【摘要】：桑樹病害是影響蠶業(yè)生產(chǎn)發(fā)展和實現(xiàn)桑樹生態(tài)價值的重要因素,開展桑樹抗病機制研究,培育抗性新品種,有利于發(fā)揮桑樹的經(jīng)濟和生態(tài)作用。莒選1號是湖桑32號的自然芽變,對多種桑樹病害具有明顯抗性,但其抗病機制還不清楚。本研究以湖桑32號和莒選1號為試驗材料,對莒選1號的表型和抗病性進行了鑒定,對其染色體倍性和SSR標(biāo)記的遺傳多樣性進行了分析,同時比較了莒選1號和湖桑32號的轉(zhuǎn)錄組差異,篩選出了與抗病相關(guān)的差異表達基因,對差異表達基因的代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)進行了探討,并利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)對篩選出的差異表達基因的功能進行了研究,初步揭示了莒選1號的抗病機制。研究結(jié)果為桑樹病害的發(fā)生機制及桑樹對病害的抗性機制研究提供了參考,為桑樹抗病性育種提供了參考基因,對于促進桑樹功能基因組學(xué)研究具有重要作用。本文的主要研究結(jié)果如下:1.莒選1號和湖桑32號的抗病性分析分別對湖桑32號及其突變體莒選1號接種Pst DC3000、�；颐共�、桑粘隔孢菌、桑炭疽菌和丁香假單胞菌,發(fā)現(xiàn)與湖桑32號相比,莒選1號對五種病原菌都具有較強的抗病性。2.莒選1號和湖桑32號的表型差異分析莒選1號與湖桑32號相比,枝條細(xì)而直,皮孔稍大而少;葉片表面稍顯粗糙。掃描電鏡下莒選1號葉片上表皮細(xì)胞嵌合緊密,起伏較大,具大量顆�；蝼[片狀蠟質(zhì)紋飾,氣孔外拱蓋周圍具環(huán)狀隆起的脊,近軸面氣孔間的細(xì)胞間界限明顯。3.莒選1號和湖桑32號的染色體倍性及SSR標(biāo)記的遺傳多樣性分析利用染色體核型分析技術(shù),對湖桑32號和莒選1號染色體數(shù)目進行了鑒定,結(jié)果表明兩者在染色體倍性上無差異。篩選了8條SSR引物用于莒選1號和湖桑32號的遺傳多樣性分析,結(jié)果表明莒選1號和湖桑32號基因組存在SSR標(biāo)記位點的差異。4.莒選1號和湖桑32號的轉(zhuǎn)錄組差異分析分別構(gòu)建了莒選1號和湖桑32號葉片轉(zhuǎn)錄組測序文庫并進行了測序分析,共鑒定出了269,026個unigenes,其中有9674個unigenes在兩文庫間表達差異顯著。同時還鑒定出了3103個抗病基因,其中有195個基因在莒選1號和湖桑32號間表達差異顯著。另外還預(yù)測到2517個轉(zhuǎn)錄因子,其中有133個轉(zhuǎn)錄因子在莒選1號和湖桑32號間表達差異顯著。差異表達unigenes中涉及到脅迫響應(yīng)、生長發(fā)育、代謝調(diào)節(jié)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等多種生理過程。5.桑樹類甜蛋白基因Mul-TLP的功能研究轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析結(jié)果表明桑樹類甜蛋白基因Mul-TLP在莒選1號和湖桑32號間表達差異顯著,為分析該基因的生物功能,利用PCR技術(shù)克隆得到了Mul-TLP,構(gòu)建了其植物表達載體,轉(zhuǎn)化擬南芥并獲得了轉(zhuǎn)基因植株。對轉(zhuǎn)基因擬南芥接種Pst DC3000和灰霉菌,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植株對Pst DC3000和灰霉菌具有較強的抗性,表明Mul-TLP基因?qū)υ鰪娷爝x1號的抗性具有一定作用。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S888.7

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