根結(jié)線蟲病是嚴(yán)重威脅世界蔬菜產(chǎn)業(yè)的重要土傳病害之一,造成巨大的產(chǎn)量損失。本研究篩選出2株對(duì)蔬菜根結(jié)線蟲病具有良好生防潛力的生防細(xì)菌,并對(duì)這2株生防細(xì)菌進(jìn)行了鑒定、發(fā)酵條件的優(yōu)化、活性物質(zhì)的提取以及分離純化等方面進(jìn)行了系統(tǒng)性的研究。其結(jié)果如下:1.通過室內(nèi)觸殺試驗(yàn)獲得2株高效菌株Sneb709與Sneb811,其發(fā)酵液對(duì)南方根結(jié)線蟲二齡幼蟲(J2)及其卵的孵化具有顯著的活性作用。Sneb709與Sneb811發(fā)酵液毒殺南方根結(jié)線蟲J2的校正死亡率分別為91.10%(24 h)、98.09%(48 h)與93.15%(24h)、98.17%(48 h);抑制根結(jié)線蟲卵孵化的相對(duì)抑制率分別為75.00%(24 h)、62.5%(48 h)與100%(24 h)、75.00%(48 h)。后將其發(fā)酵液應(yīng)用到室內(nèi)盆栽及溫室田間試驗(yàn)中檢測(cè)其防病效果,試驗(yàn)結(jié)果表明二者的發(fā)酵液不但對(duì)南方根結(jié)線蟲病具有較好的防治效果,還能促進(jìn)番茄植株生長(zhǎng)以及提高果實(shí)數(shù)量與重量。2.通過單菌落培養(yǎng)、革蘭氏染色、透射電鏡觀察、生理生化反應(yīng)以及16S rDNA生物學(xué)鑒定對(duì)高效細(xì)菌Sneb709與Sneb811進(jìn)行鑒定,結(jié)果表明,Sneb709為解淀粉芽胞桿菌(Bacillus amyloliquefaciens);Sneb811為莓實(shí)假單胞菌(Pseudomonas fragi)。3.試驗(yàn)初步確定適合解淀粉芽胞桿菌Sneb709的發(fā)酵條件為:初始pH值為中性,裝液量為每250 m L錐形瓶?jī)?nèi)裝載150 mL發(fā)酵液,轉(zhuǎn)速為180 r/min,發(fā)酵時(shí)間為24 h,發(fā)酵培養(yǎng)基組分為1%的葡萄糖、0.5%的酵母膏、0.3%的NaCl和0.2%的MgSO_4;莓實(shí)假單胞菌Sneb811的發(fā)酵條件為:初始pH值為中性,裝液量為每250 mL錐形瓶?jī)?nèi)裝載150 mL發(fā)酵液,轉(zhuǎn)速為160 r/min,發(fā)酵時(shí)間為48 h,發(fā)酵培養(yǎng)基組分為1%的蔗糖,0.5%的蛋白胨,0.3%的NaCl和0.2%的MgSO_4。4.通過對(duì)發(fā)酵液的離心、抽濾、甲醇萃取、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)和高效液相色譜(HPLC)等方法系統(tǒng)性地探究了解淀粉芽胞桿菌Sneb709對(duì)南方根結(jié)線蟲具有毒殺效果的活性物質(zhì),初步確定所分離的活性物質(zhì)為脂肽類代謝產(chǎn)物。然而脂肽類抗生素并未有理想中的致死效果,其對(duì)南方根結(jié)線蟲J2的校正死亡率僅有34.83%。因此,推斷在Sneb709的活性物質(zhì)脂肽類代謝產(chǎn)物或許不是其毒殺南方根結(jié)線蟲的主要活性物質(zhì)。
【學(xué)位單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S476
【部分圖文】：

復(fù) 3 次并隨機(jī)分布。根結(jié)線蟲的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為：0 級(jí)：沒有根結(jié)；1 級(jí)：根結(jié)占整個(gè)根系的 1%-15%；2 級(jí)根結(jié)占整個(gè)根系的 16%-25%；3 級(jí)：根結(jié)占整個(gè)根系的 26%-50%；4 級(jí)：根結(jié)占整個(gè)根系的 51%-75%；5 級(jí)：根結(jié)占整個(gè)根系的 76%以上（Barker K R et al.，1985）。防治效果(%)=對(duì)照組根結(jié)指數(shù)-處理組根結(jié)指數(shù)×100對(duì)照組根結(jié)指數(shù)2.3 結(jié)果與分析2.3.1 生防細(xì)菌發(fā)酵液對(duì)南方根結(jié)線蟲校正死亡率及相對(duì)抑制率的測(cè)定通過室內(nèi)觸殺試驗(yàn)對(duì) 1458 份細(xì)菌發(fā)酵液中篩選出以下十株效果顯著的高效細(xì)菌發(fā)酵液，其對(duì)南方根結(jié)線蟲 J2 毒殺的校正死亡率均達(dá)到 60%以上（圖 2-1），并且對(duì)南方根結(jié)線蟲卵孵化具有一定的抑制作用（圖 2-2）。其中 Sneb709 與 Sneb811 無論是對(duì)南方根結(jié)線蟲 J2 的毒殺作用，還是對(duì)南方根結(jié)線蟲卵孵化的抑制作用，都顯示出相對(duì)最高的活性。

2.3.2 高效細(xì)菌發(fā)酵液對(duì)南方根結(jié)線蟲校正死亡率及相對(duì)抑制率的測(cè)定繼續(xù)采用室內(nèi)觸殺試驗(yàn)對(duì) 2.3.1 初篩所得 10 株細(xì)菌菌株進(jìn)行復(fù)篩，結(jié)果表明，Senb709 與 Sneb811 細(xì)菌發(fā)酵液的綜合效果更為顯著。其發(fā)酵上清液對(duì)南方根結(jié)線蟲 J2有很強(qiáng)的致死效果，并且其致死效果隨著處理時(shí)間的增加而增強(qiáng)。處理 24 h 時(shí)，Senb709及 Sneb811 對(duì) J2 的校正死亡率分別為 91.10%與 93.15%；48 h 時(shí)，對(duì) J2 的校正死亡率分別為 98.09%與 98.17% （圖 2-3）。此外，南方根結(jié)線蟲的卵經(jīng) Sneb709 與 Sneb811發(fā)酵上清液處理后，其孵化率也顯著降低。處理 24 h 時(shí)，對(duì)卵孵化的相對(duì)抑制率分別為87.50%與 100%；48 h 時(shí)，對(duì)卵孵化的相對(duì)抑制率分別為 62.50% 與 75.00%（圖 2-4）。圖 2-2 細(xì)菌發(fā)酵液對(duì)南方根結(jié)線蟲卵孵化的抑制效果Figure 2-2 The inhibitory effect of the bacterial fermentation broth against M. incognita eggs hatch

圖 2-3 高效細(xì)菌發(fā)酵液對(duì)南方根結(jié)線蟲 J2 的毒殺效果he poisoning effect of the efficient bacterial fermentation brM. incognita J2 hatch 2-4 高效細(xì)菌發(fā)酵液對(duì)南方根結(jié)線蟲卵孵化的抑制效果he inhibitory effect of the efficient bacterial fermentation b

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本文編號(hào)：2834909