中華蜜蜂Apis cerana cerana是中國的獨特蜂種,具有抗寒、抗螨、易分蜂、善于利用零星蜜源及適應性強的優(yōu)良特性,在植物授粉方面發(fā)揮著非常重要的作用。其通過體表特定的嗅覺感受器中的嗅覺相關(guān)蛋白與外界環(huán)境中各種化學氣味物質(zhì)接觸,其中氣味結(jié)合蛋白（odorant-binding proteins,OBPs）發(fā)揮著重要作用。而亞致死劑量下的化學物質(zhì)——新煙堿殺蟲劑對蜜蜂等授粉昆蟲具有不同的毒性,這種毒性差異引起的蜜蜂毒害及其分子機制未得到深入解析。本研究對現(xiàn)有的OBP11、CSP3和ASP1這3種信息素相關(guān)蛋白與相應的配基和吡蟲啉進行了較為深入的研究。利用多光譜技術(shù)研究了OBP11、CSP3和ASP1對外界氣味分子及吡蟲啉的結(jié)合模式。確定了OBP11與多種配基、CSP3和吡蟲啉結(jié)合的關(guān)鍵氨基酸和主要作用力。還對溫度、pH以及吡蟲啉對蛋白和配基的結(jié)合影響進行了研究。主要結(jié)果如下:1.中華蜜蜂信息素相關(guān)蛋白OBP11的蛋白純化、定點突變及配基結(jié)合機理研究。制備了AcerOBP11蛋白,并利用LC-MS/MS質(zhì)譜進行了驗證。通過掃描電鏡和透射電鏡進行了觸角亞細胞定位,表明工蜂觸角的多樣性... 

【文章來源】：中國計量大學浙江省

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

中蜂OBP11重組蛋白誘導表達及純化

圖 2. 2 中蜂 OBP11 質(zhì)譜一級圖譜(A)和 OBP11 搜庫后信息(B)以及重合序列(C)Fig. 2.2 The first-levelmass spectrometry of AcerOBP11 (A) and total data of OBP11search (B) and the coincidence sequence (C)2.2.3 中華蜜蜂 OBP11 重組蛋白與信息素和植物揮發(fā)物的熒光猝滅光譜分析熒光發(fā)射光譜掃描確定蛋白 OBP11 的激發(fā)波長在 281 nm，用 1 mmol·L-1的 1-NPN 溶液對工作濃度為 1 μmol·L-1OBP11 重組蛋白溶液進行滴定，然后熒光掃描，如圖 2.3 所示，回歸方程線性化擬合的相關(guān)系數(shù)達到 0.993，顯示擬合較好。根據(jù)公式（2-1），得到 OBP11 與 1-NPN 的解離常數(shù) K1-NPN為 2.42μmol·L-1，結(jié)合位點數(shù) n 為 0.85，表明 OBP11 與 1-NPN 具有良好的結(jié)合，因此1-NPN 能夠用于 OBP11 與候選化學信息素功能研究時的競爭性熒光報告子。

4-Allylveratrole HOB Farnesol-13.991 -15.116 -20.489 -11.492 -14.322 -17.1043 -13.637 -8.848 -14.0831 -11.503 -8.880 -10.8472 -13.745 -9.057 -12.2484 -5.274 -3.506 -5.66485 -1.571 -3.270 -3.55221 -2.330 -2.380 -6.13763 -2.249 -2.041 -4.71023 -0.595 -0.314 -3.16497 -0.350 -1.409 -1.4108 氫鍵。量貢獻一個更直觀的表征，通過色階及能量貢獻熱圖，如圖 2.7 所示，黑色方框為 Ile97、Ile140 和 Phe101。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]新煙堿類殺蟲劑對蜜蜂行為與生理影響的研究進展[J]. 李夢,李志國,和靜芳,蘇松坤.  福建農(nóng)林大學學報(自然科學版). 2016(05)
[2]家蠶化學感受蛋白CSP16的表達及結(jié)合特性分析[J]. 郭興國,陳瑩,邢秋婷,邢萬靜,闞云超,喬惠麗.  昆蟲學報. 2016(06)
[3]中華蜜蜂報警信息素的生物活性檢測[J]. 李新宇,董詩浩,譚墾.  中國蜂業(yè). 2016(04)
[4]中華蜜蜂信息素結(jié)合蛋白OBP10的基因克隆、原核表達和配基結(jié)合特性分析[J]. 吳帆,黃君君,譚靜,唐明珠,李紅亮.  昆蟲學報. 2016(01)
[5]Q型煙粉虱化學感受蛋白CSP1與植物揮發(fā)物的結(jié)合特征[J]. 吳帆,張曉曼,趙磊,崔旭紅,李紅亮,羅晨.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2015(10)
[6]吡蟲啉對意大利蜜蜂腦乙酰膽堿受體分布的影響[J]. 周婷,宋懷磊,王強,代平禮,吳艷艷,孫繼虎.  昆蟲學報. 2013(11)
[7]中華蜜蜂性信息素結(jié)合蛋白ASP1的原核表達及配基結(jié)合特性分析[J]. 翁琛,張林雅,趙磊,付余霞,羅晨,李紅亮.  昆蟲學報. 2013(10)
[8]中華蜜蜂普通氣味結(jié)合蛋白ASP2的氣味結(jié)合功能模式分析[J]. 李紅亮,張林雅,莊樹林,倪翠俠,韓寶瑜,商晗武.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2013(01)
[9]中華蜜蜂Orco嗅覺受體基因的克隆、表達及亞細胞定位[J]. 張林雅,謝冰花,倪翠俠,趙磊,李紅亮,商晗武.  昆蟲學報. 2012(11)
[10]中華蜜蜂重要生物學特性相關(guān)功能基因研究進展[J]. 孟飛,胥保華,郭興啟.  應用昆蟲學報. 2012(05)

碩士論文
[1]中華蜜蜂兩種嗅覺相關(guān)蛋白的基因克隆與功能研究[D]. 張林雅.中國計量學院 2013



本文編號：3523710