【摘要】：真菌毒素一直制約著全球農(nóng)作物的發(fā)展,對(duì)人體危害極大,開(kāi)發(fā)一種快速、靈敏、高效、節(jié)省成本的檢測(cè)方法顯得尤為重要。表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)和光子晶體相結(jié)合,可以發(fā)揮表面增強(qiáng)拉曼光譜靈敏度高、前處理簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性強(qiáng)的特點(diǎn),將其用于真菌毒素的檢測(cè),可以實(shí)現(xiàn)檢測(cè)高靈敏度、高準(zhǔn)確性。本文制備出大小均一的光子晶體微球和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的拉曼標(biāo)簽,采用免疫競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng),優(yōu)化AFB1-Ab、AFB1-BSA濃度,建立AFB1的檢測(cè)方法。最終確定AFB1-Ab的濃度為60 μg/mL、AFBi-BSA的濃度為20 μg/mL,AFB1線性檢測(cè)范圍為10-3-]0 ng/mL,線性方程為 y=-7816.00746logx+198.80679,R2=0.998,檢測(cè)限為 7.779 pg/mL,采用AFG1毒素,對(duì)AFB1進(jìn)行特異性分析,結(jié)果表明兩者沒(méi)有交叉反應(yīng),此方法有良好的特異性。在谷物樣品的加標(biāo)回收率中,本方法對(duì)比ELISA方法,結(jié)果表明兩者回收率基本一致,說(shuō)明本文所建立的方法可以用來(lái)檢測(cè)谷物中的真菌毒素。將本法應(yīng)用到OTA、ZEN的檢測(cè)中,對(duì)OTA和ZEN的抗原抗體濃度進(jìn)行優(yōu)化。最終確定 OTA-BSA、OTA-Ab、ZEN-BSA、ZEN-Ab 濃度分別為 80 μg/mL,40 μg/mL,40μg/mL,40 μg/mL,并根據(jù)優(yōu)化條件分別繪制了兩種真菌毒素的標(biāo)準(zhǔn)曲線:OTA線性檢測(cè)范圍為0.01-1 ng/mL,線性方程為y=-]0112.58051ogx+39217.39061,R2=0.998,檢測(cè)限為 18 pg/mL,ZEN 線性檢測(cè)范圍為 0.01-10 ng/mL,線性方程為y=-10198.116logx+19882.29574,R2=0.999,檢測(cè)限為0.503 pg/mL。最后建立了同時(shí)檢測(cè)多元真菌毒素的方法。結(jié)果表明AFB1線性范圍在10-3-0.1 ng/mL 之間,線性方程為 y=-18210.558361ogx+13100.95808,R2=0.987,檢測(cè)限為34.755 pg/mL;OTA線性檢測(cè)范圍在0.01-10 ng/mL之間,線性方程為y=-10455.753781ogx+23448.94951,R2=0.995,檢測(cè)限為47.089 pg/mL;ZEN線性檢測(cè)范圍在 10-3-0.1 ng/mL 之間,線性方程為 y=-5285.633561ogx+31937.25143,R2=0.991,檢測(cè)限為0.042 pg/mL。對(duì)該檢測(cè)體系進(jìn)行特異性分析,結(jié)果表明特異性良好。之后分別用本法和ELISA測(cè)定三種混合毒素在實(shí)際樣品的回收率,結(jié)果表明兩種方法測(cè)得的回收率結(jié)果基本一致,表明本文所建立的多元真菌毒素檢測(cè)的可行的。
【圖文】：

不依賴于探針?lè)肿拥男再|(zhì)Ｎ１。其中表面等離子體共振模型是最受認(rèn)可的逡逑拉曼散射場(chǎng)會(huì)與金屬顆粒的強(qiáng)散射場(chǎng)引起的金屬顆粒表面的等離子體振蕩逡逑發(fā)生共振，這種共振的結(jié)果使振蕩分子產(chǎn)生了非常大的能量Ｉ９６），模型如圖１．２所逡逑示：逡逑廣邐ＬＭ邋（、①。）逡逑圖１．２金屬顆粒表而增強(qiáng)散射示意圖Ｍｌ逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１．２邋Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ邋ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋ｓｕｒｆａｃｅ邋ｅｎｈａｎｃｅｄ邋ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ邋ｏｆ邋ｍｅｔａｌ邋ｐａｒｔｉｃｌｅｓ逡逑８逡逑

圖１．３自然界中光子晶體逡逑Ｆｉｇ．邋１．３邋Ｐｈｏｔｏｎｉｃ邋ｃｒｙｓｔａｌｓ邋ｉｎ邋ｎａｔｕｒｅ逡逑１．４．１光子晶體制備逡逑目前光子晶體產(chǎn)生方法主要包括：自然生長(zhǎng)法，自然界中蝴蝶的翅膀、貝等多為這種方式；機(jī)械制備法，將多個(gè)二維光子晶體層層疊加，制備出三維光晶體ｎｗ；光學(xué)方法是通過(guò)光阻掩模板上刻蝕得到周期性有序結(jié)構(gòu)的。膠體沉法多用于三維光子晶體的制備，通過(guò)微粒間的毛細(xì)管力和液體蒸發(fā)時(shí)所形成的曲液面，兩者結(jié)合共同作用，實(shí)現(xiàn)膠體微粒的有序排列，形成整齊的結(jié)構(gòu)。光方法主要包括Ｘ射線光刻和電子束光刻，其優(yōu)點(diǎn)在于：自動(dòng)性強(qiáng)、聚焦深、度高，但此方法制備出的樣品透光性差�；瘜W(xué)刻蝕方法包括濕法刻蝕、干法刻蝕、逡逑和電化學(xué)刻蝕Ｍ？］。逡逑近年來(lái)通過(guò)不斷的優(yōu)化光子晶體的制備方法，使得光子晶體內(nèi)部結(jié)構(gòu)越來(lái)整齊均一，，通過(guò)研[偣庾泳逯芷諦猿Ｊ�、折蔀^�、结构类型谍x構(gòu)庾泳宥嫌嘔�。Ｃｈｅｎ谍x桑保矗常薟捎米宰樽熬郾揭蟻┣蛭＞擼票婦哂忻饗緣目傻饜徹

本文編號(hào)：2668699