發(fā)布時間：2020-04-12 22:28

【摘要】：目的:探索程序性死亡受體1(programmed death 1,PD-1)、其主要配體程序性死亡配體1(programmed death ligand-1,PD-L1)、癌胚抗原相關粘附分子1(carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1,CEACAM-1)以及T細胞免疫球蛋白黏蛋白3(T cells immunoglobulindomain and mucin domain protein-3,TIM-3)在晚期下咽癌患者中的表達以及與臨床意義,分析其與病理、腫瘤微環(huán)境中的免疫細胞之間的相互關系,為PD-1、PD-L1、CEACAM-1以及TIM-3相應抑制劑在晚期下咽患者中的應用提供依據(jù)。方法:收集2011/3至2014/11在解放軍總醫(yī)院經(jīng)手術切除、未經(jīng)放化療處理的39例下咽癌患者的相關資料(年齡、性別、手術相關資料、病理分型、臨床分期以及隨訪情況等)和石蠟標本,制備石蠟切片。應用免疫組化染色判斷PD-1、PD-L1、CEACAM-1以及TIM-3在下咽癌石蠟切片上是否表達以及腫瘤微環(huán)境中CD4+T、CD8+T、調節(jié)性T細胞(Regulatory cells,Tregs)、以及巨噬細胞的表達情況。對免疫組化染色陽性的標記進行多頻譜的免疫組化染色,使用PerkinElmer vectra全自動智能切片分析系統(tǒng)進行定性、定量的統(tǒng)計。結果:在晚期下咽癌中,CD4、CD8以及PD-L1的陽性表達率與患者的病理分型有關,腫瘤微環(huán)境中的CD4陽性率隨著分化程度的降低逐漸增高(p=0.010.05),腫瘤間質免疫細胞上以及整個微環(huán)境中CD8在中分化組中表達率最低,高分化組居中,低分化組中最高(p=0.040.05,p=0.030.05)。腫瘤微環(huán)境中PD-L1的表達與患者的病理分型有關(p=0.010.05),中分化組中PD-L1的表達量最低,高分化居中,低分化最高。CEACAM-1、TIM-3與患者的臨床分期相關,在IVA期患者中的陽性率高于IIII期(p=0.020.05,p=0.030.05)。PD-1、PD-L1、Foxp3、CEACAM-1、TIM-3陽性率與患者的術后生存時間有關,PD-1、PD-L1、Foxp3以及CEACAM-1陽性表達率高的組患者術后生存時間長(p=0.030.05,p=0.020.05,p=0.040.05,p=0.030.05),TIM-3的陽性表達率高組患者術后生存時間短(p=0.0480.05)。在相關性上,癌旁間質中免疫細胞上PD-1、PD-L1的表達量呈正相關,spearman檢查結果:r=0.443,p=0.0050.05。在腫瘤微環(huán)境中PD-1、PD-L1與CD8的表達呈正相關,spearman檢查結果分別:r=0.686,p0.0001;r=0.575,p=0.0001。癌旁間質中免疫細胞上PD-1、PD-L1與Foxp3的表達呈正相關,spearman檢查結果:r=0.617,p0.0001;r=0.667,p0.0001。在腫瘤微環(huán)境中,PD-L1與CD4、CD68表達呈正相關,spearman檢查結果:r=0.533,p=0.0005;r=0.533,p=0.0005。結論:PD-1、PD-L1、CEACAM-1以及TIM-3在晚期下咽鱗癌中表達。其中,PD-L1陽性率的高低與下咽鱗癌患者腫瘤細胞核的分化程度存在聯(lián)系;CEACAM-1、TIM-3的表達影響患者的臨床分期;PD-1、PD-L1、Foxp3、CEACAM-1、TIM-3陽性率的高低對患者術后生存時間有影響,其中PD-1、PD-L1、Foxp3、CEACAM-1的陽性率高者術后生存時間較長,而TIM-3陽性高者術后生存時間較短。癌旁間質中免疫細胞上PD-1、PD-L1的表達,在腫瘤微環(huán)境中PD-1、PD-L1與CD8的表達,癌旁間質中免疫細胞上PD-1、PD-L1與Foxp3的表達,以及PD-L1與腫瘤微環(huán)境中的CD4、CD68表達均呈正相關關系。
【圖文】：

1-1 晚期下咽癌中 PD-1、PD-L1 、TIM-3、CEACAM-1、CD4、CD8、CD68 以及 Treg免疫組化染色結果。顯微鏡 400x 。：①-④分別為下咽癌腫瘤微環(huán)境中免疫細胞 CD4、CD8、CD68、Foxp3 的表達情況（如箭示）：①-②示 CD4、CD8 表達于腫瘤微環(huán)境中淋巴細胞的細胞膜及部分胞漿中，③CD68 表腫瘤微環(huán)境的巨噬細胞的細胞膜及部分胞漿中，④Foxp3 表達于部分淋巴細胞的細胞核中-⑧為下咽癌中免疫受體 PD-1、PD-L1 、TIM-3 以及 CEACAM-1 的表達情況（如箭頭所示PD-1 表達于淋巴細胞的細胞膜及部分胞漿中，⑥PD-L1 表達于淋巴細胞以及下咽癌細胞的細及部分胞漿中，，⑦TIM-3 表達于淋巴細胞與腫瘤細胞上，量少且部分呈完全無表達狀態(tài)CEACAM-1 表達于下咽癌腫瘤細胞的胞膜與胞漿上外，淋巴細胞、內皮細胞以及上皮細胞達。 小結上述實驗通過隨機選擇的 6 組(每組 8 例)下咽鱗癌的石蠟切片，運疫組化的方法，檢測到在下咽鱗狀細胞癌上有 PD-1、PD-L1 、TIMEACAM-1 的表達，其中 TIM-3 在部分下咽鱗癌中表達，部分患者中

咽癌中 PD-1、PD-L1 、TIM-3、CEACAM-1、CD4、CD8、CD68 以頻譜免疫組化染色結果。顯微鏡 200X。-G 為第一組染色結果，A-E 箭頭所示分別為 PD-1、PD-L1、CD4、CD8抗體染色結果，G 為其六種抗體染色結果，其中背景藍色為 DAPI 所染ACAM-1、TIM-3 的單一染色結果，TIM-3 的染色背景稍強，且著色細胞與免疫組化染色結果一致。統(tǒng)計 PerkinElmer Vectra 全自動智能切片分析系統(tǒng)進行細胞Pad Prism .6 進行統(tǒng)計分析，其中正太分布的數(shù)據(jù)使用態(tài)分布數(shù)據(jù)使用非參數(shù)檢驗，具體檢驗方法見相關部 例患者的腫瘤微環(huán)境中，PD-1、PD-L1 、TIM-3、C性率平均值分別為：10.45%、25.62%、3.56%以及 9.36率低于 5%者分別為 17(17/39，43.59%)、10(10/39，
【學位授予單位】：川北醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R739.63;R730.43

【參考文獻】

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1 董頻;房居高;高軍茂;黃志剛;雷大鵬;李曉明;潘新良;張彬;;下咽癌外科手術及綜合治療專家共識[J];中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2017年01期

2 陸海洋;王利;;TIM-3分子及其在抗腫瘤免疫中的作用[J];現(xiàn)代免疫學;2015年01期

3 吳介恒;楊安鋼;溫偉紅;;PD-1/PD-L1參與腫瘤免疫逃逸的研究進展[J];細胞與分子免疫學雜志;2014年07期

4 張峰;劉爭;崔永華;王國華;曹平;;鼻咽癌組織中程序性死亡配體-1的表達及其臨床意義[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2008年09期

本文編號：2625249