【摘要】：氯霉素是一種廣泛使用的抑菌性光譜抗生素,普遍添加于動(dòng)物飼料和藥物中,近年來氯霉素濫用現(xiàn)象愈加普遍,它對(duì)人體的一些副作用也凸顯出來,所以氯霉素的追蹤與檢測(cè)變得非常重要,尤其是簡(jiǎn)單、快速、成本低的實(shí)時(shí)檢測(cè)方法具有更加廣泛的研究前景,目前也急需開發(fā)特異性強(qiáng)、靈敏度高的新型檢測(cè)方法用于氯霉素殘留的初步快速篩查。側(cè)流免疫試紙條(LFAS)是基于色譜的一種生物傳感器,近年來,試紙條生物傳感器由于其可移動(dòng)性、快速性,成本低和易于操作而引起了研究者廣泛的興趣。目前也逐漸開發(fā)了一系列基于抗體的試紙條傳感器用于氯霉素的定性或者定量分析。但因?yàn)榭贵w是在體內(nèi)合成,非免疫原性和毒性的靶標(biāo)無法產(chǎn)生相應(yīng)的抗體,所以抗體并不是普遍適用的。近年來,一種新的識(shí)別分子—適配體被廣泛用于生物識(shí)別。作為一種較短的單鏈DNA或RNA(通常為DNA),這些高度特異性的分子會(huì)與靶標(biāo)分析物形成特殊的三維構(gòu)象。在此,基于競(jìng)爭(zhēng)性測(cè)定開發(fā)了一種新的敏感和特異性試紙條傳感器,使可視化的納米金顆粒的著色劑來檢測(cè)氯霉素。通過肉眼肉眼檢查紅色條帶并通過帶狀讀數(shù)儀進(jìn)行掃描以實(shí)現(xiàn)精確的定量檢測(cè)。文章還對(duì)金納米粒子的粒徑大小,適配體的數(shù)量,鏈霉親和素的種類和pH,讀取時(shí)間和封閉方式、硝化纖維膜的種類等進(jìn)行了優(yōu)化。同時(shí)進(jìn)行氯霉素和金標(biāo)適配體的預(yù)孵育過程以進(jìn)一步提高靈敏度,得出最終的傳感器檢測(cè)限(LOD)為0.5 ppm,讀數(shù)儀的檢測(cè)限LOD分別為63.4ppb。此外,開發(fā)出的試紙條傳感器對(duì)于檢測(cè)氯霉素具有高靈敏度,并且對(duì)氯霉素和氯霉素的類似物(氟苯尼考和甲砜霉素)具有高度特異性。最后,文章還對(duì)實(shí)際樣品市政用水進(jìn)行兩氯霉素的檢測(cè),測(cè)得的加標(biāo)回收率為85.7%-110.68%,說明樣品的基質(zhì)影響較小,該試紙條的傳感器抗干擾能力強(qiáng),準(zhǔn)確性高,可對(duì)氯霉素特異性識(shí)別。此基于納米金的適配子傳感器檢測(cè)氯霉素時(shí)不需要任何復(fù)雜的設(shè)備,另外,對(duì)于其他小分子微污染物檢測(cè),可以進(jìn)一步參考使用次核酸適配體對(duì)用于生物傳感器開發(fā)的設(shè)計(jì)。
【圖文】：

