番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus,TSWV）是布尼亞病毒科（Bunyaviridae）番茄斑萎病毒屬（Tospovirus）的代表種,該屬病毒是唯一侵染植物的病毒。由于該病毒的寄主廣泛,主要傳毒介體西花薊馬分布范圍廣,且傳毒持久,造成了全球范圍內(nèi)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,因此對于番茄斑萎病毒的研究是非常有迫切及有意義的。本研究通過在本氏煙及黃煙上摩擦接種TSWV,并收集發(fā)病系統(tǒng)葉,蔗糖梯度離心提取TSWV病毒顆粒,并通過SDS-PAGE驗(yàn)證獲得了純度較高的病毒顆粒,進(jìn)一步進(jìn)行質(zhì)譜分析,分析結(jié)果為提取出的病毒顆粒中含有病毒蛋白如復(fù)制蛋白R(shí)dRp、糖蛋白Gn、Gc、非結(jié)構(gòu)蛋白NSs、核衣殼蛋白N,另外還有植物蛋白hsp70、Sar1等。由于TSWV的外殼蛋白N可以與RdRp結(jié)合形成Ribonuc1eoprotein（RNP）,主要負(fù)責(zé)病毒的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄,對于研究該病毒的形成具有重大作用。但是由于RdRp蛋白太大,難以完整表達(dá),因此在本研究中通過分片段克隆插入載體,再通過原核表達(dá)不同片段的方式測試其與N的互作。將原核表達(dá)的RdRp不同片段與N互作,發(fā)現(xiàn)帶有His標(biāo)簽的Rd... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?ＴＳＷＶ蔗糖離心梯度??Ｆｉｇ．２－１?Ｓｕｃｒｏｓｅ?ｇｒａｄｉｅｎｔ?ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＴＳＷＶ??

溫度為５６°Ｃ，選擇兩個(gè)陽性克隆搖菌提質(zhì)粒。兩個(gè)質(zhì)粒均用Ｔ７Ｆ和Ｔ７Ｒ進(jìn)行測序，??準(zhǔn)備原核表達(dá)蛋白。１號(hào)克隆轉(zhuǎn)化到Ｒｏｓｓｅｔａ中用ＩＰＴＧ誘導(dǎo)蛋白，ＳＤＡ－ＰＡＧＥ電泳后??可以看到一條約５８?ｋＤａ大小的目標(biāo)蛋白條帶（圖３－２）。??Ｍ?ＢＳＡ?１?２?３??ｉ〇〇ｋｄ??７０ｋＤ??５５ｋＤ?ｍｍ?？?ｓ．??４０ＫＤ?故??３５ｋＤ??Ｈｒ．?＾?Ｐｗ??％??圖?３－２?ｐＥＴ２８ａ－ＲｄＲｐ２３８０＿２８７８ａａ?原核表達(dá)純化??Ｆｉｇ．３－２?ｐＥＴ２８ａ－ＲｄＲｐ２３８０?２８７８ａａ?ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｎｄ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ??注：本圖中Ｍ：蛋白Ｍａｋｅｒ；丨－３：不同濃度下的ｐＥＴ２８ａ－ＲｄＲｐ２３８０－２８７８ａａ表達(dá)純化蛋白??３６??

山于ＲｄＲｐ蛋「丨太大，難以完整表達(dá)，因此將它分片段進(jìn)行表達(dá)，測試與Ｎ的互作。??將原核農(nóng)達(dá)的ＲｄＲｐ?片段ＵＮ吖作，發(fā)現(xiàn)帶“Ｈｉｓ標(biāo)簽的ＲｄＲｐ２Ｍ８ａａ?ｊＶ段與ＧＳＴ－Ｎ??有微弱的互作現(xiàn)象，設(shè)置削性對照排除了?ＧＳＴ蛋白與ＲｄＲｐ互作的＂丨能（圖３－４）。??ＧＳＴ－Ｎ?ＧＳＴ??／／?＾??６ｒｔｓ－ＲＤＲＰ＾Ｔ３－＾??ＧＳＴ?ｐｕｌｌ?ｄｏｗｎ??ＷＢ?Ｈｉｓ?ａｎｔｂｏｄｙ??ＧＳＴ－Ｎ?一??ＧＳＴ?ｐｕｌｌ?ｄｏｗｎ??ＷＢ?ＧＳＴｗｔｉｂｏｄｙ??ＧＳＴ?＾??圖３－４?ＧＳＴ?ｐｕｌ卜ｄｏｗｎ驗(yàn)證Ｎ與ＲｄＲｐ的互作??Ｆｉｇ．３－４?ＧＳＴ?ｐｕｌｌ－ｄｏｗｎ?ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ?Ｎ?ａｎｄ?ＲｄＲｐ?ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ??３７??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3140954