【摘要】：家蠶核型多角體病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)是一種嚴(yán)重危害養(yǎng)蠶業(yè)的病毒病原體,其基因組與苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒(Autographa californica nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)基因組相似性很高,但是只能感染家蠶。目前的研究針對(duì)AcMNPV入侵和出芽釋放方面已經(jīng)取得較大進(jìn)展,但是BmNPV BV粒子進(jìn)入宿主以及其出芽方式的機(jī)制的研究較少。研究表明,病毒入侵宿主細(xì)胞和出芽釋放過程是相對(duì)可逆的過程,囊膜病毒的入侵與病毒表面的囊膜蛋白緊密相關(guān),GP64是組I桿狀病毒的膜融合蛋白,定位于細(xì)胞膜上,病毒粒子在細(xì)胞膜處出芽獲得囊膜結(jié)構(gòu)以及分布于其上的病毒編碼的GP64等蛋白,GP64在病毒入侵過程中介導(dǎo)芽生病毒進(jìn)入細(xì)胞初始感染。我們前期發(fā)現(xiàn)GP64定位在細(xì)胞膜上或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)部都能產(chǎn)生有感染性的BV,其機(jī)理尚不清楚。本文主要對(duì)兩種不同GP64蛋白BV囊膜組分進(jìn)行研究,探索BV形成機(jī)制,為桿狀病毒出芽機(jī)制提供基礎(chǔ),主要研究結(jié)果如下:首先主要對(duì)本實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建與獲得的vGP64與vSPⅡGP64 BV囊膜蛋白進(jìn)行分離與質(zhì)譜鑒定。其中兩種病毒中共同檢測(cè)到病毒蛋白30種,其中具有顯著性差異的有6種,共同檢測(cè)到的宿主蛋白有75種;在vGP64病毒中單獨(dú)檢測(cè)到4種病毒特異性蛋白,11種宿主特異性蛋白;在vSPⅡGP64病毒中單獨(dú)檢測(cè)到1種病毒特異性蛋白,5種宿主特異性蛋白質(zhì),然后對(duì)對(duì)質(zhì)譜鑒定的差異病毒蛋白進(jìn)行western-blot驗(yàn)證分析。其次,構(gòu)建eGFP不同定位的細(xì)胞系,通過兩種病毒感染形成的BV囊膜中eGFP的分布初步推測(cè)BV囊膜來源于內(nèi)膜系統(tǒng)。兩種病毒BV基因組絕對(duì)定量分析。研究發(fā)現(xiàn),相同質(zhì)量的DNA產(chǎn)生的病毒滴度不同,突變體滴度低,說明部分BV可能沒有感染性。最后,通過兩種病毒感染的細(xì)胞的電鏡切片分析,初步確定BmNPV感染BmN細(xì)胞后存在兩種出芽方式。通過上述研究,我們初步揭示了兩種病毒囊膜蛋白組成的差異,并且初步驗(yàn)證了兩種病毒出芽方式存在差異,為進(jìn)一步研究BmNPV出芽方式提供參考。
【學(xué)位授予單位】：江蘇科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S884.51
【圖文】：

圖 1.1 感染鱗翅目昆蟲的初始感染過程圖ure 1.1 Initial infection process of infected lepidopteran in（摘自 Federici et al., 1997）B，microvillar 刷邊框；CC，柱狀細(xì)胞； RC，再生細(xì)TM，氣管基質(zhì)； CMC，圓形肌肉； H，血淋巴ic membrane; BB, micro-fleece brush border; CC, ColuBL, basal layer; TM, tracheal matrix; CMC, round muscle

圖 1.1 感染鱗翅目昆蟲的初始感染過程圖Figure 1.1 Initial infection process of infected lepidopteran insec（摘自 Federici et al., 1997）膜； BB，microvillar 刷邊框；CC，柱狀細(xì)胞； RC，再生細(xì)胞；TM，氣管基質(zhì)； CMC，圓形肌肉； H，血淋巴 peritrophic membrane; BB, micro-fleece brush border; CC, Columnave cells; BL, basal layer; TM, tracheal matrix; CMC, round muscle; H,

芽的驅(qū)動(dòng)力有多種，大多數(shù)病毒的出芽是依賴于宿主細(xì)胞些病毒出芽不依賴于 ESCRT，而依賴于病毒糖蛋白[26]。在它們編碼的糖蛋白插入到細(xì)胞中相應(yīng)的膜結(jié)構(gòu)上。研究病毒、流感病毒糖蛋白，而無其它病毒成分表達(dá)就能夠產(chǎn)生；HIV-1 病毒豆蔻�；� Gag 蛋白與磷脂雙分子層 病毒出芽[27]；甲型流感病毒則依賴于跨膜蛋白 M2 來完成的膜融合蛋白在病毒出芽過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。蛋白對(duì)病毒出芽也有很重要的作用。在對(duì)埃博拉病毒出a2+依賴型的跨膜蛋白 16F 可以使磷酯酰絲氨酸在細(xì)胞膜毒粒子膜上完成出芽過程[19]。如圖 1.3 所示，首先內(nèi)質(zhì)網(wǎng)達(dá)，激活 ER 應(yīng)激反應(yīng)；使得細(xì)胞內(nèi)鈣（Ca2 +）濃度增加后 TMEM16F 介導(dǎo) PtdSer 從質(zhì)膜的內(nèi)葉到外葉的易位； 質(zhì)膜的脂筏區(qū)域內(nèi)出芽，而對(duì) 16F 蛋白進(jìn)行敲低后發(fā)現(xiàn)

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本文編號(hào)：2766328