目的：通過對H22荷瘤小鼠移植瘤基因表達譜的檢測,發(fā)現(xiàn)更多與消癌解毒方治療作用相關的信號通路和細胞因子。通過細胞實驗,從細胞分了水平進一步探討消癌解毒方抗癌機制。 方法：動物實驗部分,H22荷瘤小鼠隨機分為空白對照組,消癌解毒方低、中、高劑量組和順鉑組。應用基因芯片技術,檢測各組H22荷瘤小鼠腫瘤組織的差異表達基因；應用Gene Ontology (GO)和pathway分析,找出與消癌解毒方抗癌機制相關的信號通路和基因；并用實時定量PCR法(Realtime-PCR)驗證MMP9、MMP12、TIMP2、VEGF和TGFβ等基因的表達。細胞實驗部分,以低、中、高劑量組的消癌解毒方含藥血清培養(yǎng)人肝癌SMMC-7721細胞,噻唑藍還原法(MTT)檢測消癌解毒方對肝癌細胞的抑制作用；電鏡觀察細胞的凋亡形態(tài)；膜聯(lián)蛋白A5一綠色熒光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)流式細胞儀檢測細胞的凋亡率；Western Blot法檢測細胞TLR2、TRAF6、TGFβ、VEGF、MMP2、 Survivin和Livin蛋白的表達。 結果：消癌解毒方能改變H22荷瘤小鼠移植瘤多個基因的表達,并能顯著影響多個與腫瘤生長、凋亡和免疫相關的信號通路；下調H22荷瘤小鼠MMP9、MMP12、VEGF和TGFβ,上調TIMP2和IRF1基因的表達。消癌解毒方含藥血清能明顯抑制人肝癌SMMC-7721細胞在體外的增殖,抑制率以24h時效果最佳,分別為低劑量組(4.2%)、中劑量組(12.1%)、高劑量組(35.8%)、順鉑組(35.3%),消癌解毒方高劑量組與順鉑組無統(tǒng)計學差異(P0.05)；消癌解毒方能明顯促進肝癌細胞的凋亡,電鏡下SMMC-7721細胞出現(xiàn)明顯的細胞凋亡的形態(tài)學改變；Annexin V-FITC/PI流式細胞儀檢測消癌解毒方含藥血清作用人肝癌SMMC-7721細胞24h后的凋亡率,高劑量組(23.04±1.6%)與順鉑組(22.84±4.4%)差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)；Western Blot法檢測發(fā)現(xiàn),消癌解毒方各劑量組TLR2、TRAF6、TGFβ、 VEGF、MMP2、Survivin和Livin蛋白的表達明顯低于空白對照組。 結論：消癌解毒方能抑制H22荷瘤小鼠移植瘤的生長,影響多個與腫瘤增殖、凋亡和免疫相關的基因和信號通路；下調H22荷瘤小鼠MMP9、MMP12、VEGF和TGFβ基因,上調TIMP2和IRF1基因的表達。消癌解毒方含藥血清能抑制人肝癌SMMC-7721細胞的增殖,促進其凋亡；下調TLR2、TRAF6、TGFβ、VEGF、MMP2、Survivin和Livin蛋白的表達。這些可能是消癌解毒方發(fā)揮抗癌作用的機制。
【學位單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2013
【中圖分類】：R273
【文章目錄】：
目錄
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞
前言
    參考文獻
第一章 理論研究
    第一節(jié) 癌毒理論及其治療方法的探討
        1 癌毒理論
        2 癌毒的治療方法
        參考文獻
    第二節(jié) 基因芯片技術在中醫(yī)藥研究中的應用
        1 基因芯片技術在中藥基因組學中的應用
        2 基因芯片技術在中醫(yī)基因組學中的應用
        參考文獻
    第三節(jié) 中藥抗腫瘤的研究進展
        1 抑制腫瘤細胞增殖,誘導細胞凋亡和分化
        2 抑制腫瘤血管生成
        3 抑制細胞外基質的降解
        4 調節(jié)機體免疫功能
        5 抗多藥耐藥作用
        6 對化療的增效減毒作用
        7 對信息傳導途徑的作用
        8 對腫瘤細胞端粒酶的影響
        參考文獻
第二章 實驗研究
    第一節(jié) 消癌解毒方對H22荷瘤小鼠移植瘤的抑制和促凋亡實驗研究基礎
    第二節(jié) 消癌解毒方對H22荷瘤小鼠移植瘤基因表達譜的影響
        1 實驗材料
        2 實驗方法
        3 實驗結果
        4 討論
        參考文獻
    第三節(jié) Realtime-PCR法檢測消癌解毒方作用后H22荷瘤小鼠移植瘤的差異表達基因
        1 實驗材料
        2 實驗方法
        3 實驗結果
        4 討論
        參考文獻
    第四節(jié) 消癌解毒方含藥血清對人肝癌SMMC-7721細胞的影響
        1 實驗材料
        2 實驗方法
        3 實驗結果
        4 討論
        參考文獻
結論
參考文獻
攻讀博士學位期間取得的研究成果
致謝
作者簡介

【參考文獻】

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本文編號：2893370