桃流膠病是我國桃樹上最嚴(yán)重的病害之一,主要是由病原菌Botryosphaeria dothidea,B.rhodina和B.obtuse引起的,目前針對桃流膠病的防治策略以化學(xué)防治為主,農(nóng)業(yè)防治為輔,但化學(xué)農(nóng)藥的使用不僅會使病原菌產(chǎn)生抗藥性,而且造成環(huán)境污染,危害人體健康,生物防治因其綠色環(huán)保、安全可靠而受到廣泛關(guān)注。本試驗從桃樹根組織中分離并篩選出了一株對桃流膠病病原菌具有拮抗作用的內(nèi)生細(xì)菌,結(jié)合形態(tài)觀察與分子手段對其進(jìn)行鑒定,并對菌株進(jìn)行GFP標(biāo)記,研究其在植物體內(nèi)的定殖情況,另外初步探討了該菌株的生防機(jī)制,主要研究結(jié)果如下:1.從桃樹根莖葉部位共分離到內(nèi)生細(xì)菌129株,其中有20株對桃流膠病病原菌B.dothidea XNHG-241具有拮抗作用,選取拮抗作用較好的一株菌株HAR3進(jìn)行鑒定,通過16S rRNA和gyrB基因序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹并結(jié)合形態(tài)觀察將其鑒定為解淀粉芽孢桿菌。2.構(gòu)建了含egfp片段的質(zhì)粒pUBXCP,通過接合轉(zhuǎn)移的方法將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入解淀粉芽孢桿菌HAR3,得到菌株HAR3-GFP。標(biāo)記菌株能夠表達(dá)強烈的熒光,并能穩(wěn)定遺傳,且菌株HAR3-GFP與野生型菌株HA... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

菌株HAR3的菌落形態(tài)及掃描電鏡圖

圖 2 菌株 HAR3 的菌落形態(tài)及掃描電鏡圖a）菌株 HAR3 的菌落形態(tài)；b）菌株 HAR3 的掃描電鏡圖Fig. 2 Colonial morphology and scanning electron microscopic image of strain HAolonial morphology of strain HAR3; b) Scanning electron microscopic image of strain 菌株 HAR3 的革蘭氏染色菌株 HAR3 革蘭氏染色（圖 3）為紫色，呈陽性，鑒定菌株 HAR3 為革（G+）。a b

桃流膠病拮抗細(xì)菌的篩選及生防機(jī)制的探究3.2.3 菌株 HAR3 的分子鑒定根據(jù)測序得到的 HAR3 16S rRNA 和 gyrB 基因序列，使用 MEGA6 構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果表明 16S rRNA 系統(tǒng)發(fā)育樹中菌株 HAR3 與 B. amyloliquefaciens subsp.plantarum 處于同一簇（圖 4 ），同時 gyrB 系統(tǒng)發(fā)育樹中菌株 HAR3 與 B.amyloliquefaciens subsp. plantarum 也處于同一簇（圖 5），由此將菌株 HAR3 鑒定為解淀粉芽孢桿菌。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]6個桃品種流膠病感病性的初步評價[J]. 楊文,趙麗娜,郝磊,李國懷.  華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2015(03)
[2]毛竹內(nèi)生細(xì)菌種群多樣性分析[J]. 劉芳,袁宗勝,張國防,陳威.  福建農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2014(12)
[3]不同藥劑處理對桃樹流膠病的防治效果比較[J]. 劉勇,王富榮,王會良,顧霞,諸小敏,龔林忠,何華平.  湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(19)
[4]水稻種子內(nèi)生細(xì)菌多樣性及其分泌植物生長素能力的測定[J]. 姜曉宇,高菊生,徐鳳花,曹艷花,唐雪,張曉霞.  微生物學(xué)報. 2013(03)
[5]我國植物病害生物防治綜述[J]. 劉琴,劉翼,何月秋,林泋君,姜開梅.  安徽農(nóng)學(xué)通報(上半月刊). 2012(07)
[6]桃流膠病研究進(jìn)展[J]. 陳彥,王璠,蔡東,李國懷,程家森.  湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(04)
[7]生防菌枯草芽孢桿菌CQBS03的綠色熒光蛋白基因標(biāo)記及其在柑橘葉片上的定殖[J]. 殷幼平,袁訓(xùn)娥,李強,王中康.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(17)
[8]不同桃樹品種流膠病抗性調(diào)查及評價[J]. 華國榮,吳江,程建徽.  中國南方果樹. 2006(06)
[9]不同藥劑防治桃樹流膠病桃葉氧化酶活性與防效之相關(guān)分析[J]. 鄭雪芳,林抗美,黃素芳,肖榮鳳,劉波.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2006(07)
[10]具有抑菌促生作用的植物內(nèi)生細(xì)菌的篩選[J]. 邱思鑫,何紅,阮宏椿,關(guān)雄,胡方平.  應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報. 2004(05)

博士論文
[1]桃流膠病拮抗微生物篩選及發(fā)酵產(chǎn)抗菌脂肽研究[D]. 黎循航.江南大學(xué) 2016
[2]小麥內(nèi)生細(xì)菌的種群多樣性調(diào)查及其在小麥條銹病生物防治中的利用研究[D]. 龐發(fā)虎.廣西大學(xué) 2016
[3]利用小麥內(nèi)生細(xì)菌對小麥稈黑粉病的生物防治研究[D]. 陶愛麗.廣西大學(xué) 2014
[4]桃病原性流膠病發(fā)病過程中的生理生化變化研究[D]. 李智.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[5]桃流膠病菌BOTRYOSPHAERIAS SPP.鑒定、分布、遺傳多樣性及PCR快速檢測技術(shù)研究[D]. 王璠.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[6]多功能菌劑的組合效應(yīng)研究及其抑菌物質(zhì)的特性和分離[D]. 陶晶.石河子大學(xué) 2009
[7]內(nèi)生菌分離篩選及其對甜菜促生增糖效應(yīng)研究[D]. 史應(yīng)武.石河子大學(xué) 2009
[8]番茄內(nèi)生細(xì)菌及其對番茄青枯病的防治作用研究[D]. 黎起秦.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005
[9]辣椒內(nèi)生枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）防病促生作用的研究[D]. 何紅.福建農(nóng)林大學(xué) 2003

碩士論文
[1]玉米紋枯病生防細(xì)菌的分離鑒定及應(yīng)用[D]. 陳璐璐.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]玉米內(nèi)生生防細(xì)菌的分離鑒定與遺傳轉(zhuǎn)化的研究[D]. 呂玲.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[3]解淀粉芽孢桿菌J5防治桃流膠病的研究[D]. 文生巧.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[4]桃流膠病發(fā)病的影響因子及防治技術(shù)探討[D]. 郝磊.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[5]小麥溶磷內(nèi)生菌的篩選鑒定及其溶磷特性的初步研究[D]. 蔣國彪.四川師范大學(xué) 2012
[6]西藏生防芽孢桿菌鑒定及其脂肽化合物分析[D]. 薛鵬琦.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[7]生防芽孢桿菌胞外蛋白酶的純化及其拮抗作用[D]. 邢介帥.山東師范大學(xué) 2008
[8]桃流膠病的發(fā)生及其病原菌研究[D]. 羅江會.西南大學(xué) 2006
[9]水稻內(nèi)生細(xì)菌研究[D]. 朱鳳.揚州大學(xué) 2005



本文編號：3403467