昆蟲遇到不利自身發(fā)育條件時會表現(xiàn)出發(fā)育停滯的現(xiàn)象,研究稱這種現(xiàn)象為滯育（diapause）。昆蟲在各個時期均可以發(fā)生滯育,但是對某一種昆蟲而言,發(fā)生滯育的時期通常是固定的。滯育狀態(tài)下的昆蟲表現(xiàn)出新陳代謝速率的大幅度降低及對外界環(huán)境抗性的顯著提高,這兩種變化導致了昆蟲壽命的延長。人為的將滯育分為六個階段。松毛蟲赤眼蜂是一種重要的卵寄生蜂,對多種重要的鱗翅目害蟲有較好的防控效果。而且在松毛蟲赤眼蜂的工廠化生產(chǎn)中已經(jīng)運用了滯育技術(shù),但是對其滯育機制的研究卻尚未見報道。本研究選取5個不同的發(fā)育階段（滯育預蛹期;正在誘導解除滯育的預蛹期;經(jīng)過滯育的蛹期;正常發(fā)育的預蛹期;正常發(fā)育的蛹期）,利用熒光定量,蛋白印跡等手段,分析熱激蛋白70（HSP70）基因和一氧化氮合酶（NOS）基因的序列的特征并對其在不同發(fā)育階段的表達量進行分析。研究結(jié)果如下:1.運用RACE技術(shù)克隆了HSP70的全長序列（Genbank登錄號為MN709377）,長度為2,666 bp,其中,編碼區(qū)長度為1,992 bp,5’非編碼區(qū)（UTR）與3’非編碼區(qū)（UTR）長度分別為49 bp和625 bp。HSP70基因編碼區(qū)編碼6... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學吉林省

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

試驗整體技術(shù)路線圖

提取的總RNA電泳條帶較為清晰,能看到3條較為明顯的條帶,分別為28S rRNA,18S rRNA和5S rRNA,無明顯的拖帶現(xiàn)象,證明RNA未發(fā)生降解,具有完整性,可用于后續(xù)實驗（圖2.1）。A260/280值在1.9 ~ 2.1之間,濃度在594.555 ~ 941.903 ng/μl之間（表2-5）。表2-5 DeNovix分光光度計測定的RNA濃度和吸光值 Tab.2-5 The concentration and absorption of RNA as measured by DeNovix spectrophotometer 樣品 Samples RNA濃度(ng/μl) A260/A280 A260/A230 Dpre 941.903 1.991 2.425 DT 923.124 1.895 2.373 Dp 594.555 1.976 2.409 NDpre 828.237 1.990 2.391 NDp 709.283 1.913 2.289

試驗根據(jù)SMARTer? RACE 5"/3" Kit要求及步驟,提取松毛蟲赤眼蜂總RNA,對HSP70進行3" RACE Outer Primer和5" RACE Outer Primer及特異性引物（HSP70gsp1,HSP70gsp2）設(shè)計,最終得到3"端片段長度為886 bp和5"端片段長度為407 bp（圖2.2-A）。用DNAMAN V6軟件將得到的3"端片段和5"端片段與中間片段進行拼接,獲得一條長度為2,666 bp的松毛蟲赤眼蜂HSP70 cDNA全長序列（圖2.2-B）（Genbank登錄號：MN709377）。其中包括1,992 bp的開放閱讀框,3"端非編碼區(qū)625 bp,5"端非編碼區(qū)49 bp,AATAAA polyA加尾信號位于2,128 bp處。2.2.3 TdHSP70基因序列分析結(jié)果

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]大豆食心蟲滯育與非滯育幼蟲過冷卻能力及其體內(nèi)主要生化物質(zhì)含量比較[J]. 李新暢,崔娟,唐佳威,夏婷婷,徐偉,史樹森.  昆蟲學報. 2019(09)
[3]誘導始期、溫度和歷期對松毛蟲赤眼蜂滯育誘導及解除滯育的影響[J]. 張俊杰,張雪,杜文梅,阮長春,臧連生,任炳忠.  植物保護學報. 2018(06)
[4]家蠶中調(diào)控胚胎滯育的滯育激素及其受體研究概況[J]. 沈張飛,解鴻青,時連根.  昆蟲學報. 2018(11)
[5]Limb symmetry index in competitive alpine ski racers:Reference values and injury risk identification according to age-related performance levels[J]. Lisa Steidl-Müller,Carolin Hildebrandt,Erich Müller,Christian Fink,Christian Raschner.  Journal of Sport and Health Science. 2018(04)
[6]肽聚糖識別蛋白AaPGRP-LC參與埃及伊蚊的抗細菌免疫反應(yīng)[J]. 楊青泰,趙莉藺,鄒振,王燕紅,馬瑞燕.  昆蟲學報. 2018(01)
[7]我國赤眼蜂工廠化繁育技術(shù)改進及防治農(nóng)業(yè)害蟲應(yīng)用現(xiàn)狀[J]. 張俊杰,阮長春,臧連生,邵璽文,史樹森.  中國生物防治學報. 2015(05)
[8]棉鈴蟲轉(zhuǎn)錄因子c-Myc基因在滯育和非滯育蛹腦中的表達分析及多克隆抗體制備[J]. 陳偉,徐衛(wèi)華.  昆蟲學報. 2015(02)
[9]一氧化氮（NO）作為信號分子在神經(jīng)系統(tǒng)中的作用[J]. 林慶錄.  中國地方病防治雜志. 2014(S2)
[10]家蠶滯育生物鐘蛋白質(zhì)EA4基因的cDNA克隆和序列分析[J]. 王玉軍,徐世清,司馬楊虎,吳陽春,劉瑩,柳學廣,叢海峰.  蠶業(yè)科學. 2007(01)

博士論文
[1]水稻二化螟赤眼蜂寄生效果評價及其滯育機制研究[D]. 張俊杰.東北師范大學 2015

碩士論文
[1]家蠶若干滯育關(guān)聯(lián)基因蛹期表達分析及功能研究[D]. 蔣濤.江蘇科技大學 2017



本文編號：3246852