利用稀釋涂布平板法,從黑脛病煙株的根部土壤中篩選獲得了3株防治黑脛病的高效拮抗菌XCS007、YBM-4和YJC-4。通過對峙培養(yǎng)法和牛津杯法驗證了3株拮抗菌及其粗提物對煙草黑脛病的抑菌效果。探究了3株拮抗菌的最適生長條件（溫度、初始pH和培養(yǎng)時間）,利用形態(tài)學(xué)、生理生化特性和16S rDNA序列相似性分析,對3株拮抗菌的系統(tǒng)分類地位進行了鑒定。同時,測定了幾丁質(zhì)酶和β-1,3-葡聚糖酶的活性,在盆栽和大田試驗中,調(diào)查了XCS007及其粗提物、YBM-4、YJC-4和XCS007+YBM-4+YJC-4混劑（比例1:1:1）的防病和控病效果。具體如下:1.從煙草黑脛病病株根部土壤中篩選獲到324株細(xì)菌,利用對峙培養(yǎng)法,得到XCS007、YBM-4和YJC-4拮抗菌對煙草黑脛病的相對抑菌率分別達到91.80%、85.34%和72.99%,除有明顯的抑菌圈外,黑脛病菌絲邊緣處均有明顯的溶解現(xiàn)象,抑制菌絲的正常生長和擴展,表明3種拮抗菌具有顯著的抑菌效果。通過牛津杯法,XCS007拮抗菌粗提物的抑菌效果最為明顯,YBM-4和YJC-4拮抗菌粗提物有一定的抑菌作用。2.研究發(fā)現(xiàn),XCS007拮... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

拮抗菌YBM-4、YJC-4和XCS007對煙草黑脛病菌的抑制作用Fig.2.1InhibitingeffectofstainYBM-4andYJC-4onP.nicotianae

2.2 YBM-4、YJC-4 和 XCS007 拮抗菌粗提物對黑脛病菌的抑制效果ibiting effect of crude extract YBM-4,YJC-4 and XCS007 strain on P. nic；B：YBM-4 菌落直徑 d6=43.24mm；C：YJC-4 菌落直徑 d7=71.71mm；D：XCS0ntrol group d5=90.00mm;B: Colony diameter of YBM-4 bacterium d6=12.76mm;C: Colonbacterium d7=23.50mm;D: Colony diameter of XCS007 bacterium d8=7.13mm種重要的真菌性土傳病害，可以危害任何生長階段的煙株和；劉曉俠等，2004）。被侵染的煙苗常表現(xiàn)出黑脛、穿大褂eller，1998）。煙草黑脛病的防治通常采取選育抗病品種、化措施，近些年，由于化學(xué)農(nóng)藥的濫用和煙草抗病品種種植年藥性和品種抗病性逐漸喪失等后果，嚴(yán)重威脅著煙草的生產(chǎn)不易產(chǎn)生抗藥性以及對人畜安全等優(yōu)勢為煙草綠色防控發(fā)展與應(yīng)用作為其重要內(nèi)容成為發(fā)展的必然趨勢。本研究采用稀法從黑脛病病株的根部土壤中分離和篩選出 12 株對黑脛病007、YBM-4 和 YJC-4 等 3 株拮抗菌的拮抗作用最明顯，防

觀察菌液的變色情況和杜氏玻璃管中的產(chǎn)氣狀況。.3 拮抗菌的 16S rDNA 的序列測定根據(jù) DNA 提取試劑盒的步驟，取過夜培養(yǎng)的拮抗菌 1 mL，經(jīng)過細(xì)胞裂解、除雜和洗脫后。以 799F(5'-AACAGGATTAGATACCCTG-3')和 R1492(5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3')為引增菌株 16S rDNA。50μL 擴增體系：Template 1 μL，Reverse primer 1 μL，F(xiàn)orward primer 1 μL，2×Easy Tap PCRer Mix 25 μL，ddH2O 22 μL。PCR 反應(yīng)體系：94 ℃ 5 min，94 ℃ 30 sec，55 ℃ 30 sec，72 ℃ 1 min，35 cycles，72 ℃min。PCR 產(chǎn)物委托青島擎科生物技術(shù)有限公司進行序列測定，PCR 產(chǎn)物序列測定后，利用 BLAST進行相似性比較，用 MEGA5.1 的 Neighbor-Joining 法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。 試驗結(jié)果.1 煙草黑脛病拮抗菌的形態(tài)學(xué)鑒定.1.1 拮抗菌的革蘭氏染色鑒定

【參考文獻】：
期刊論文
[1]黃瓜枯萎病拮抗菌GK-6抗菌物質(zhì)的產(chǎn)生條件[J]. 張雪輝,唐蕊,魏洪亮.  中國瓜菜. 2016(12)
[2]Act0988拮抗菌株鑒定及培養(yǎng)條件與菌株生長關(guān)系研究[J]. 張鏡,牟利輝,劉志偉,況偉,黃思梅,刁樹平,江娜,管曦光.  生物技術(shù)通報. 2016(07)
[3]黃綠綠僵菌懸乳劑與低劑量阿維菌素對Q型煙粉虱的聯(lián)合防治作用[J]. 李茂業(yè),陳德鑫,林華峰,李世廣,潘敬,吳圣勇.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(13)
[4]煙草黑脛病生防菌的篩選、定殖及應(yīng)用評價[J]. 曾衡,徐迪紅,冀志霞,陳守文,魏雪團.  應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報. 2015(04)
[5]煙草黑脛病拮抗細(xì)菌復(fù)合菌株的篩選與防治效果評價[J]. 喻會平,羅定棋,代園鳳,徐傳濤,陳雪.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2015(08)
[6]煙草拮抗內(nèi)生細(xì)菌的篩選與防病促生長效果[J]. 楊珍福,吳毅歆,陳映嵐,何月秋.  中國煙草科學(xué). 2014(06)
[7]一株Bacillus methylotrophilus的鑒定及對煙草疫霉防效研究[J]. 李祖紅,曾嶸,陳龍,李夢嬌,陳如海,代吉林,趙明富,文國松.  云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2014(06)
[8]漸狹蠟蚧菌Lecanicillium attenuatum產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的活性及對南方根結(jié)線蟲卵孵化的抑制作用[J]. 趙洋,陳德鑫,黃化剛,武俠.  植物保護學(xué)報. 2014(05)
[9]煙草疫霉拮抗菌枯草芽孢桿菌21b菌株的分離鑒定及其生物學(xué)特性研究[J]. 王進,黃艷飛,汪漢成,王茂勝,陸寧,余知和.  微生物學(xué)通報. 2014(12)
[10]植物源藥劑及化學(xué)藥劑聯(lián)合保健技術(shù)對烤煙黑脛病的防治效果[J]. 王若焱,夏志林,向小華,張海芳,冉茂,羅倩茜,吳澤剛,游安弟,蘇五雷,廖姝娜.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2014(13)

博士論文
[1]熒光假單胞菌Pseudomonas fluorescens P-72-10菌株對煙草黑脛病的生防機理研究[D]. 董國菊.西南大學(xué) 2012

碩士論文
[1]兩株生防菌對煙草黑脛病的抑制活性及其特性研究[D]. 王晶晶.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]煙草根際促生細(xì)菌的分離、篩選及防治黑脛病研究[D]. 顧金剛.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2000



本文編號：3403305