【摘要】：麝鼠(Ondatra zibethicus Linnaeus)又稱為青根貂,是田鼠亞科麝鼠屬中唯一物種。雄性麝鼠有一對(duì)泌香腺,繁殖時(shí)可分泌具有明顯芳香氣味的乳白色麝鼠香。麝鼠香的主要藥用成分為麝香酮,與天然麝香相近,所以具有成為天然麝香替代品的巨大潛力。麝鼠相較于其它鼠類,前列腺組織非常發(fā)達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)腹腔注射麝鼠香可使小鼠的前列腺組織增大,所以麝鼠香除了具有外激素的作用還可能具有調(diào)節(jié)麝鼠自身發(fā)育的作用。本研究中通過RNA-seq測(cè)序技術(shù),對(duì)麝鼠泌香期和非泌香期的前列腺組織進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,并通過生物信息學(xué)從整體水平上對(duì)麝鼠前列腺的發(fā)育進(jìn)行了研究。同時(shí),本研究中建立了麝鼠前列腺成纖維樣細(xì)胞的原代培養(yǎng)方法,構(gòu)建了麝鼠前列腺成纖維樣細(xì)胞的細(xì)胞模型,證明了該細(xì)胞體外培養(yǎng)的可行性。結(jié)合RNA-seq測(cè)序結(jié)果和原代培養(yǎng)的細(xì)胞模型,對(duì)原代細(xì)胞進(jìn)行了麝鼠香干預(yù)試驗(yàn),將傳代至第3代的原代培養(yǎng)麝鼠前列腺成纖維樣細(xì)胞分為2組,10μg/ml麝鼠香組記為A1組,0.1%DMSO對(duì)照組記為B1組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,A1組的Bcl-2轉(zhuǎn)錄水平高于B1組約4倍,Bax基因轉(zhuǎn)錄水平較B1組低。麝鼠香可以提高細(xì)胞Bcl2基因的轉(zhuǎn)錄水平,降低Bax基因的轉(zhuǎn)錄水平,提高Bcl2/Bax的比值,起到抗細(xì)胞凋亡的作用。為初步研究麝鼠香調(diào)節(jié)Bc12/Bax比值的作用機(jī)制,本實(shí)驗(yàn)使用HEK293T細(xì)胞,并利用麝鼠香的主要成分麝香酮進(jìn)行干預(yù),將復(fù)蘇后傳代至第3代的HEK293T細(xì)胞分為5組,3μg/ml麝香酮組記為A2組,5μg/ml麝香酮組記為B2組,7μg/ml麝香酮組記為C2組,9μg/ml麝香酮組記為D2組,0.1%DMSO對(duì)照組記為E2組。每組設(shè)置3個(gè)生物學(xué)重復(fù)。相較于E2組,A2、B2、C2和D2組NF-κB基因的轉(zhuǎn)錄水平分別為E2組的1.39倍、1.53倍、1.72倍和1.78倍;PI3K基因的轉(zhuǎn)錄水平分別為E2組的1.41倍、1.58倍、1.71倍和1.79倍;ERK基因的轉(zhuǎn)錄水平分別為E2組的1.27倍、1.39倍、1.53倍和1.77倍;MEK基因的轉(zhuǎn)錄水平分別為E2組的1.2倍、1.29倍、1.32倍和1.38倍;p53基因的轉(zhuǎn)錄水平分別為E2組的1.08倍、1.11倍、0.99倍和1.1倍。結(jié)果發(fā)現(xiàn):麝香酮會(huì)提升NF-κB、PI3K、MEK和ERK基因的轉(zhuǎn)錄水平,且具有明顯的量效關(guān)系。對(duì)于p53基因的影響并無明顯規(guī)律。因此推測(cè),麝香酮調(diào)節(jié)細(xì)胞Bcl-2、Bax基因轉(zhuǎn)錄水平比值的改變可能是通過調(diào)節(jié)上述信號(hào)通路來完成的。通過RNA-seq測(cè)序部分和藥物干預(yù)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行推測(cè),麝鼠香對(duì)于麝鼠本身不只可以起到外激素的作用,還可以調(diào)節(jié)自身的生長發(fā)育情況,如可以促進(jìn)麝鼠前列腺的發(fā)育。麝鼠香中的麝香酮等親脂性氣味分子隨血液循環(huán)到達(dá)前列腺組織,c75134_g2轉(zhuǎn)錄本所編碼的蛋白在這一過程中起到親脂性氣味分子載體的作用,并幫助其與受體結(jié)合,通過調(diào)節(jié)Bcl-2家族基因的轉(zhuǎn)錄水平,起到抗細(xì)胞凋亡的作用,調(diào)節(jié)前列腺組織的發(fā)育過程。
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S865.27
【圖文】：

