中華蜜蜂Apis cerana cerana是中國的獨(dú)特蜂種,具有抗寒、抗螨、易分蜂、善于利用零星蜜源及適應(yīng)性強(qiáng)的優(yōu)良特性,在植物授粉方面發(fā)揮著非常重要的作用。其通過體表特定的嗅覺感受器中的嗅覺相關(guān)蛋白與外界環(huán)境中各種化學(xué)氣味物質(zhì)接觸,其中氣味結(jié)合蛋白（odorant-binding proteins,OBPs）發(fā)揮著重要作用。而亞致死劑量下的化學(xué)物質(zhì)——新煙堿殺蟲劑對(duì)蜜蜂等授粉昆蟲具有不同的毒性,這種毒性差異引起的蜜蜂毒害及其分子機(jī)制未得到深入解析。本研究對(duì)現(xiàn)有的OBP11、CSP3和ASP1這3種信息素相關(guān)蛋白與相應(yīng)的配基和吡蟲啉進(jìn)行了較為深入的研究。利用多光譜技術(shù)研究了OBP11、CSP3和ASP1對(duì)外界氣味分子及吡蟲啉的結(jié)合模式。確定了OBP11與多種配基、CSP3和吡蟲啉結(jié)合的關(guān)鍵氨基酸和主要作用力。還對(duì)溫度、pH以及吡蟲啉對(duì)蛋白和配基的結(jié)合影響進(jìn)行了研究。主要結(jié)果如下:1.中華蜜蜂信息素相關(guān)蛋白OBP11的蛋白純化、定點(diǎn)突變及配基結(jié)合機(jī)理研究。制備了AcerOBP11蛋白,并利用LC-MS/MS質(zhì)譜進(jìn)行了驗(yàn)證。通過掃描電鏡和透射電鏡進(jìn)行了觸角亞細(xì)胞定位,表明工蜂觸角的多樣性... 

【文章來源】：中國計(jì)量大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

中蜂OBP11重組蛋白誘導(dǎo)表達(dá)及純化

圖 2. 2 中蜂 OBP11 質(zhì)譜一級(jí)圖譜(A)和 OBP11 搜庫后信息(B)以及重合序列(C)Fig. 2.2 The first-levelmass spectrometry of AcerOBP11 (A) and total data of OBP11search (B) and the coincidence sequence (C)2.2.3 中華蜜蜂 OBP11 重組蛋白與信息素和植物揮發(fā)物的熒光猝滅光譜分析熒光發(fā)射光譜掃描確定蛋白 OBP11 的激發(fā)波長(zhǎng)在 281 nm，用 1 mmol·L-1的 1-NPN 溶液對(duì)工作濃度為 1 μmol·L-1OBP11 重組蛋白溶液進(jìn)行滴定，然后熒光掃描，如圖 2.3 所示，回歸方程線性化擬合的相關(guān)系數(shù)達(dá)到 0.993，顯示擬合較好。根據(jù)公式（2-1），得到 OBP11 與 1-NPN 的解離常數(shù) K1-NPN為 2.42μmol·L-1，結(jié)合位點(diǎn)數(shù) n 為 0.85，表明 OBP11 與 1-NPN 具有良好的結(jié)合，因此1-NPN 能夠用于 OBP11 與候選化學(xué)信息素功能研究時(shí)的競(jìng)爭(zhēng)性熒光報(bào)告子。

4-Allylveratrole HOB Farnesol-13.991 -15.116 -20.489 -11.492 -14.322 -17.1043 -13.637 -8.848 -14.0831 -11.503 -8.880 -10.8472 -13.745 -9.057 -12.2484 -5.274 -3.506 -5.66485 -1.571 -3.270 -3.55221 -2.330 -2.380 -6.13763 -2.249 -2.041 -4.71023 -0.595 -0.314 -3.16497 -0.350 -1.409 -1.4108 氫鍵。量貢獻(xiàn)一個(gè)更直觀的表征，通過色階及能量貢獻(xiàn)熱圖，如圖 2.7 所示，黑色方框?yàn)?Ile97、Ile140 和 Phe101。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]中華蜜蜂兩種嗅覺相關(guān)蛋白的基因克隆與功能研究[D]. 張林雅.中國計(jì)量學(xué)院 2013



本文編號(hào)：3523710