發(fā)布時(shí)間：2020-12-26 00:45

　　植物根際促生菌（plantgrowth-promotingrhizobacteria,PGPRs）是一類能在植物根際存活定殖并具有促生或防控土傳病害能力的有益微生物,例如Bacilusspp.,Streptomycesspp.,Pseudomonas spp.,和Burkholderia spp.等。近年來,PGPR 菌株因其環(huán)境友好、安全無毒等優(yōu)點(diǎn)作為微生物肥料在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中逐漸得到廣泛的應(yīng)用,在促進(jìn)作物生長及防控土傳病害等方面取得了良好的效果。微生物在根際的成膜和定殖受多種因素影響,包括細(xì)菌的鞭毛/運(yùn)動性、趨化性、多糖和植物根系分泌物等。這些影響因素與多種信號物質(zhì)參與的調(diào)控相關(guān),包括細(xì)胞外信號,如根系分泌物中的多種菌-植互作信號物質(zhì),還有細(xì)胞自身產(chǎn)生的多種調(diào)控信號,如細(xì)胞自身產(chǎn)生的群體感應(yīng)（quorum-sensing,QS）信號物質(zhì)。解淀粉芽孢桿菌（Bacillus imyloliqueae）SQR9是本課題組從生長良好的黃瓜根際土中獲得的一株植物根際有益菌。本文主要探究群體感應(yīng)信號分子AI-2對根際促生解淀粉芽孢桿菌SQR9的成膜和運(yùn)動性影響的分子機(jī)理。首先,通過基因敲除手段得到... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語及專有詞匯檢索表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 群體感應(yīng)系統(tǒng)
        1.1 群體感應(yīng)系統(tǒng)的概念及作用機(jī)制
        1.2 群體感應(yīng)信號分子
            1.2.1 AI-2信號分子及生理功能
            1.2.2 AI-2群感信號的分子調(diào)控機(jī)制
    2 根際有益芽孢桿菌的生物膜形成與根際定殖
        2.1 細(xì)菌生物膜簡介
            2.1.1 細(xì)菌生物膜的形成過程
            2.1.2 細(xì)菌生物膜的形成機(jī)制
        2.2 細(xì)菌生物膜檢測方法
            2.2.1 試管法
            2.2.2 96孔微量板法
        2.3 有益菌的根際定殖
        2.4 生物膜形成能力是影響細(xì)菌根際定殖的重要因素
    3 群感信號影響細(xì)菌定殖能力
        3.1 群感信號分子AI-2對生物膜形成的影響
        3.2 群感信號分子AI-2對細(xì)菌運(yùn)動性的影響
    4 菌株SQR9中AI-2群感信號及其功能
    5 本研究的立題依據(jù)和意義
    6 技術(shù)路線
第二章 LUXS-AI-2型密度感應(yīng)系統(tǒng)對解淀粉芽孢桿菌SQR9菌株生物膜形成及根際定殖的影響
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
            1.2.1 細(xì)菌基因組提取
            1.2.2 質(zhì)粒提取
            1.2.3 luxS基因的敲除
            1.2.4 SQR9以及突變體SQR9-ΔluxS的生物膜形成和定量分析
            1.2.5 SQR9以及突變體SQR9-ΔluxS的運(yùn)動性的測定
            1.2.6 SQR9以及突變體SQR9-ΔluxS的細(xì)胞外多糖（EPS）的測定
            1.2.7 SQR9以及突變體SQR9-ΔluxS的生長曲線的測定
            1.2.8 群感信號分子AI-2在SQR9不同培養(yǎng)時(shí)期的測定
                1.2.8.1 AI-2獲取,活性測定
                    1.2.8.1.1 AI-2獲取
                    1.2.8.1.2 AI-2活性測定
                1.2.8.2 AI-2濃度定量測定
                1.2.8.3 不同培養(yǎng)時(shí)間的SQR9菌體上清的AI-2的濃度定量
            1.2.9 突變體SQR9-ΔluxS的互補(bǔ)
                1.2.9.1 表達(dá)載體pNW33N-luxS的構(gòu)建
                1.2.9.2 表達(dá)載體pNW33N-luxS轉(zhuǎn)入突變體SQR9-ΔluxS
            1.2.10 SQR9菌株和突變體SQR9-ΔluxS在黃瓜和番茄根際原位定殖的影響
                1.2.10.1 SQR9及突變體SQR9-ΔluxS的綠色熒光蛋白（GFP）標(biāo)記
                1.2.10.2 SQR9以及突變體SQR9-ΔluxS的根際定殖分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 luxS基因的敲除
        2.2 AI-2信號分子減弱SQR9菌株生物膜的形成
        2.3 AI-2號降低SQR9菌株細(xì)胞的swimming和swarming運(yùn)動性
        2.4 AI-2信號抑制SQR9菌株產(chǎn)細(xì)胞外多糖（EPS）
        2.5 SQR9與突變體SQR9-ΔluxS的生長曲線差異
        2.6 群感信號分子AI-2在菌株中的測定
            2.6.1 AI-2活性的測定
            2.6.2 AI-2濃度的測定
        2.7 突變體SQR9-ΔluxS的互補(bǔ)和SQR9-ΔluxS-gfp的互補(bǔ)
        2.8 AI-2對SQR9菌株在黃瓜和番茄根際成膜定殖的影響
    3 討論
    4 小結(jié)
第三章 LUXS-AI-2型密度感應(yīng)系統(tǒng)對解淀粉芽孢桿菌SQR9基因轉(zhuǎn)錄影響的分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
            1.2.1 生物膜及運(yùn)動性相關(guān)基因的定量
            1.2.2 轉(zhuǎn)錄組樣品準(zhǔn)備
    2 結(jié)果與分析
        2.1 生物膜與運(yùn)動性相關(guān)基因定量
        2.2 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析
    3 討論
    4 小結(jié)
第四章 LUXS-AI-2型信號在解淀粉芽孢桿菌SQR9中的可能受體蛋白分析
    1 材料及方法
        1.1 基因組序列
        1.2 計(jì)算工具
        1.3 遠(yuǎn)距離同源蛋白序列搜索
        1.4 已知AI-2受體蛋白分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 解淀粉芽孢桿菌SQR9中的rbs操縱子搜索
        2.2 解淀粉芽孢桿菌SQR9中的lsr操縱子搜索
    3 討論
    4 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
全文結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
展望
附錄
碩士期間已（待）發(fā)表的論文
致謝



本文編號：2938701