山核桃干腐病是山核桃生產(chǎn)中最主要病害,嚴(yán)重影響了山核桃產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。在種植中,臨安實(shí)生山核桃發(fā)病嚴(yán)重,但是美國(guó)砧木嫁接臨安實(shí)生山核桃(文中簡(jiǎn)稱美國(guó)嫁接山核桃)和湖南砧木嫁接臨安實(shí)生山核桃(文中簡(jiǎn)稱湖南嫁接山核桃)發(fā)病較輕。本文以臨安實(shí)生山核桃、美國(guó)嫁接山核桃、湖南嫁接山核桃、美國(guó)薄殼山核桃和湖南實(shí)生山核桃為材料,測(cè)定樹干和樹根中酚酸含量、生物堿含量和過氧化氫酶(CAT)、多酚氧化酶(PPO)、過氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)活性之間的差異并分析與感病指數(shù)之間的關(guān)系,初步探討嫁接山核桃抗干腐病的機(jī)理,為臨安實(shí)生山核桃干腐病的預(yù)防與控制提供科學(xué)依據(jù)。主要取得了以下結(jié)果:1通過對(duì)山核桃林間干腐病調(diào)查,發(fā)現(xiàn)臨安實(shí)生山核桃的感病指數(shù)最高,發(fā)病程度嚴(yán)重;美國(guó)嫁接山核桃和湖南嫁接山核桃的感病指數(shù)低,發(fā)病程度較輕微。2年生的山核桃較少感染干腐病,10年生的山核桃感病嚴(yán)重。2 HPLC-SPE法測(cè)定山核桃樹干和樹根中酚酸種類和含量,發(fā)現(xiàn)均含有沒食子酸和綠原酸。樹干中,嫁接山核桃的總酚酸含量顯著高于臨安實(shí)生山核桃;樹根中,2年生的嫁接山核桃總酚酸含量低于臨安實(shí)生山核桃,10年生時(shí)高于臨安實(shí)生山核桃。隨著樹齡增加,樹干和樹根中總酚酸含量都增加。在臨安實(shí)生山核桃、美國(guó)嫁接山核桃和湖南嫁接山核桃中,2年生與10年生樹干中總酚酸含量與感病指數(shù)間相關(guān)系數(shù)分別為0.943和0.768,呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。樹干中總酚酸含量越高,感病指數(shù)越低,抗性越強(qiáng);樹根中總酚酸含量與感病指數(shù)無(wú)明顯相關(guān)性。3臨安實(shí)生山核桃、美國(guó)嫁接山核桃和湖南嫁接山核桃的樹干和樹根中總生物堿含量無(wú)顯著差異。隨著樹齡增加,5種試材的樹干中總生物堿含量都顯著減少,樹根中除了美國(guó)薄殼山核桃顯著增加,其它試材都無(wú)明顯變化。2年生樹干和樹根與感病指數(shù)間呈微弱的負(fù)相關(guān)關(guān)系;10年生樹干和樹根與感病指數(shù)為不顯著弱正相關(guān)關(guān)系。樹干和樹根中總生物堿含量可能影響山核桃的抗病性,但這種相關(guān)性不明顯。4嫁接山核桃樹干和樹根中CAT活性和POD活性都高于臨安實(shí)生山核桃。隨著樹齡增加,不同試材的CAT活性、POD活性和SOD活性都升高,PPO活性下降。2年生和10年生山核桃樹干中CAT活性與感病指數(shù)的相關(guān)系數(shù)分別0.834和0.645,2年生和10年生POD活性與感病指數(shù)相關(guān)系數(shù)分別0.834和0.645,樹干中CAT活性POD活性呈顯著負(fù)相關(guān)。PPO活性和SOD活性與感病指數(shù)的相關(guān)系數(shù)小,無(wú)明顯的相關(guān)性。樹根中的酶活性與感病指數(shù)之間都無(wú)明顯的相關(guān)性。因此,樹干中CAT和POD活性越高,山核桃的抗病性越強(qiáng)。
【學(xué)位單位】：浙江農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S436.64
【部分圖文】：

用固相萃取法，對(duì)樣品提取液進(jìn)一步純化。固相萃取步驟為：3ml 甲醇、3ml 水活5ml 樣品溶液過柱，3ml 的 10%甲醇-0.1%甲酸淋洗液過柱以去除雜質(zhì)，5ml 的甲醇甲酸洗脫液將目標(biāo)物洗脫出來(lái)，收集洗脫液。將樣品洗脫液旋蒸濃縮至 2ml，0.45濾膜過濾，收集濾液。3.2.3 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制稱取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品和綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品 0.01g,置于 50ml 容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，制得沒食子酸和綠原酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（0.2mg/ml）；用移液槍分別混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 0.025、3.775、7.525、11.275、15.025ml,用甲醇定容至 50ml 容量中，得 0.1、15.1、30.1、45.1、60.1μg/ml 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。3.2.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)按照上述色譜條件，分別精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和十組樣品溶液各 20μL，注HPLC 儀。結(jié)果從色譜圖中可以發(fā)現(xiàn)峰形良好，保留時(shí)間適中，分離度大于 1.2，40中內(nèi)可完成整個(gè)分離分析過程，標(biāo)準(zhǔn)品 HPLC 色譜圖見圖 3.1。

圖 3.32 年生山核桃樹干（左）和樹根（右）中酚酸 HPLC 色譜圖Figure3.3 HPLC chromatograms of phenolic acids in trunks(left) and roots (right) of 2-year-old hickory注：A 臨安實(shí)生山核桃 B 美國(guó)嫁接山核桃 C 湖南嫁接山核桃 D 美國(guó)薄殼山核桃 E 湖南實(shí)生山核桃

15圖 3.410 年生山核桃樹干（左）和樹根（右）中酚酸 HPLC 色譜圖Figure3.4 HPLC chromatograms of phenolic acids in trunks(left) and roots (right) of 10-year-oldhickory注：A 臨安實(shí)生山核桃 B 美國(guó)嫁接山核桃 C 湖南嫁接山核桃 D 美國(guó)薄殼山核桃 E 湖南實(shí)生山核桃

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2830091