圖１－２試紙條傳感器的使用步驟逡逑Ｆｉｇｕｒｅｌ－２邋Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ邋ａｎｄ邋ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ邋ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｐｌａｔｆｏｒｍ邋ｆｏｒ邋ｔｈｅ邋ＬＦＡ邋ｓｙｓｔｅｍｓ逡逑如圖１－２所示，試紙條由幾個(gè)部分組成：樣品墊，結(jié)合墊，硝化纖維素膜，吸收逡逑墊和支撐墊。逡逑樣品墊：它是條帶中的第一個(gè)墊。其功能是將樣品傳送到測(cè)試條的下一組件。它逡逑由纖維素或玻璃纖維制成，并且將液體樣品施加在該墊上以開始測(cè)定。樣品墊有時(shí)被逡逑設(shè)計(jì)成在運(yùn)輸之前預(yù)處理樣品。該預(yù)處理可以包括樣品組分的分離，干擾的除去，ＰＨ逡逑的調(diào)節(jié)等UO。因此，樣品墊在使用前應(yīng)預(yù)處理，，其通常在緩沖液（ｐＨ邋８．０）中浸泡，逡逑緩沖液含有邋０．２５％邋Ｔｒｉｔｏｎ邋Ｘ－１００，邋０．０５Ｍ邋Ｔｒｉｓ－ＨＣＬ邋和邋０．１５Ｍ邋ＮａＣｌ［２３］。用于檢測(cè)邋ＡＴＰ邋的逡逑另一基于適體的條生物傳感器，其樣品墊用ＴＢＳ緩沖液（２０邋ｎｍＭ邋Ｔｒｉｓ－ＨＣＬ，邋１４０邋ｍＭ逡逑ＮａＣｌ，邋５邋ｍＭ邋ＫＣ１，１邋Ｍｍ邋ＣａＣｈ，邋１邋ｍＭ邋ＭｇＣｈ，邋ｐＨ邋７．２）飽和［２４］。最新研宄表明，樣品墊逡逑先用含１邋％0ＶＡ的ＰＢＳ飽和溶液浸泡并在３７邋°Ｃ下干燥后，至于陰涼通風(fēng)條件下保存逡逑［２５］。逡逑結(jié)合墊：它是條帶中的第二個(gè)墊。結(jié)合墊是加載生物識(shí)別分子的墊。在移動(dòng)液體逡逑樣品時(shí)

Ｆｉｇｕｒｅ邋２－３邋Ｔｈｅ邋ＴＥＭ邋ｐｉｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋１２邋ｍｉｎ邋（Ａ），邋１３邋ｍｉｎ邋（Ｂ），邋１４邋ｍｉｎ邋（Ｃ）邋ａｎｄ邋１５邋ｍｉｎ邋（Ｄ）邋ｒｅａｃｔｉｏｎ邋ｔｉｍｅ邋ｏｆ逡逑ＡｕＮｐｓ逡逑從圖２－３可以看出，當(dāng)反應(yīng)時(shí)間為１２邋ｍｉｎ，１３邋ｍｉｎ，１４邋ｍｉｎ時(shí)，電鏡圖下觀察到的納逡逑米金顆粒大小不一，在視野內(nèi)的分布不均勻，顆粒形狀不成均勻的圓形，甚至有橢圓逡逑形和方形的顆粒，且顆粒之間也有重疊分布；而當(dāng)反應(yīng)時(shí)間達(dá)到１５邋ｍｉｎ時(shí)，電鏡圖下逡逑觀察到的納米金顆粒大小均一，呈飽滿的圓形，在視野內(nèi)的分布均勻，顆粒與顆粒之逡逑間無重疊。因此，可以判定當(dāng)反應(yīng)時(shí)間為１５邋ｍｉｎ時(shí)，制備得到的納米金溶液質(zhì)量較好。逡逑根據(jù)以上紫外光譜圖與ＴＥＭ電鏡圖，分析可知，當(dāng)反應(yīng)時(shí)間小于１５邋ｍｉｎ時(shí)，檸檬逡逑酸三鈉不足以將溶液中的金離子完全還原出來，即該還原反應(yīng)沒有徹底結(jié)束，溶液中逡逑的納米金顆粒較少，因此使得吸光度不高，且納米金顆粒分布不均勻。所以可判定１５逡逑ｍｉｎ為加入朽１檬酸三鈉之后的最佳反應(yīng)時(shí)間。逡逑將反應(yīng)轉(zhuǎn)速保持３００邋ｒ／ｍｉｎ不變和轉(zhuǎn)速為３５０邋ｒ／ｍｉｎ
【學(xué)位授予單位】：北京化工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：TQ450.263;TP212.3

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 高林;;氯霉素的不良反應(yīng)及其殘留檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年04期

2 吳曉豐,楊鷺花;氯霉素殘留的危害及其檢測(cè)方法[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2004年03期

本文編號(hào)：2635118