逡逑現(xiàn)泌香期時(shí)麝鼠前列腺組織中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制條目出現(xiàn)顯著富集，見圖３－２。對(duì)基因做逡逑ＫＯ注釋后，可根據(jù)它們參與的ＫＥＧＧ代謝通路進(jìn)行分類，結(jié)果見圖３－３。逡逑Ｇｅｎｅ邋ＦｕｎｃＵｃｍ邐（ＧＯ｝逡逑Ｂｋ＾ａｇｉｃａ＇－邐Ｃ？？ｕ！ａ；邋Ｃｏｉ＾ｉｐｘｔｅｒｅ邐ＭｃＳｅｃｉｉｔｅｆ邋ＦａｎｃＳＯｎ逡逑圖３－１基因功能分類（ＧＯ）逡逑Ｆｉｇ邋３－１邋Ｇｅｎｅ邋ｆｕｎｃｔｉｏｎ邋Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋（ＧＯ）逡逑Ｋ0Ｇ邋ＦｉＨＫＳｔｏｎ邋ＣＳａｓｓｉｆｓｃｓｔｉｏｎ逡逑｜邋Ｋ0Ｑ邋５ｆｅａｃ／ｓ？？？逡逑}牐澹掊澹蓿蓿椋粒螅螅螅椋椋螅幔觶浚幔悖蓿幔悖媯濉輳幔輳�？逦＾邋ＫＣｉＳ邋＊ｃ？ｉ�。義希е危唬粒簦潁澹椋螅輳蓿錚海哄危睿蓿�？ａｉｉ洋ｔａ辶x希掊�？ＧG櫻輳櫻ΓВ遙跡�？．ｃＫＷ}椋悖浚簦媯潁潁媯簦常停櫻椋輳常�？＊}唬掊危爸鄭∧閭蓕0邐輯．

邐東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文邐逡逑現(xiàn)泌香期時(shí)麝鼠前列腺組織中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制條目出現(xiàn)顯著富集，見圖３－２。對(duì)基因做逡逑ＫＯ注釋后，可根據(jù)它們參與的ＫＥＧＧ代謝通路進(jìn)行分類，結(jié)果見圖３－３。逡逑Ｇｅｎｅ邋ＦｕｎｃＵｃｍ邐（ＧＯ｝逡逑Ｂｋ＾ａｇｉｃａ＇－邐Ｃ？？ｕ�。幔诲澹茫铮椋蓿椋穑簦澹颍暹姡停悖樱澹悖椋椋簦澹驽澹疲幔睿悖樱希铄义蠄D３－１基因功能分類（ＧＯ）逡逑Ｆｉｇ邋３－１邋Ｇｅｎｅ邋ｆｕｎｃｔｉｏｎ邋Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋（ＧＯ）逡逑Ｋ0Ｇ邋ＦｉＨＫＳｔｏｎ邋ＣＳａｓｓｉｆｓｃｓｔｉｏｎ逡逑

圖３－５差異基因類聚圖邐圖３－６差異表達(dá)基因的火山圖逡逑Ｆｉｇ邋３－５邋Ｔｈｅ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ邋ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ邐Ｆｉｇ邋３－６邋Ｖｏｌｃａｎｏ邋ｍａｐ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ逡逑ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ邋ｍａｐ邐ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ邋ｇｅｎｅｓ逡逑顯著差異表達(dá)基因的注釋逡逑用ＧＯｓｅｑ軟件對(duì)顯著差異表達(dá)基因做ＧＯ富集性分析，基于ＫＥＧＧ數(shù)據(jù)庫進(jìn)行逡逑異表達(dá)基因Ｐａｔｈｗａｙ顯著性富集分析，分析差異基因參與的生化代謝途徑和信號(hào)逡逑路。繪制顯著差異表達(dá)基因ＫＥＧＧ富集散點(diǎn)圖從整體水平上揭示泌香期和非泌逡逑達(dá)水平存在顯著差異的基因所參與的主要代謝途徑和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。逡逑Ｕｎｉｇｅｎｅｓ進(jìn)行ＧＯ富集性分析表明共有２０２８７條轉(zhuǎn)錄本得到了歸類注釋，對(duì)顯著逡逑－２４－逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2757710