包囊和吞噬作用是由血細(xì)胞介導(dǎo)的兩種免疫反應(yīng),是昆蟲先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分。包囊作用是由多個(gè)血細(xì)胞參與的、針對(duì)較大的病原物（如寄生蜂的卵、病原線蟲等）的清除,而吞噬作用是單個(gè)血細(xì)胞針對(duì)較小病原物（如細(xì)菌、病毒等）的清除。蛻皮激素的活化形式20-羥基蛻皮酮（20-hydroxyecdysone,20E）作為調(diào)控昆蟲蛻皮、變態(tài)、生殖、發(fā)育等過程的重要激素,也參與調(diào)節(jié)多種免疫應(yīng)答,如細(xì)胞免疫（包囊和吞噬）。然而,目前我們對(duì)昆蟲細(xì)胞免疫及其內(nèi)分泌調(diào)控分子機(jī)制尚不清楚。本研究以棉鈴蟲（Helicoverpa armigera）為模型,首先統(tǒng)計(jì)了中華卵索線蟲（Ovomermissinemsis 寄生后棉鈴蟲的死亡率,并分析了棉鈴蟲應(yīng)答O.sinesis.寄生后的免疫反應(yīng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)O.sinensis寄生后導(dǎo)致了棉鈴蟲存活率急劇下降,且寄生早期棉鈴蟲的血細(xì)胞吞噬能力和血漿抗菌活性顯著升高。為了進(jìn)一步獲得識(shí)別O.sinensis并觸發(fā)先天免疫反應(yīng)的關(guān)鍵蛋白,我們將O.sinensis與棉鈴蟲變態(tài)期血漿孵育,經(jīng)洗滌、洗脫后質(zhì)譜鑒定,獲得一個(gè)模式識(shí)別蛋白C-typelectin1b（HaCTL1b）,該... 

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 昆蟲免疫系統(tǒng)
        1.1.1 體液免疫
        1.1.2 細(xì)胞免疫
    1.2 包囊反應(yīng)
    1.3 吞噬反應(yīng)
    1.4 20-羥基蛻皮酮
    1.5 棉鈴蟲
    1.6 害蟲防治
    1.7 研究背景及意義
2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 棉鈴蟲
        2.1.2 白兔
        2.1.3 線蟲
        2.1.4 菌株
        2.1.5 試劑、藥品
        2.1.6 儀器與設(shè)備
        2.1.7 常用試劑及培養(yǎng)基的配置
        2.1.8 實(shí)驗(yàn)用到的引物序列
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 中華卵索線蟲寄生棉鈴蟲實(shí)驗(yàn)
        2.2.2 寄生中華卵索線蟲的棉鈴蟲血細(xì)胞吞噬細(xì)菌實(shí)驗(yàn)
        2.2.3 寄生中華卵索線蟲的棉鈴蟲血漿抗菌活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 HaCTL1b基因全長、信號(hào)肽編碼蛋白序列分析
        2.2.5 棉鈴蟲各組織RNA的提取
        2.2.6 合成cDNA第一鏈(TRANS Easy Script One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix)
        2.2.7 cDNA的質(zhì)量檢測(cè)
        2.2.8 HaCTL1b基因的原核重組表達(dá)與純化
        2.2.9 HaCTL1b抗體的制備
        2.2.10 Western blot抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 熒光定量分析HaCTL1基因的表達(dá)模式
        2.2.12 Western blot檢測(cè)HaCTL1在棉鈴蟲不同發(fā)育階段的蛋白水平表達(dá)模式
        2.2.13 rHaCTL1b的凝集和結(jié)合實(shí)驗(yàn)
        2.2.14 E.coli 和 aureus刺激HaCTL1的表達(dá)實(shí)驗(yàn)
        2.2.15 HaCTL1的RNA干擾實(shí)驗(yàn)
        2.2.16 檢測(cè)HaCTL1敲降后對(duì)包囊率的影響
        2.2.17 檢測(cè)孵育rHaCTL1b對(duì)包囊率的影響
        2.2.18 孵育rHaCTL1b對(duì)血細(xì)胞吞噬率的影響
        2.2.19 檢測(cè)HaCTL1敲降后對(duì)血細(xì)胞吞噬率的影響
3 結(jié)果與分析
    3.1 中華卵索線蟲寄生對(duì)棉鈴蟲存活率的影響
    3.2 中華卵索線蟲寄生對(duì)棉鈴蟲免疫應(yīng)答的影響
    3.3 棉鈴蟲HaCTL1b基因的鑒定與生物信息學(xué)分析
    3.4 rHaCTL1b的表達(dá)與純化
        3.4.1 重組質(zhì)粒pET-32a-HaCTL1b的構(gòu)建
        3.4.2 陽性篩選結(jié)果
        3.4.3 重組蛋白rHaCTL1b的表達(dá)與純化
    3.5 Anti-HaCTL1b抗血清識(shí)別rHaCTL1b和內(nèi)源HaCTL1
    3.6 HaCTL1的組織特異性表達(dá)模式分析
    3.7 HaCTL1在不同發(fā)育階段的表達(dá)分析
    3.8 20E誘導(dǎo)HaCTL1的表達(dá)
    3.9 Beads刺激誘導(dǎo)HaCTL1表達(dá)
    3.10 HaCTL1促進(jìn)血細(xì)胞包囊
    3.11 rHaCTL1b促進(jìn)細(xì)菌凝集
    3.12 rHaCTL1b與細(xì)菌結(jié)合活性分析
    3.13 細(xì)菌刺激誘導(dǎo)HaCTL1基因和蛋白的表達(dá)
    3.14 孵育rHaCTL1b促進(jìn)血細(xì)胞吞噬率
    3.15 敲降HaCTL1降低血細(xì)胞吞噬率
4 討論
5 小結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士期間論文發(fā)表情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]誘殺技術(shù)在害蟲綜合治理（IPM）中的應(yīng)用[J]. 閆凱莉,唐良德,吳建輝,畢志兼.  中國植保導(dǎo)刊. 2016(06)
[2]昆蟲天然免疫反應(yīng)研究前沿[J]. 初源,周帆,張明明,安春菊.  應(yīng)用昆蟲學(xué)報(bào). 2013(02)
[3]昆蟲免疫進(jìn)化的研究進(jìn)展[J]. 周瓊.  福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2007(04)
[4]中華卵索線蟲感染棉鈴蟲后的血淋巴病理學(xué)研究[J]. 陳伍國,駱啟桂,王丹,高原.  華中師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2002(03)
[5]武昌羅索線蟲（Romanomermis wuchangensis）生活史的研究[J]. 駱啟桂.  華中師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 1987(03)

碩士論文
[1]HaCTL3和HaGBPB介導(dǎo)20E信號(hào)調(diào)控棉鈴蟲細(xì)胞免疫的分子機(jī)理[D]. 卓曉蓉.華中師范大學(xué) 2018
[2]武昌羅索線蟲性別分化差異基因篩選及功能研究[D]. 陶斯瑩.華中師范大學(xué) 2018
[3]棉鈴蟲兩種C-型凝集素HaCTL3和HaCTL7的功能研究[D]. 張旗.華中師范大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3653331