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博士論文    

大豆疫霉GPCR-PIPKs基因家族及PsYKT6功能分析

     論文目錄

摘要第1-11頁

ABSTRACT第11-14頁

引言第14-16頁

上篇 文獻(xiàn)綜述第16-58頁

 第一章 G蛋白偶聯(lián)受體的研究進(jìn)展第16-42頁

  1 概述第16頁

  2 G蛋白偶聯(lián)受體的結(jié)構(gòu)第16-17頁

  3 G蛋白偶聯(lián)受體的分類第17-20頁

  4 G蛋白偶聯(lián)受體的信號傳遞機(jī)制第20-21頁

  5 G蛋白偶聯(lián)受體在人類中的研究概述第21-22頁

  6 G蛋白偶聯(lián)受體在植物中的研究概述第22-24頁

  7 G蛋白偶聯(lián)受體在盤基網(wǎng)柄菌中的研究概述第24-25頁

  8 G蛋白偶聯(lián)受體在模式真菌中的研究概述第25-31頁

   ·G蛋白偶聯(lián)受體在釀酒酵母中的研究概述第25-27頁

   ·G蛋白偶聯(lián)受體在裂殖酵母中的研究概述第27-28頁

   ·G蛋白偶聯(lián)受體在粗糙脈胞菌中的研究概述第28-29頁

   ·G蛋白偶聯(lián)受體在構(gòu)巢曲霉中的研究概述第29頁

   ·G蛋白偶聯(lián)受體在新型隱球酵母菌中的研究概述第29-31頁

  9 G蛋白偶聯(lián)受體在卵菌中的研究概述第31-32頁

  參考文獻(xiàn)第32-42頁

 第二章 RNA干擾技術(shù)在真菌及卵菌基因功能研究方面的應(yīng)用第42-58頁

  1 概述第42-44頁

   ·RNAi的發(fā)現(xiàn)第42-43頁

   ·RNAi的機(jī)理第43-44頁

  2 RNAI在真菌基因功能研究中的應(yīng)用第44-49頁

   ·RNAi在真菌基因功能研究中的策略第45-48頁

   ·RNA干擾技術(shù)和基因敲除技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)比較及分析第48-49頁

