交叉保護(hù)是目前植物病毒病防治中比較有效的策略。交叉保護(hù)的核心是弱毒疫苗的創(chuàng)制、疫苗寄主范圍及接種時(shí)機(jī)的選擇。黃瓜花葉病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是雀麥花葉病毒科(Bromoviridae)黃瓜花葉病毒屬(Cucumovirus)的成員,是三分體的單鏈正義RNA病毒。CMV主要借助蚜蟲以非持久性的方式傳播,也通過種子或者汁液摩擦等傳播,是目前已知的寄主范圍最廣泛的病毒之一,在弱毒疫苗的研究中具有極大潛力。本研究主要進(jìn)行了部分種類植物種子是否攜帶CMV的檢測(cè)、不同CMV分離物的致病力比較并分析決定致病力差異的區(qū)段,為CMV弱毒疫苗的研制和疫苗寄主范圍提供材料和數(shù)據(jù)支持。通過Western blot和RT-PCR對(duì)2種豆科植物和3種茄科植物約550粒種子中攜帶CMV情況進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明辣椒、番茄、花生的所檢測(cè)品種的種子中不攜帶CMV;茄子的所檢測(cè)品種的種子中攜帶CMV率為3.3%;豇豆的所檢測(cè)品種的種子中攜帶CMV率較高,高達(dá)為52.5%,暗示在豇豆中利用弱毒疫苗進(jìn)行CMV病毒病防治存在局限性。另外,在所檢測(cè)的其他4種植物中可利用弱毒疫苗進(jìn)行CMV病毒病的防治。在本氏煙上進(jìn)行了2種CMV分離物的致病性比較。CMV煙草分離物(CMV_(Fny))侵染本氏煙表現(xiàn)強(qiáng)致病性,具體表現(xiàn)為植株嚴(yán)重矮化,葉片皺縮、花葉。CMV花生分離物(CMV_(TA-pe))侵染本氏煙表現(xiàn)弱致病性,植株無明顯發(fā)病癥狀。通過兩種分離物基因組間RNA 1、RNA 2和RNA 3的不同組合接種,發(fā)現(xiàn)CMV_(TA-pe)的RNA 1或RNA 2被CMV_(Fny)的RNA 1、RNA 2替換后,均表現(xiàn)強(qiáng)致病性,說明CMV_(TA-pe)在本氏煙上的弱致病性主要由其RNA 1和RNA 2決定,其中RNA 2的作用尤為關(guān)鍵。說明CMV不同分離物存在寄主相關(guān)的致病性分化,且RNA 2是主要決定區(qū)段。利用RACE及RT-PCR技術(shù)克隆CMV牛矢果分離物(CMV_(NSG))的全基因組序列。用DNAMAN進(jìn)行序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)CMV_(NSG)分離物的序列與CMV其它分離物基因組整體差異較大,RNA 1與大部分分離物同源性較低,在74.18%-78.33%,與少數(shù)分離物同源性較高,在97.82%-98.99%;RNA 2與大部分分離物同源性較低,在69.10%-75.28%,與少數(shù)分離物同源性較高,在98.29%-98.62%;RNA 3與大部分分離物同源性較低,在71.49%-72.98%,與少數(shù)分離物同源性較高,在96.93%-98.92%。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn)CMV_(NSG)分離物與CMV其它分離物親緣性低,其中在RNA 1或RNA 2的系統(tǒng)進(jìn)化樹中均是獨(dú)自形成一個(gè)分支。暗示CMV_(NSG)分離物是一個(gè)CMV新分離物。本研究為基于CMV的弱毒疫苗創(chuàng)制及應(yīng)用提供了研究材料和數(shù)據(jù)支持。
【學(xué)位單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S432.41
【部分圖文】：

3 結(jié)果與分析3.1 部分豆科、茄科植物種子中攜帶 CMV 的情況選取 2 種豆科植物（花生、豇豆）和 3 種茄科植物（番茄、辣椒和茄子）進(jìn)行種子中攜帶 CMV 的檢測(cè)，為通過弱毒疫苗防治這些植物中的 CMV 病毒病提供依據(jù)。提取種子長(zhǎng)成的幼苗的總 RNA 和蛋白，利用 RT-PCR 和 Western blot 分別進(jìn)行核酸（圖 1）和蛋白水平檢測(cè)（圖 2）。匯總檢測(cè)情況，發(fā)現(xiàn)所檢測(cè)的 6 個(gè)花生品種（山花 106、�；� 1 號(hào)、YL-2、遠(yuǎn)雜、L11Y-5、L9Y-2）種子中不攜帶 CMV，2 個(gè)辣椒品種（滿分 106、新選 8818 線椒）種子中不攜帶 CMV，2 個(gè)番茄品種（改良毛粉 802F1、秦皇天使粉）種子中不攜帶 CMV，茄子（五岳長(zhǎng)茄）種子中攜帶 CMV 率為 3.3%，豇豆（壓塌架萬斤菜）種子攜帶 CMV 率為 52.5%（表 1）。

種子長(zhǎng)成的幼苗的總 RNA 和蛋白，利用 RT-PCR 和 Western blot和蛋白水平檢測(cè)（圖 2）。匯總檢測(cè)情況，發(fā)現(xiàn)所檢測(cè)的 6 個(gè)花生品種號(hào)、YL-2、遠(yuǎn)雜、L11Y-5、L9Y-2）種子中不攜帶 CMV，2 個(gè)辣椒品種18 線椒）種子中不攜帶 CMV，2 個(gè)番茄品種（改良毛粉 802F1、不攜帶 CMV，茄子（五岳長(zhǎng)茄）種子中攜帶 CMV 率為 3.3%，豇種子攜帶 CMV 率為 52.5%（表 1）。圖 1 壓塌架萬斤菜種子攜帶 CMV 的核酸檢測(cè)Fig. 1 Nucleic acid detection of Ya ta jia wan jin cai seeds carrying CMVNote: DM2000: DNAMarker 2000; 1: Sample 1

圖 3 CMVTA-pe分離物與 CMVFny分離物在本氏煙上致病性差異分析Fig. 3Analysis of pathogenicity difference between CMVTA-peisolate and CMVFnyisolate in N. benthamianaNote: Fny: CMVFny; TA-pe: CMVTA-pe; R1: RNA1; R2: RNA2; R3: RNA3.圖 4 CMVTA-pe分離物與 CMVFny分離物侵染本氏煙 Northern blot 檢測(cè)Fig. 4 Northern blot detection of CMVTA-peisolate and CMVFnyisolate infecting N. benthamianaNote: Fny: CMVFny; TA-pe: CMVTA-pe; R1: RNA1; R2: RNA2; R3: RNA3.3.2.2 兩種 CMV 分離物在本氏煙上的致病力的決定因子分析
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2839037