【摘要】：辣椒疫病是由辣椒疫霉菌引發(fā)的一種土傳性病害,主要危害辣椒的莖、葉和果實,侵染后可造成植株萎蔫、落葉和果實腐爛。一旦發(fā)病,傳播迅速,對辣椒生產(chǎn)構(gòu)成極大威脅,常造成減產(chǎn)20%-30%,甚至造成毀田絕收,嚴重影響辣椒的產(chǎn)量和質(zhì)量。當(dāng)前,生產(chǎn)上主要采用甲霜靈、霜脲氰等內(nèi)吸化學(xué)殺菌劑進行防治,但疫霉菌對使用過的內(nèi)吸殺菌劑極易產(chǎn)生抗藥性,而化學(xué)藥劑防治為主的防治措施還會產(chǎn)生藥劑殘留以及環(huán)境污染等問題。所以,對辣椒疫病進行生物防治是當(dāng)前辣椒生產(chǎn)可持續(xù)發(fā)展的必然選擇。1.本研究從43個海南土壤樣本中分離純化篩選出了73株對辣椒疫霉病菌有拮抗作用的細菌菌株A1~A73,經(jīng)過一系列抑菌試驗發(fā)現(xiàn)菌株A60抑菌活性最高,對辣椒疫霉的抑菌圈半徑高達11.63mm,繼代培養(yǎng)后抑菌效果穩(wěn)定。經(jīng)生理生化特征及16S rDNA序列和系統(tǒng)發(fā)育樹分析結(jié)果,鑒定拮抗菌A60菌株為側(cè)孢短芽孢桿菌(Brevibacillus laterosporus)。2.對拮抗菌A60的抑菌物質(zhì)類型進行了初步研究,結(jié)果表明抑菌物質(zhì)為水溶性,主要存在于發(fā)酵液上清液中,為胞外次級代謝產(chǎn)物。其在發(fā)酵液不同分離部分的抑菌效果:全菌液上清液菌懸液細胞破碎液。不同實施倍數(shù)發(fā)酵液對辣椒疫霉病菌的抑菌效果:10倍稀釋的發(fā)酵液抑菌率可達到78.7%,20倍稀釋液抑制率為62.8%。拮抗菌A60發(fā)酵液中的少量揮發(fā)性物質(zhì)對辣椒疫霉病菌的菌絲生長有一定的抑制作用。A60對辣椒疫霉病菌、番茄早疫病菌、番茄灰霉病菌、辣椒炭疽病菌、梨黑斑病菌等病原菌均有明顯的抑制作用。3.為提高A60發(fā)酵產(chǎn)物對辣椒疫霉病菌的拮抗效果,對其發(fā)酵培養(yǎng)基成分及發(fā)酵工藝進行優(yōu)化:在篩選確定A60的最適碳源、氮源和無機鹽的基礎(chǔ)上,采用正交設(shè)計法優(yōu)化可溶性淀粉、酵母粉和氯化鈉的濃度,研究培養(yǎng)溫度、pH、接種量、裝液量等因素對A60抑菌活性的影響,最終確定了側(cè)孢短芽孢桿菌A60的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件為可溶性淀粉1%、酵母粉2%、氯化鈉0.2%,起始pH為7.0,接種量2%,裝量為100mL/250mL三角瓶,發(fā)酵溫度為37℃。4.辣椒疫霉病在辣椒和甜椒上均有發(fā)生,本試驗使用抑菌效果較好的側(cè)孢短芽孢桿菌A60的無菌發(fā)酵液分別在辣椒和甜椒上進行防效試驗。試驗結(jié)果表明,加入拮抗菌A60無菌發(fā)酵液的辣椒,在第3d時防效可達到100%,第5d防效達95.71%,第7d仍可達到92.22%,說明拮抗菌A60能夠明顯的降低辣椒疫霉病在辣椒上的發(fā)病率和病情指數(shù),并且具有很好的持效性。加入拮抗菌A60無菌發(fā)酵液的甜椒,在第3d時防效達到100%,第5d時為75.26%,第7d仍可達到73.20%,說明拮抗菌A60能夠明顯降低辣椒疫霉病在甜椒上的發(fā)病率,并具有較好的持效性,但在甜椒上的防效效果比在辣椒上的稍差一些,使用時應(yīng)適當(dāng)提高A60使用濃度。
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S436.418
【圖文】：

行抑菌譜的測定，觀察抑菌效果，測定抑菌圈半徑，計算抑菌率。 不同濃度無菌發(fā)酵液對辣椒疫霉病菌的抑制效果將該拮抗菌無菌發(fā)酵液分別稀釋成 10 倍、20 倍、40 倍、80 倍、160 倍，添加并混勻于基中。用打孔器在生長 5d 的辣椒疫霉病菌邊緣打孔，取菌塊接種于 PDA 平板中央，培養(yǎng)，以混入無菌水的平板作對照，待對照平板菌絲長滿平皿時，測量各平皿菌落半徑理 3 個重復(fù)，計算抑制率。確定不同濃度無菌發(fā)酵液對病原菌的抑制效果。 結(jié)果分析 A60 抑菌物質(zhì)的確定經(jīng)過抑菌實驗后發(fā)現(xiàn)全菌液和發(fā)酵液（上清液）的抑菌效果最好，無菌水菌懸液（細胞）有一定的抑菌效果，細胞破碎后上清液（細胞破碎液）的抑菌效果較小。該實驗可以的抑菌物質(zhì)存在于上清液中，為胞外次級代謝產(chǎn)物。其中全菌液抑菌效果略好于上清液抑菌效果好于細胞破碎液，推測是活菌在繼續(xù)分泌抑菌物質(zhì)的原因。具體結(jié)果如圖 3.1

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第三章 側(cè)孢短芽孢桿菌 A60 抑菌機制初步探索3.6.2 拮抗菌 A60 揮發(fā)性物質(zhì)抑菌效果的確定拮抗菌 A60 揮發(fā)性物質(zhì)抑菌結(jié)果如下圖所示：A 為對照平板，B 為處理平板，菌落直徑 為 8.32cm，B 為 7.23cm，抑菌率為 13.1%。由圖中可以看出，雖然從菌落直徑角度看抑菌率不高但是處理平板菌絲生長情況明顯較對照平板稀疏，說明拮抗菌 A60 的揮發(fā)性物質(zhì)對辣椒疫霉病菌的菌絲生長有一定的抑制作用。

圖 3.3 A60 抑菌譜測定Fig3.3 Antimicrobial spectrum of A603.6.4 不同濃度拮抗菌 A60 無菌發(fā)酵液抑菌效果的測定不同濃度拮抗菌 A60 無菌發(fā)酵液抑菌效果如下圖所示，10 倍稀釋液抑制率可達 78.7%，20倍稀釋液抑制率為 62.8%，40 倍以上稀釋液抑制率則不明顯，說明 A60 在 20 倍稀釋時也能表現(xiàn)出良好的抑菌效果。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

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本文編號：2781172