【摘要】：根結(jié)線蟲(Root knot nematode,RKN)是危害最嚴(yán)重的植物寄生線蟲,其分布廣、寄主多,是威脅農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的重要病原物。目前,化學(xué)殺線劑長期施用,導(dǎo)致作物產(chǎn)生抗藥性、抗性品種抗性喪失以及國家雙減項目的出臺,使越來越多的研究者把目光轉(zhuǎn)向生物防治。本研究以南方根結(jié)線蟲(Meloidogyne incognita)J2為靶標(biāo),對沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)北方線蟲研究所提供的890株真菌菌株發(fā)酵液進行篩選,同時對高效菌株進行鑒定,并進行盆栽和溫室田間試驗驗證;最后,對其代謝產(chǎn)物殺線蟲活性物質(zhì)進行初步探究,主要研究結(jié)果如下:1.真菌菌株發(fā)酵液殺線蟲活性試驗:經(jīng)復(fù)篩后共篩出8株對南方根結(jié)線蟲J2校正死亡率在85%以上的菌株。這8株真菌發(fā)酵液不僅對南方根結(jié)線蟲J2有強毒殺作用,對南方根結(jié)線蟲卵孵化也具強抑制作用。2.高效菌株的鑒定:以形態(tài)學(xué)鑒定為基礎(chǔ),充分結(jié)合rDNA-ITS分子生物學(xué)技術(shù)手段,對8株高效生防真菌進行鑒定。結(jié)果表明:1株真菌屬于曲霉菌,經(jīng)鑒定菌株Snef354為黑曲霉(Aspergillus niger)。4株真菌屬于木霉菌,經(jīng)鑒定菌株Snef622為深綠木霉(Trichoderma atroviridis),菌株Snef1883為哈茨木霉(T.harzianum),菌株Snef1910為桔綠木霉(T.citrinovirid),菌株Snef2382為擬康寧木霉(T.koningiopsis)。3株真菌屬于青霉菌,經(jīng)鑒定菌株Snef1851為普通青霉(Penicillium commune),菌株Snef2367為產(chǎn)黃青霉(P.chrysogenum),Snef2281為殼青霉(P.crustosum)。3.選取篩選鑒定后的高效菌株桔綠木霉Snef1910和產(chǎn)黃青霉Snef2367進行真菌發(fā)酵液促生防病盆栽和溫室田間試驗:結(jié)果表明,桔綠木霉Snef1910和產(chǎn)黃青霉Snef2367發(fā)酵液均可顯著降低根結(jié)指數(shù)和土壤中J2數(shù)量,并且顯著增加株高、根長、根鮮重和根干重,具有明顯的促生效果,但由于田間根結(jié)線蟲發(fā)生嚴(yán)重,使番茄植株根鮮重和根干重顯著低于對照處理。此外,桔綠木霉Snef1910和產(chǎn)黃青霉Snef2367盆栽試驗中對番茄根結(jié)線蟲的減退率分別高達61.02%和56.67%,溫室田間試驗30 d的防效分別高達71.43%和64.29%。本研究表明桔綠木霉Snef1910和產(chǎn)黃青霉Snef2367菌株發(fā)酵液具有很好的促生和防病效果,為植物線蟲病的生物防治提供了新的生防資源。4.桔綠木霉Snef1910真菌代謝產(chǎn)物活性物質(zhì)初步研究:桔綠木霉Snef1910殺線蟲活性物質(zhì)不在菌株菌絲體中,而存在于菌株的發(fā)酵液里。膠霉毒素毒殺線蟲活性好,且效果穩(wěn)定。對菌株的代謝產(chǎn)物進行預(yù)處理,經(jīng)高效液相分析得:桔綠木霉Snef1910代謝產(chǎn)物中沒有膠霉毒素化合物,或膠霉毒素化合物含量較少,不足以在色譜圖中體現(xiàn)。
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S476.1
【圖文】：

圖 3-1 黑曲霉（Aspergillus niger）Snef354 菌落形態(tài)（C-E）和顯微照片（A 和 B）Figure 3-1 Colonial morphology (C-E) and microscopic photograph (A and B) of Aspergillus niger3.3.1.2 菌株 Snef622 鑒定結(jié)果高效菌株 Snef622 在 PDA 培養(yǎng)基上生長迅速，72 h 幾乎長滿 90 mm 的培養(yǎng)皿，菌落邊緣均勻，初為白色，之后逐漸被綠色的產(chǎn)孢區(qū)所覆蓋，菌落背面無色；同心環(huán)紋，且中央有一致密的圓盤狀結(jié)構(gòu)，分生孢子在此區(qū)域大量產(chǎn)生；產(chǎn)生椰子氣味和甜味（圖3-2C-E）。分生孢子綠色，亞球形至卵圓形，沒有明顯的脫落痕跡，且分生孢子壁表面光滑。分生孢子梗常見分枝方式為對生，但其典型分枝方式為單側(cè)分枝，且分枝角度近似于 90°。瓶梗呈直或彎曲狀，有時也呈鉤狀；常為 2~4 個輪狀排列，單生；漩渦狀排列中的最頂端瓶梗以及單生瓶梗常為圓柱形，只在尖端下部溢縮，形成頸樣形狀；尖端下部著生的瓶梗為燒瓶形；沒有間生瓶梗（圖 3-2A，B）。菌株 Snef622 形態(tài)特征與韓樹英等（2013）鑒定的深綠木霉（Trichderma atroviridis）完全一致。初步鑒定菌株 Snef622為深綠木霉。

菌落背面無色；同心環(huán)紋，且中央有一致密的圓盤狀結(jié)構(gòu)，分生孢子在此區(qū)域大量產(chǎn)生；產(chǎn)生椰子氣味和甜味（圖3-2C-E）。分生孢子綠色，亞球形至卵圓形，沒有明顯的脫落痕跡，且分生孢子壁表面光滑。分生孢子梗常見分枝方式為對生，但其典型分枝方式為單側(cè)分枝，且分枝角度近似于 90°。瓶梗呈直或彎曲狀，有時也呈鉤狀；常為 2~4 個輪狀排列，單生；漩渦狀排列中的最頂端瓶梗以及單生瓶梗常為圓柱形，只在尖端下部溢縮，形成頸樣形狀；尖端下部著生的瓶梗為燒瓶形；沒有間生瓶梗（圖 3-2A，B）。菌株 Snef622 形態(tài)特征與韓樹英等（2013）鑒定的深綠木霉（Trichderma atroviridis）完全一致。初步鑒定菌株 Snef622為深綠木霉。

第三章 殺線蟲生防真菌的鑒定形或者壇形，基部溢縮顯著，中部明顯膨大，且逐漸向頂端變細(xì)，直或彎曲（圖 3-4A，B）。菌株 Snef1883 形態(tài)特征與章初龍和徐同（2003）鑒定的哈茨木霉（T. harzianum）完全一致。初步鑒定菌株 Snef1883 為半知菌亞門，絲孢綱，絲孢目，叢梗孢科，哈茨木霉。

【參考文獻】

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本文編號：2759277