山核桃干腐病是山核桃生產(chǎn)中最主要病害,嚴重影響了山核桃產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。在種植中,臨安實生山核桃發(fā)病嚴重,但是美國砧木嫁接臨安實生山核桃(文中簡稱美國嫁接山核桃)和湖南砧木嫁接臨安實生山核桃(文中簡稱湖南嫁接山核桃)發(fā)病較輕。本文以臨安實生山核桃、美國嫁接山核桃、湖南嫁接山核桃、美國薄殼山核桃和湖南實生山核桃為材料,測定樹干和樹根中酚酸含量、生物堿含量和過氧化氫酶(CAT)、多酚氧化酶(PPO)、過氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)活性之間的差異并分析與感病指數(shù)之間的關系,初步探討嫁接山核桃抗干腐病的機理,為臨安實生山核桃干腐病的預防與控制提供科學依據(jù)。主要取得了以下結果:1通過對山核桃林間干腐病調查,發(fā)現(xiàn)臨安實生山核桃的感病指數(shù)最高,發(fā)病程度嚴重;美國嫁接山核桃和湖南嫁接山核桃的感病指數(shù)低,發(fā)病程度較輕微。2年生的山核桃較少感染干腐病,10年生的山核桃感病嚴重。2 HPLC-SPE法測定山核桃樹干和樹根中酚酸種類和含量,發(fā)現(xiàn)均含有沒食子酸和綠原酸。樹干中,嫁接山核桃的總酚酸含量顯著高于臨安實生山核桃;樹根中,2年生的嫁接山核桃總酚酸含量低于臨安實生山核桃,10年生時高于臨安實生山核桃。隨著樹齡增加,樹干和樹根中總酚酸含量都增加。在臨安實生山核桃、美國嫁接山核桃和湖南嫁接山核桃中,2年生與10年生樹干中總酚酸含量與感病指數(shù)間相關系數(shù)分別為0.943和0.768,呈顯著負相關關系。樹干中總酚酸含量越高,感病指數(shù)越低,抗性越強;樹根中總酚酸含量與感病指數(shù)無明顯相關性。3臨安實生山核桃、美國嫁接山核桃和湖南嫁接山核桃的樹干和樹根中總生物堿含量無顯著差異。隨著樹齡增加,5種試材的樹干中總生物堿含量都顯著減少,樹根中除了美國薄殼山核桃顯著增加,其它試材都無明顯變化。2年生樹干和樹根與感病指數(shù)間呈微弱的負相關關系;10年生樹干和樹根與感病指數(shù)為不顯著弱正相關關系。樹干和樹根中總生物堿含量可能影響山核桃的抗病性,但這種相關性不明顯。4嫁接山核桃樹干和樹根中CAT活性和POD活性都高于臨安實生山核桃。隨著樹齡增加,不同試材的CAT活性、POD活性和SOD活性都升高,PPO活性下降。2年生和10年生山核桃樹干中CAT活性與感病指數(shù)的相關系數(shù)分別0.834和0.645,2年生和10年生POD活性與感病指數(shù)相關系數(shù)分別0.834和0.645,樹干中CAT活性POD活性呈顯著負相關。PPO活性和SOD活性與感病指數(shù)的相關系數(shù)小,無明顯的相關性。樹根中的酶活性與感病指數(shù)之間都無明顯的相關性。因此,樹干中CAT和POD活性越高,山核桃的抗病性越強。
【學位單位】：浙江農(nóng)林大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S436.64
【部分圖文】：

用固相萃取法，對樣品提取液進一步純化。固相萃取步驟為：3ml 甲醇、3ml 水活5ml 樣品溶液過柱，3ml 的 10%甲醇-0.1%甲酸淋洗液過柱以去除雜質，5ml 的甲醇甲酸洗脫液將目標物洗脫出來，收集洗脫液。將樣品洗脫液旋蒸濃縮至 2ml，0.45濾膜過濾，收集濾液。3.2.3 標準品溶液的配制稱取沒食子酸標準品和綠原酸標準品 0.01g,置于 50ml 容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，制得沒食子酸和綠原酸混合標準儲備液（0.2mg/ml）；用移液槍分別混合標準儲備液 0.025、3.775、7.525、11.275、15.025ml,用甲醇定容至 50ml 容量中，得 0.1、15.1、30.1、45.1、60.1μg/ml 的標準溶液。3.2.4 系統(tǒng)適用性試驗按照上述色譜條件，分別精密吸取混合標準溶液和十組樣品溶液各 20μL，注HPLC 儀。結果從色譜圖中可以發(fā)現(xiàn)峰形良好，保留時間適中，分離度大于 1.2，40中內可完成整個分離分析過程，標準品 HPLC 色譜圖見圖 3.1。

圖 3.32 年生山核桃樹干（左）和樹根（右）中酚酸 HPLC 色譜圖Figure3.3 HPLC chromatograms of phenolic acids in trunks(left) and roots (right) of 2-year-old hickory注：A 臨安實生山核桃 B 美國嫁接山核桃 C 湖南嫁接山核桃 D 美國薄殼山核桃 E 湖南實生山核桃

15圖 3.410 年生山核桃樹干（左）和樹根（右）中酚酸 HPLC 色譜圖Figure3.4 HPLC chromatograms of phenolic acids in trunks(left) and roots (right) of 10-year-oldhickory注：A 臨安實生山核桃 B 美國嫁接山核桃 C 湖南嫁接山核桃 D 美國薄殼山核桃 E 湖南實生山核桃

【參考文獻】

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本文編號：2830091