【摘要】：目的探討ELAM-1(Endothelial leukocyte adhesion molecule-1)在裸鼠鼻咽癌移植瘤、轉(zhuǎn)移灶,包括淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá),并進(jìn)一步確定ELAM-1是鼻咽癌轉(zhuǎn)移的重要分子標(biāo)志物。方法1、細(xì)胞培養(yǎng),將鼻咽癌細(xì)胞株SUNE1-亞株5-8F細(xì)胞用1640培養(yǎng)基、胎牛血清及青鏈霉素混合液配置成的完全培養(yǎng)液置于37°C、5%CO_2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每天觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),適時(shí)更換培養(yǎng)液及進(jìn)行細(xì)胞傳代,適時(shí)凍存多余細(xì)胞;用六孔板分別將細(xì)胞培養(yǎng)0h、24h、48h、72h、96h、120h、144h,計(jì)數(shù)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞個(gè)數(shù),繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)。2、Balb/c雌性裸鼠共16只,移植癌細(xì)胞前分別稱(chēng)取每只裸鼠的體重,在裸鼠左側(cè)后爪爪墊注射處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的鼻咽癌細(xì)胞懸浮液20μL(瘤細(xì)胞約為2×10~6個(gè)),之后每日觀察裸鼠生長(zhǎng)情況,于接種后8周常規(guī)麻醉,處死全部裸鼠,詳細(xì)解剖檢查,測(cè)量腫瘤的大小,觀察腫瘤以及轉(zhuǎn)移情況,所有標(biāo)本經(jīng)福爾馬林固定,常規(guī)石蠟包埋,切片,做HE染色及免疫組化染色。3、用HE染色觀察各病理組織并判斷各組織中是否出現(xiàn)轉(zhuǎn)移灶,實(shí)驗(yàn)分組:根據(jù)是否出現(xiàn)轉(zhuǎn)移癌,將裸鼠分為轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組。4、用方差分析比較轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組裸鼠初始體重的差異。5、用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)ELAM-1在裸鼠鼻咽癌移植瘤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)。用image J軟件定量分析ELAM-1在各組間表達(dá)情況。結(jié)果1、所培養(yǎng)的細(xì)胞均生長(zhǎng)狀態(tài)良好;16只裸鼠均種瘤成功,且裸鼠在荷瘤期間生命體征均正常,生長(zhǎng)狀態(tài)良好。2、解剖裸鼠,所有組織經(jīng)福爾馬林固定包埋及切片后,共得到27個(gè)蠟快,81片切片,HE染色后發(fā)現(xiàn),共10只裸鼠發(fā)生轉(zhuǎn)移,為轉(zhuǎn)移組,成功建立了人鼻咽癌裸鼠移植瘤轉(zhuǎn)移模型;其中7只僅淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,1只僅腹盆腔轉(zhuǎn)移,2只既發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移又出現(xiàn)腹盆腔轉(zhuǎn)移灶。另6只未見(jiàn)轉(zhuǎn)移灶,為非轉(zhuǎn)移組。3、ELAM-1在所有裸鼠鼻咽癌移植瘤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)均為陽(yáng)性;其中,非轉(zhuǎn)移組瘤組織均為弱陽(yáng)性,轉(zhuǎn)移組瘤組織中4例為強(qiáng)陽(yáng)性、6例為陽(yáng)性。HE染色顯示鼻咽癌細(xì)胞的胞核為深藍(lán)色,具有顯著的異形性,胞漿及周?chē)睦w維組織呈現(xiàn)深淺不一的紅色。正常的淋巴結(jié)組織呈圓形或橢圓形,其周?chē)鸀橐粚臃奂t色被膜,被膜下方的深藍(lán)色部分為皮質(zhì),中央淺色部分為髓質(zhì);轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的HE染色顯示,在正常的淋巴組織中可見(jiàn)散在大小不等癌巢,部分轉(zhuǎn)移灶中出現(xiàn)壞死。4、轉(zhuǎn)移組與非轉(zhuǎn)移組裸鼠初始體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)5、轉(zhuǎn)移組ELAM-1的表達(dá)高于非轉(zhuǎn)移組,且兩組間表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);結(jié)論ELAM-1在鼻咽原發(fā)癌、轉(zhuǎn)移癌中高表達(dá),且與鼻咽癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān),是鼻咽癌轉(zhuǎn)移的重要分子標(biāo)志物。ELAM-1對(duì)鼻咽癌及轉(zhuǎn)移灶的監(jiān)測(cè)及臨床治療以及患者預(yù)后的評(píng)價(jià)等可提供參考,有望為以后研發(fā)出檢測(cè)鼻咽癌早期轉(zhuǎn)移的靶向造影劑、靶向藥物等提供動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)思路。
【圖文】：

轉(zhuǎn)移中的意義 作臺(tái)臺(tái)面并用醫(yī)用滅菌棉球擦拭臺(tái)面后胞放入 37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，將驗(yàn)中心 SPF 級(jí)實(shí)驗(yàn)室，秤量每只裸鼠的墊用 75%酒精消毒后，將上述注射器內(nèi)7 天后裸鼠爪墊開(kāi)始腫大，每天觀察裸1-2），主要觀察裸鼠行動(dòng)、外觀、神經(jīng)后解剖。

圖 1-2.已成瘤的裸鼠Tumor-bearing nude mice材次性醫(yī)療無(wú)菌單平鋪于解剖板上，常規(guī)麻醉后頸椎脫臼， 取解剖針固定裸鼠四肢。用鑷子提起裸鼠左側(cè)爪墊細(xì)用解剖柳葉刀將瘤體剝離，觀察組織結(jié)構(gòu)并記錄瘤解剖柳葉刀將瘤體切開(kāi)，放入盛有 10%中性福爾馬林溶固定，，在管側(cè)壁做好標(biāo)記。仔細(xì)解剖裸鼠腹腔、胸腔淋巴結(jié)組織等，觀察各臟器的外觀、顏色、大小及形淋巴結(jié)和（或）轉(zhuǎn)移瘤（灶），取出所有懷疑異常組織入盛有 10%中性福爾馬林溶液的 50mL 離心管中，浸泡
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R739.63

【參考文獻(xiàn)】

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