【摘要】：生物防治是世界公認(rèn)的植物病害綠色防治方法,木霉(Trichoderma spp.)是生防制劑中的高效生防真菌,且市場應(yīng)用劑型占有率最高,棘孢木霉(Trichoderma asperellum,Tas)更是木霉菌中優(yōu)勢菌株。尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum,Fox)屬頑固的土傳病害,難防治,難根除,病菌危害植物根部,引起維管束病害,導(dǎo)致植株枯死,且在植株的整個生長期,均可發(fā)生。因此,棘孢木霉提高植物抵抗病原菌的機理研究,即生防菌、植物、病原真菌間的作用機理,對后續(xù)木霉生防制劑的高效使用具有重要意義。分離鑒定出1株棘孢木霉菌株,其菌落形態(tài)與棘孢木霉菌形態(tài)相同,其分生孢子梗瓶梗為散開狀排列,基本每組有3個瓶梗,瓶梗也聚集成致密的頭狀結(jié)構(gòu),接近掃帚狀;ITS和TEF分別比對,序列比對結(jié)果相同,均與棘孢木霉相匹配。通過對峙試驗發(fā)現(xiàn),棘孢木霉生長速度比尖孢鐮刀菌更快,且木霉菌直徑是病原菌直徑的2倍,差異顯著;木霉對尖孢鐮刀菌抑制率為66.7%,競爭抑制作用明顯,導(dǎo)致病原菌無法正常生長,且木霉重寄生于尖孢鐮刀菌菌絲中,病原菌菌落逐漸變?yōu)楹稚�。�?jīng)尖孢鐮刀菌的致病性試驗,確定了病原菌最佳處理濃度為5mL/株;毒素平板擬南芥幼苗生長指標(biāo),隨著毒素濃度的升高而降低,差異顯著;木霉+尖孢鐮刀菌(Tas+Fox)組和木霉(Tas)組的擬南芥的防御酶及可溶性蛋白均比尖孢鐮刀菌(Fox)組高;MDA和脯氨酸含量的檢測中,Tas+Fox組與Fox組相比,提高了 PR1的表達(dá)量分別為0.16倍和-1.67倍,差異極顯著,15d時,Tas+Fox組與Fox組相比,與7d趨勢相似,但總體呈現(xiàn)上調(diào)趨勢,Tas+Fox組為3.29倍,差異顯著,P0.01。木霉對擬南芥抗病性研究,證明了木霉提高了擬南芥的抗病性。木霉的促生功能研究中,生長指標(biāo)最高值是60%的擬南芥植株,鮮重為0.0018g、根長為2.71cm,地上部分鮮重最高值為40%的擬南芥植株,0.0453g;60%的POD酶活性為23.75U/mg prot值最高;MDA含量隨著木霉處理濃度的增加而降低,為0.228μmol/g;脯氨酸含量最高為100%,含量為23.125,差異極顯著;60%細(xì)胞膜透性最低;活性氧檢測6組均未著色。以上結(jié)果證明,60%的菌肥濃度為最適促生濃度。木霉分泌物敏感試驗中擬南芥幼苗的生長指標(biāo)均被提高,棘孢木霉菌具有促生,提高植物抗逆性的作用,其分泌的小分子化合物和蛋白類物質(zhì)同樣可以促進(jìn)擬南芥生長及發(fā)育。本試驗證明了木霉可以有效的提高擬南芥抗病性,通過提高擬南芥植株生理生化指標(biāo),以及擬南芥防衛(wèi)基因的表達(dá)水平顯著升高,從而提高了擬南芥的抗病性。以期通過木霉菌株的分離找出強勢生防菌株,重新施肥于野蘋果基地,既能提高野蘋果樹抗病能力,又能達(dá)到促進(jìn)野蘋果植株生長發(fā)育,進(jìn)而保護(hù)新疆野蘋果健康生境的目的。
【圖文】：

木霉與病原菌互作時，木霉菌感知病原真菌分泌的激發(fā)子（肽類及小分子化合物）逡逑的誘導(dǎo)，將抗病信號傳遞給�。堑鞍�，后通過ＭＡＰＫ進(jìn)一步傳遞給轉(zhuǎn)錄因子，最終轉(zhuǎn)錄逡逑因子調(diào)控下游防御基因的表達(dá)（圖１－１），激發(fā)木霉對病原真菌的防御反應(yīng)［５６］。逡逑－３邋－逡逑

２．４結(jié)果分析逡逑從孟加拉紅平板中分離得到的木霉菌種斜面培養(yǎng)基，可見試管中無雜菌污染，且木逡逑霉分布均勾，長勢良好，菌種健壯（圖２－１）。逡逑圖２－１斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)木霉菌逡逑２．４．１木霉菌的夏ＴＳ和ｔｅｆ分子鑒定逡逑土壤樣品分離培養(yǎng)的木霉的ＤＮＡ的電泳檢測結(jié)果，可見圖中ＤＮＡ樣品的條帶清逡逑晰，雜蛋白殘留量少，，沒有拖尾情況出現(xiàn)，說明ＤＮＡ提取成功（圖２－２Ａ）。逡逑經(jīng)過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ＰＣＲ）的ＩＴＳ序列的電泳檢測結(jié)果，可見圖中檢驗樣品的條逡逑帶清晰，雜蛋白殘留量少，無拖尾現(xiàn)象，說明ＩＴＳ序列復(fù)制成功，濃度滿足鑒定要求逡逑（圖邋２－２Ｂ）。逡逑一逡逑注：（Ａ）為ＤＮＡ提��；圖（Ｂ）為丨ＴＳ引物ＰＣＲ逡逑圖２－２邋ＤＮＡ提取凝膠電泳圖逡逑１號菌株ＩＴＳ序列：逡逑ＣＣＣＴＧＧＧＴＣＧＧＴＴＣＡＣＴＡＣＡＡＣＣＣ
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S476

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2674279