  3 RNAI在卵菌基因功能研究中的應(yīng)用第49-52頁

   ·卵菌中遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立第49-50頁

   ·卵菌中RNAi技術(shù)的應(yīng)用及發(fā)展第50-52頁

  參考文獻(xiàn)第52-58頁

下篇 研究內(nèi)容第58-166頁

 第一章 大豆疫霉中利用雙鏈RNA介導(dǎo)的基因沉默第58-82頁

  1 材料與方法第61-66頁

   ·供試菌株第61頁

   ·大豆疫霉菌株的培養(yǎng)和無性發(fā)育各階段菌體的獲得第61頁

   ·大豆與大豆疫霉的互作早期侵染菌絲的獲得第61頁

   ·目的基因的擴(kuò)增及overlap PCR片段的獲得第61頁

   ·dsRNA合成第61-63頁

   ·大豆疫霉瞬時轉(zhuǎn)化第63-64頁

   ·SYBR green實時定量RT-PCR分析第64-65頁

   ·孢子囊的誘導(dǎo)第65頁

   ·致病性測定第65-66頁

  2 結(jié)果與分析第66-76頁

   ·大豆疫霉中PsCdc14和PsAvr3a的克隆及結(jié)構(gòu)分析第66-67頁

   ·PsCdc14 dsRNA介導(dǎo)基因沉默轉(zhuǎn)化子不能發(fā)育形成孢子囊第67-69頁

   ·PsAvr3a全長ORF序列合成的dsRNA介導(dǎo)靶基因沉默第69-71頁

   ·PsAvr3a C端部分序列合成的dsRNA介導(dǎo)靶基因沉默第71-73頁

   ·dsRNA介導(dǎo)的基因沉默具有序列特異性第73頁

   ·PsAvr3a-PsCdc14 dsRNA同時介導(dǎo)PsAvr3a和PsCdc14基因的沉默第73-75頁

   ·單個dsRNA和PsAvr3a-PsCdc14 dsRNA介導(dǎo)基因沉默效率的比較第75-76頁

  3 討論第76-77頁

  參考文獻(xiàn)第77-82頁

 第二章 大豆疫霉G蛋白偶聯(lián)受體的生物信息學(xué)預(yù)測及轉(zhuǎn)錄分析第82-108頁

  1 材料與方法第84-87頁

   ·數(shù)據(jù)庫信息和同源檢索第84頁

   ·多重序列比對和系統(tǒng)發(fā)育分析第84-85頁

   ·供試菌株第85頁

   ·培養(yǎng)基制備第85頁

   ·大豆疫霉RNA-Sequencing測序及實時定量RT-PCR分析樣品的準(zhǔn)備第85頁

   ·RNA的提取第85-86頁

   ·RNA-Sequencing分析GPCR候選編碼基因的轉(zhuǎn)錄譜第86頁

   ·實時定量RT-PCR分析GPCR-PIPK基因家族的轉(zhuǎn)錄譜第86-87頁

  2 結(jié)果與分析第87-102頁

   ·GPCR候選基因的挖掘第87-89頁

   ·GPCR候選編碼基因的分類及同源性比較第89-93頁

   ·GPCR候選編碼基因在基因組中的結(jié)構(gòu)特征第93-96頁

   ·大豆疫霉GPCR候選編碼基因在生長發(fā)育及致病過程中的轉(zhuǎn)錄譜分析第96-98頁

   ·大豆疫霉中PIPK基因家族的分析第98-100頁

   ·大豆疫霉中GPCR-PIPK編碼基因的結(jié)構(gòu)預(yù)測及實時定量分析其生活史各個階段轉(zhuǎn)錄第100-102頁

  3 討論第102-104頁

  參考文獻(xiàn)第104-108頁

 第三章 新型G蛋白偶聯(lián)受體PSPIPK4參與調(diào)控大豆疫霉游動孢子休止及萌發(fā)第108-130頁

  1 材料與方法第110-115頁

   ·供試菌株第110頁

   ·大豆疫霉菌株的培養(yǎng)和無性發(fā)育各階段菌體的獲得第110-111頁

   ·大豆與大豆疫霉的互作早期侵染菌絲的獲得第111頁

   ·Southern雜交第111-112頁

   ·轉(zhuǎn)化載體的構(gòu)建第112頁

   ·大豆疫霉遺傳轉(zhuǎn)化第112-114頁

   ·PsPIPK4沉默突變體的表型分析第114頁

   ·SYBR green實時定量RT-PCR分析第114-115頁

   ·致病性測定第115頁

   ·趨化性分析第115頁

  2 結(jié)果與分析第115-124頁

   ·大豆疫霉PsPIPK4基因的克隆及結(jié)構(gòu)分析第115-117頁

   ·PsPIPK4在生活史階段及侵染階段的轉(zhuǎn)錄分析第117-118頁

   ·PsPIPK4基因沉默突變體的獲得第118-119頁

   ·PsPIPK4沉默突變體的表型分析第119-124頁

  3 討論第124-125頁

  參考文獻(xiàn)第125-130頁

 第四章 新型G蛋白偶聯(lián)受體PSPIPK10參與調(diào)控大豆疫霉的有性生殖第130-144頁

  1 材料與方法第132-133頁

   ·大豆疫霉菌株的培養(yǎng)和無性發(fā)育各階段菌體的獲得第132頁

   ·大豆與大豆疫霉的互作早期侵染菌絲的獲得第132頁

   ·質(zhì)粒構(gòu)建和大豆疫霉轉(zhuǎn)化第132頁

   ·PsPIPK10沉默突變體的表型分析第132頁

   ·SYBR green實時定量RT-PCR分析第132頁

   ·致病性測定第132-133頁

  2 結(jié)果與分析第133-140頁

   ·大豆疫霉PsPIPK10基因的克隆及氨基酸序列結(jié)構(gòu)分析第133-134頁

   ·PsPIPK10在生活史階段及侵染階段的轉(zhuǎn)錄分析第134-135頁

   ·PsPIPK10基因沉默突變體的獲得第135-136頁

   ·PsPIPK10基因沉默突變體中卵孢子的形成受到影響第136-138頁

   ·卵磷脂對野生型菌株和PsPIPK10基因沉默突變體產(chǎn)卵孢子的影響第138-139頁

   ·致病性測定第139-140頁

  3 討論第140-141頁

  參考文獻(xiàn)第141-144頁

 第五章 大豆疫霉SNARE蛋白家族生物信息學(xué)預(yù)測及PSYKT6的功能分析第144-166頁

  1 材料與方法第147-148頁

   ·數(shù)據(jù)庫信息和同源檢索第147頁

   ·重序列比對和系統(tǒng)發(fā)育分析第147頁

   ·大豆疫霉菌株的培養(yǎng)和無性發(fā)育各階段菌體的獲得第147頁

   ·大豆與大豆疫霉的互作早期侵染菌絲的獲得第147頁

   ·RNA-Sequencing分析SNARE候選編碼基因的轉(zhuǎn)錄譜第147頁

   ·質(zhì)粒構(gòu)建和大豆疫霉轉(zhuǎn)化第147-148頁

   ·PsYKT6沉默突變體的表型分析第148頁

   ·SYBR green實時定量RT-PCR分析第148頁

   ·致病性測定第148頁

  2 結(jié)果與分析第148-159頁

   ·大豆疫霉SNARE蛋白家族的挖掘第148-150頁

   ·大豆疫霉SNARE候選編碼基因的結(jié)構(gòu)預(yù)測及轉(zhuǎn)錄分析第150-152頁

   ·大豆疫霉PsYKT6編碼一個進(jìn)化上及其保守的R-SNARE蛋白第152-153頁

   ·PsYKT6沉默突變體的獲得第153-154頁

   ·PsYKT6沉默突變體表型分析第154-156頁

   ·PsYKT6沉默突變體致病性測定第156-159頁

  3 討論第159-160頁

  參考文獻(xiàn)第160-166頁

全文總結(jié)第166-168頁

攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的研究論文第168-170頁

致謝第170頁

論文編號BS479695，這篇論文共170頁
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