禾谷鐮刀菌（Fusarium graminearum）是小麥赤霉病主要的致病真菌,寄主范圍主要是禾谷類作物。鐮刀菌侵染會(huì)使產(chǎn)量和品質(zhì)下降,殘留的真菌毒素如玉米赤霉烯酮類（Zearalenone,ZEN）和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（Deoxynivallenol,DON）嚴(yán)重危害健康。同時(shí),DON也是重要的致病因子,在小麥的侵染與致病中發(fā)揮重要作用。烯�；o酶A水合酶（enoyl-CoA hydratase,Ech1）能夠降解脂肪酸,是脂肪酸β-氧化的重要過(guò)程。但是,在植物病原真菌中了解甚少。為此,我們對(duì)禾谷鐮刀菌FgEch1進(jìn)行了研究。采用生物信息學(xué)的方法在禾谷鐮刀菌基因組中得到一個(gè)FgEch1基因。利用Split-marker的方法構(gòu)建禾谷鐮刀菌FgEch1基因敲除載體,通過(guò)PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法獲得FgEch1基因敲除突變體?Ech1和回復(fù)菌株?Ech1-C。分析FgEch1基因敲除突變體的相關(guān)表型變化,闡明FgEch1在禾谷鐮刀菌中的功能。突變體具有下列的特征:1)突變體?Ech1對(duì)菌落生長(zhǎng)沒(méi)有影響。2)突變體影響短鏈脂肪酸的利用。在含正丁酸和正己酸的MM培養(yǎng)基上相對(duì)生長(zhǎng)速率分別下... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 小麥赤霉病研究進(jìn)展
        1.1.1 小麥赤霉病概況
        1.1.2 禾谷鐮刀菌的生物學(xué)特性
        1.1.3 禾谷鐮刀菌致病基因的研究進(jìn)展
        1.1.4 小麥赤霉病防治措施
    1.2 脂肪酸β-氧化與烯酰輔酶A水合酶
        1.2.1 脂肪酸運(yùn)輸與β-氧化
        1.2.2 過(guò)氧化物酶體β-氧化
        1.2.3 烯脂酰CoA水合酶
        1.2.4 真菌烯脂酰CoA水合酶研究現(xiàn)狀
    1.3 該項(xiàng)研究目的和意義
2 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株和載體
        2.1.2 主要溶液配制配方
        2.1.3 培養(yǎng)基配制方法
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 禾谷鐮刀菌FgEch1基因結(jié)構(gòu)分析
        2.2.2 禾谷鐮刀菌的保存和培養(yǎng)
        2.2.3 提取禾谷鐮刀菌基因組DNA
        2.2.4 酵母和大腸桿菌質(zhì)粒DNA提取方法
        2.2.5 普通PCR擴(kuò)增反應(yīng)
        2.2.6 PCR產(chǎn)物純化和DNA瓊脂糖凝膠膠回收
        2.2.7 構(gòu)建禾谷鐮刀菌FgEch1基因敲除載體
        2.2.8 原生質(zhì)體制備和轉(zhuǎn)化
        2.2.9 PCR驗(yàn)證敲除轉(zhuǎn)化子
        2.2.10 Southernblot驗(yàn)證敲除轉(zhuǎn)化子
        2.2.11 禾谷鐮刀菌FgEch1基因回復(fù)
            2.2.11.1 構(gòu)建FgEch1基因回復(fù)載體
            2.2.11.2 獲取FgEch1基因回復(fù)菌株
        2.2.12 從生物學(xué)表型分析FgEch1基因敲除突變體
            2.2.12.1 觀察菌落形態(tài)與測(cè)量菌落生長(zhǎng)速度
            2.2.12.2 觀察菌落的菌絲末端分支
            2.2.12.3 測(cè)定菌落對(duì)脂肪酸利用情況
            2.2.12.4 無(wú)性生殖測(cè)定
            2.2.12.5 測(cè)定氧脅迫下的敏感性
            2.2.12.6 測(cè)定有性生殖表型
            2.2.12.7 FgEch1突變體的致病性測(cè)定
3 結(jié)果與分析
    3.1 禾谷鐮刀菌FgEch1結(jié)構(gòu)和進(jìn)化樹(shù)分析
        3.1.1 禾谷鐮刀菌FgEch1基因的獲得
    3.2 禾谷鐮刀菌FgEch1基因的敲除
        3.2.1 敲除載體構(gòu)建過(guò)程
        3.2.2 驗(yàn)證敲除突變體
            3.2.2.1 PCR驗(yàn)證
            3.2.2.2 Southenblot驗(yàn)證
    3.3 獲得禾谷鐮刀菌FgEch1回復(fù)菌株
        3.3.1 構(gòu)建FgEch1基因回復(fù)載體和回復(fù)菌株轉(zhuǎn)化
        3.3.2 驗(yàn)證回復(fù)菌株?Ech1-C
    3.4 FgEch1基因敲除突變體的表型觀察
        3.4.1 FgEch1基因不影響菌落生長(zhǎng)
        3.4.2 FgEch1基因調(diào)控脂肪酸的利用
        3.4.3 FgEch1基因影響孢子產(chǎn)量與孢子萌發(fā)
        3.4.4 FgEch1基因不影響有性生殖
        3.4.5 FgEch1基因調(diào)控致病性
2O₂脅迫敏感性">        3.4.6 FgEch1基因調(diào)控對(duì)H₂O₂脅迫敏感性
4 討論
5 總結(jié)與展望
    5.1 實(shí)驗(yàn)總結(jié)
    5.2 研究展望
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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