【摘要】：由立枯絲核菌(Rhizoctonia solani Kihn)引起的紋枯病是水稻“三大病害”之一,該病可導(dǎo)致水稻不能抽穗或產(chǎn)生較多秕谷,嚴(yán)重影響水稻的產(chǎn)量和品質(zhì)。水稻紋枯病菌群體遺傳結(jié)構(gòu)的改變及其對(duì)殺菌劑敏感性的變化影響著病害的整體發(fā)生及田間對(duì)該病的控制效果。為解析水稻紋枯病菌的群體遺傳結(jié)構(gòu),明確其對(duì)生產(chǎn)常用藥劑的抗藥性現(xiàn)狀,為生產(chǎn)上防控該病提供理論依據(jù),本論文采用10對(duì)SSR標(biāo)記引物分析了來(lái)自江蘇省13市和全國(guó)5大地理區(qū)域(華中、華南、華北、華東、西南)的293株水稻紋枯病菌的遺傳結(jié)構(gòu),并測(cè)定了這些菌株對(duì)噻呋酰胺、戊唑醇、丙環(huán)唑和井岡霉素的抗性,主要研究成果如下:1、從全國(guó)和江蘇省水稻紋枯病病樣中共分離得到菌株293株,其中江蘇省265株,其它省份 28 株。利用 10 對(duì) SSR 引物(TC01、TC02、TC03、TC05、TC06、TC07、TC10、TC11、TC12和TC13)分析水稻紋枯病菌群體的遺傳多樣性,結(jié)果表明,10對(duì)引物共擴(kuò)增出74條特異性SSR條帶(TC02擴(kuò)增產(chǎn)物未檢測(cè)到多態(tài)性條帶),平均每對(duì)引物可擴(kuò)增出8.2條條帶。江蘇蘇中地區(qū)的水稻紋枯病菌種群遺傳多樣性最為豐富,Nei基因多樣性指數(shù)和Shannon多樣性指數(shù)最高,分別為0.1932和0.2928。在供試的293株菌株中共檢測(cè)出78種基因型,其中江蘇省以蘇中地區(qū)菌株種群檢測(cè)到的基因型最多,有26種,DA是蘇中地區(qū)水稻紋枯病菌群體的優(yōu)勢(shì)基因型;全國(guó)菌株中,以華東地區(qū)檢測(cè)到的基因型最多,為23種,西南地區(qū)最少,僅為9種。江蘇省13個(gè)市的菌株群體在遺傳上存在明顯差異,通過(guò)UPGMA方法可將供試菌株分為3類,但其遺傳多樣性與地理上蘇北、蘇中、蘇南的劃分無(wú)一致性。全國(guó)9個(gè)省菌株群體通過(guò)UPGMA方法可分為5類,除山東、江蘇、浙江三個(gè)華東地區(qū)的省份菌株完全聚于一類外,其它幾個(gè)省份雖然地理上相近,但菌株的遺傳多樣性卻差異極大,特別是湖南、湖北,雖然同屬華中,但兩省菌株在遺傳上距離卻較遠(yuǎn)。這一結(jié)果同樣說(shuō)明,菌株的遺傳多樣性與其地理位置并無(wú)相關(guān)性。2、利用十字交叉法測(cè)定選自江蘇省的39個(gè)水稻紋枯病菌菌株對(duì)噻呋酰胺、戊唑醇、丙環(huán)唑和井岡霉素的抗藥性。結(jié)果表明,不同菌株對(duì)噻呋酰胺、戊唑醇、丙環(huán)唑的敏感性存在較大差異,對(duì)幾種藥劑的敏感性(以EC50計(jì))分別相差3.83、16.16和7.46倍。根據(jù)所測(cè)菌株EC50值確定水稻紋枯病菌對(duì)噻呋酰胺、戊唑醇和丙環(huán)唑的敏感基線分別為0.1566μg/mL、1.3393μg/mL和0.9331μg/mL。以敏感基線的5倍值為低抗標(biāo)準(zhǔn),確定水稻紋枯病菌對(duì)噻呋酰胺、戊唑醇和丙環(huán)唑抗性頻率的鑒定劑量,測(cè)定結(jié)果表明,絕大多數(shù)菌株對(duì)噻呋酰胺、戊唑醇和丙環(huán)唑都已產(chǎn)生了抗藥性,有些地區(qū)菌株的抗藥性頻率甚至達(dá)到了 100%。揚(yáng)州地區(qū)水稻紋枯病菌對(duì)噻呋酰胺的抗性頻率最低,為29.17%;南京、淮安、連云港、宿遷、徐州、南通和泰州7個(gè)地區(qū)的菌株對(duì)噻呋酰胺的抗性頻率均達(dá)到了 100%。所有地區(qū)的菌株對(duì)戊唑醇的抗性頻率都大于50%,南京、鹽城、淮安、連云港、宿遷、鎮(zhèn)江、南通和泰州這8個(gè)地區(qū)的抗性頻率也達(dá)到了 100%。所有地區(qū)的菌株對(duì)丙環(huán)唑的抗性頻率最低的都達(dá)到了 62.5%,連云港、鎮(zhèn)江和泰州這三個(gè)地區(qū)的菌株對(duì)丙環(huán)唑的抗性頻率都達(dá)到了 100%。這說(shuō)明,近年來(lái)隨著這三種殺菌劑在江蘇省的大量、廣泛使用,使得大范圍的水稻紋枯病菌已經(jīng)對(duì)其產(chǎn)生了抗藥性。3、為明確水稻紋枯病菌SSR標(biāo)記遺傳多樣性、生長(zhǎng)速率和抗藥性之間的相互關(guān)系,對(duì)使用SSR引物擴(kuò)增的菌株帶型、菌株生長(zhǎng)速率,以及菌株對(duì)戊唑醇的敏感性分別進(jìn)行聚類分析,結(jié)果表明SSR標(biāo)記與菌株生長(zhǎng)速率和對(duì)戊唑醇的敏感性沒(méi)有相關(guān)性,菌株的生長(zhǎng)速率與病菌抗藥性之間也沒(méi)有明顯相關(guān)性。本論文利用SSR標(biāo)記技術(shù)分析了來(lái)自江蘇省和全國(guó)的水稻紋枯病菌的遺傳多樣性,闡明了江蘇省水稻紋枯病菌對(duì)幾種常用藥劑的抗藥性現(xiàn)狀,明確了菌株遺傳多樣性與菌株生長(zhǎng)速率及病菌對(duì)戊唑醇抗藥性之間的關(guān)系。這些結(jié)果為生產(chǎn)上進(jìn)行水稻紋枯病科學(xué)防治提供了理論依據(jù)。
【圖文】：

采用真菌基因組ＤＮＡ提取試劑盒提取來(lái)自江蘇�。保呈泻腿珖�(guó)其它８?jìng)�(gè)省份的２９３株逡逑水稻紋枯病菌基因組ＤＮＡ，所有提取獲得的ＤＮＡ的ＯＤ２６0／ＯＤ２８0值均在１．７？１．９之間，逡逑在瓊脂糖凝膠電泳顯示其為明亮的單一條帶，說(shuō)明所提ＤＮＡ較純，，可用于后續(xù)研究（圖２）。逡逑

對(duì)結(jié)果表明，所有菌株的ＩＴＳ區(qū)序列和數(shù)據(jù)庫(kù)中水稻紋枯病菌的對(duì)應(yīng)序列相似度在９７％？逡逑１００％之間，覆蓋率均在９５％以上。因此，可以確定獲得的２９３株菌株均為水稻紋枯病菌（圖逡逑３、
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S435.111.42

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2680393