【摘要】：新煙堿類農(nóng)藥是具有廣譜和低生物積累的一類新型農(nóng)藥,吡蟲啉是新煙堿類殺蟲劑中應(yīng)用最為廣泛的一類。作為一種低劑量具有顯著殺蟲效果的系統(tǒng)殺蟲劑,吡蟲啉已在全國范圍內(nèi)作為新一代殺蟲劑使用,是一些傳統(tǒng)殺蟲劑(如有機(jī)磷、氨基甲酸酯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥)的良好替代品。然而農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中吡蟲啉的大量使用勢(shì)必會(huì)引起農(nóng)藥殘留,長(zhǎng)期食用帶有農(nóng)藥殘留的糧食、蔬菜、水果,人體內(nèi)會(huì)積累一定量的殘留農(nóng)藥。研究表明吡蟲啉會(huì)影響哺乳動(dòng)物大腦的發(fā)育,具有一定的神經(jīng)毒性、生殖毒性和遺傳毒性,大劑量的吡蟲啉會(huì)引起哺乳動(dòng)物的胸腺,胰腺,骨髓的退行性改變,長(zhǎng)期食用含有吡蟲啉殘留的農(nóng)產(chǎn)品,還會(huì)對(duì)人體胃粘膜造成一定的損傷,因此開發(fā)一種高效實(shí)用的農(nóng)殘檢測(cè)方法具有重要意義。本文獲得吡蟲啉單克隆抗體的基礎(chǔ)上,基于抗原抗體反應(yīng)建立了三種免疫學(xué)檢測(cè)方法,實(shí)現(xiàn)了對(duì)農(nóng)產(chǎn)品中吡蟲啉的特異性檢測(cè)。具體工作內(nèi)容如下:1、建立了間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法(ic-ELISA),并對(duì)相關(guān)條件優(yōu)化,得到回歸方程為y=42.793x-65.32,相關(guān)系數(shù)(R~2)為0.9967,靈敏度(IC_(10))為0.06μg/L,檢測(cè)范圍(IC_(15)-IC_(85))為0.08-3.26μg/L。在與吡蟲啉結(jié)構(gòu)類似的七種農(nóng)藥中,抗體與噻蟲胺、啶蟲脒、噻蟲啉的交叉反應(yīng)率分別為1.18%、4.02%、8.48%,與氯噻啉的交叉反應(yīng)率1.00%,與其他三種農(nóng)藥的交叉反應(yīng)率均0.10%,該方法的回收率在83.61-112.65%之間,與商品化試劑盒檢測(cè)結(jié)果比較相關(guān)系數(shù)(r)為0.9763。2、通過AuNPs負(fù)載大量的HRP形成AuNPs-HRP,再利用LBL技術(shù)對(duì)大量AuNPs-HRP封裝形成膠囊形狀,最后在膠囊表面連接二抗形成納米膠囊探針。基于此探針,本實(shí)驗(yàn)建立了基于納米膠囊探針的吡蟲啉檢測(cè)方法。對(duì)探針的相關(guān)條件進(jìn)行了相關(guān)的優(yōu)化,最終得到相關(guān)回歸方程為y=39.719x-31.238,R~2=0.9487,檢測(cè)范圍(IC_(15)-IC_(85))為0.02-0.84μg/L,靈敏度(IC_(10))=0.01μg/L,比常規(guī)ic-ELISA靈敏度高6倍。該方法的回收率在80.34-120.84%之間,檢測(cè)結(jié)果與商品化試劑盒檢測(cè)結(jié)果相關(guān)系數(shù)(r)為0.9869。3、種子生長(zhǎng)法制備了AuBPs,利用ALP的高效催化能力,催化對(duì)氨基苯磷酸鈉(4-APP)去磷酸化產(chǎn)生對(duì)氨基苯酚(4-AP)和磷酸根離子,4-AP具有還原性,能將Ag~+還原為銀單質(zhì)并沉積到AuBPs表面引起其LSPR的改變(顏色變化和最大吸收峰波長(zhǎng)偏移)。將這反應(yīng)引入到傳統(tǒng)ic-ELISA中建立了基于銀沉積AuBPs的p-ELISA,回歸方程為y=-57.691x+262.22,R2=0.992,檢測(cè)范圍為0.781-12.5μg/L,裸眼檢測(cè)限為0.781μg/L,該檢測(cè)方法對(duì)三種樣品的平均回收率在76.82-124.17%之間,檢測(cè)結(jié)果與商品化試劑盒檢測(cè)結(jié)果相關(guān)系數(shù)(r)為0.9740。本研究建立的三種吡蟲啉免疫學(xué)檢測(cè)方法均能滿足我國規(guī)定的農(nóng)產(chǎn)品中吡蟲啉最高殘留限量標(biāo)準(zhǔn)(MRLs)。回收率均符合美國分析化學(xué)家協(xié)會(huì)(AOAC)標(biāo)準(zhǔn)。本研究建立的三種方法對(duì)于谷物、果蔬類農(nóng)產(chǎn)品中吡蟲啉的檢測(cè)具有可行性。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S481.8
【圖文】：

圖 1.1 吡蟲啉化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig 1.1 Chemical structure of imidaclopri機(jī)理及危害用機(jī)制是通過模擬乙酰膽堿（Ach）競(jìng)受體結(jié)合，抑制 Ach 與乙酰膽堿受體不斷刺激乙酰膽堿受體，從而干擾害蟲導(dǎo)致昆蟲死亡，這與傳統(tǒng)的殺蟲劑作用蟲的中樞神經(jīng)系統(tǒng)，對(duì)哺乳動(dòng)物的毒性存在很多顧慮。研究表明吡蟲啉會(huì)影響[5]、生殖毒性[6, 7]和遺傳毒性[8, 9]，大劑

1.3.9 加標(biāo)回收率的測(cè)定采用對(duì)樣本提取液進(jìn)行稀釋來降低樣本基質(zhì)的影響，并且對(duì)樣品稀釋倍數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。本研究分別對(duì)三種加標(biāo)樣品基質(zhì)進(jìn)行了2、5、10倍稀釋，通過圖1.6得知，隨著樣品稀釋倍數(shù)的增加，三種樣品的競(jìng)爭(zhēng)曲線逐漸與空白對(duì)照競(jìng)爭(zhēng)曲線相符，當(dāng)樣品稀釋倍數(shù)為10倍時(shí)，三種樣品的競(jìng)爭(zhēng)曲線與空白對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線基本吻合，說明10倍稀釋時(shí)三種樣品的基質(zhì)干擾可以忽略，考慮到過高稀釋樣品基質(zhì)同時(shí)也降低了樣品中目標(biāo)物的濃度，所以選擇10倍稀釋樣品基質(zhì)來進(jìn)行樣品檢測(cè)。為了評(píng)價(jià)建立的ic-ELISA方法的準(zhǔn)確性和可行性，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了模擬樣品加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

諶?實(shí)驗(yàn)二 基于納米膠囊探針的吡蟲啉檢測(cè)方法的建立26圖2.1 納米膠囊探針的合成原理及應(yīng)用原理Fig.2.1 Synthesis principle and application principle of nanocapsule probe（A）納米膠囊探針的制備原理圖；（B）基于膠囊探針的檢測(cè)原理圖(A) Schematic of preparation of nanocapsule probe；(B) Schematic of the probebased assay procedure.2.1 材料2.1.1 試劑與耗材NaH2PO4

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本文編號(hào)：2806104