRNA基本功能
        3 sRNA調(diào)控病菌致病性的機(jī)制
            3.1 sRNA對(duì)T3SS的影響
            3.2 sRNA對(duì)細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性的影響
            3.3 sRNA與hrp基因的功能關(guān)系
    第二章 水稻黃單胞菌致病相關(guān)sRNA的研究意義
        1 研究現(xiàn)狀
        2 篩選與鑒定方法
            2.1 高通量測(cè)序技術(shù)
            2.2 Northern印跡
            2.3 熒光定量PCR
        3 存在的問(wèn)題與研究設(shè)想
        4 研究目的
    第三章 Harpin蛋白研究進(jìn)展
        1 Harpin蛋白的遺傳學(xué)特性
            1.1 植物病原細(xì)菌hrp基因簇
            1.2 Ⅲ型分泌系統(tǒng)及效應(yīng)蛋白
            1.3 Harpin在植物細(xì)胞中的致病性作用
        2 Harpin蛋白的生物學(xué)效應(yīng)
            2.1 誘導(dǎo)植物抗病性
            2.2 促進(jìn)植物生長(zhǎng)發(fā)育
            2.3 增加凈光合效率
        3 Harpin蛋白的信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制
        4 Harpin蛋白的研究目的
下篇 研究?jī)?nèi)容
    第一章 水稻白葉枯病致病相關(guān)sRNA的篩選與鑒定
        1 材料與方法
            1.1 供試菌株
            1.2 培養(yǎng)基
            1.3 菌株培養(yǎng)條件與保存
            1.4 基因表達(dá)量分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 Xoo PXO99~A sRNA文庫(kù)的概況
            2.2 候選sRNA的分類(lèi)
            2.3 sRNA的差異表達(dá)分析
            2.4 sRNA基因組位置信息
            2.5 sRNA靶基因的篩選
        3 討論
    第二章 水稻白葉枯病致病相關(guān)sRNA的功能研究
        1 材料與方法
            1.1 供試菌株和質(zhì)粒
            1.2 培養(yǎng)基與抗生素
            1.3 植物材料
            1.4 sRNA突變體的產(chǎn)生
            1.5 sRNA缺失突變菌株的獲得
            1.6 sRNA突變體回補(bǔ)菌株的產(chǎn)生
            1.7 sRNA的突變對(duì)水稻致病性的測(cè)定
            1.8 過(guò)敏反應(yīng)的測(cè)定
        2 結(jié)果與分析
            2.1 sRNA突變體的產(chǎn)生
            2.2 PX099~A trans191、trans217、trans3287回補(bǔ)菌株的構(gòu)建
            2.3 通過(guò)qRT-PCR驗(yàn)證成功敲除、回補(bǔ)
            2.4 sRNA敲除突變體的生長(zhǎng)
            2.5 水稻上致病力的測(cè)定
            2.6 煙草上過(guò)敏性反應(yīng)的測(cè)定
            2.7 不同突變體中hrp基因簇相關(guān)基因的表達(dá)
        3 討論
    第三章 Hpal與質(zhì)膜嵌入蛋白PIP1;4互作對(duì)光合作用的影響
        1 材料與方法
            1.1 植物材料
            1.2 供試菌株及載體
            1.3 基因表達(dá)分析
            1.4 BiFC方法驗(yàn)證蛋白互作
            1.5 植株光合作用值的測(cè)定
        2 結(jié)果與分析
            2.1 AtPIP1;4基因表達(dá)
            2.2 Hpa1與PIP1;4在細(xì)胞膜上的BiFC驗(yàn)證
            2.3 植株光合作用值的測(cè)定
        3 討論
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]十字花科黑腐病菌中一個(gè)與HR反應(yīng)相關(guān)的小RNA的鑒定[J]. 李良賢,肖波,黃曉韻,唐東階.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2015(07)
[2]細(xì)菌非編碼小RNA研究進(jìn)展[J]. 王勇祥,孟霞,孟憲臣,聶佳佳,朱國(guó)強(qiáng).  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2014(11)
[3]細(xì)菌非編碼小RNA的分類(lèi)及功能簡(jiǎn)介[J]. 聶佳佳,金鑫,孟憲臣,朱國(guó)強(qiáng).  中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2013(03)
[4]銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J]. 陳樹(shù)林,黃彬.  中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志. 2012(12)
[5]國(guó)外新引進(jìn)水稻品種(系)對(duì)我國(guó)水稻白葉枯病致病型的抗性反應(yīng)[J]. 袁筱萍,徐群,余漢勇,王一平,魏興華.  植物保護(hù). 2011(05)
[6]病原菌非編碼小RNA的致病調(diào)控功能研究[J]. 孟霞,王亨,朱國(guó)強(qiáng).  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(09)
[7]細(xì)菌中非編碼小RNA的篩選及鑒定[J]. 唐彬,肖斌,毛旭虎,鄒全明.  生命的化學(xué). 2008(04)

博士論文
[1]小麥TaMYB3R1抗逆功能與轉(zhuǎn)Hpal10-42小麥對(duì)赤霉病和蚜蟲(chóng)抗性的初步研究[D]. 蔡洪生.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]水稻白葉枯病菌致病性功能基因組學(xué)分析[D]. 黃貴修.華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3653200