本文關(guān)鍵詞：基因修飾人BMSCs構(gòu)建組織工程骨的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 組織工程骨 BMSCs BMP- 基因治療 轉(zhuǎn)染

【摘要】：目的探索構(gòu)建可穩(wěn)定表達(dá)修飾基因人BMP-2(human BMP-2,hBMP-2)的細(xì)胞組織工程骨促進(jìn)骨再生的可行性。方法從成人肌肉組織中以RT-PCR方法克隆hBMP-2基因全長,連接構(gòu)建真核質(zhì)粒載體,經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染人BMSCs(humanBMSCs,hBMSCs)。設(shè)定hBMP-2基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞組、空質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞組以及同代細(xì)胞正常培養(yǎng)組,經(jīng)G418篩選培養(yǎng)后,分別行細(xì)胞ALP比活性測定、細(xì)胞hBMP-2免疫組織化學(xué)染色、hBMP-2 mRNA表達(dá)水平的RT-PCR檢測及細(xì)胞上清的hBMP-2分泌水平的免疫酶斑點(diǎn)(dot-ELISA)檢測。然后將基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞與羥基磷灰石(hydroxyapatite,HA)材料進(jìn)行復(fù)合培養(yǎng),觀察組織工程骨的構(gòu)建情況。動物實(shí)驗(yàn)分4組,每組3只裸鼠,于裸鼠雙側(cè)背脊肌內(nèi)分別植入hBMP-2基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞與HA材料復(fù)合培養(yǎng)體(A組),空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞復(fù)合HA材料(B組)、單純基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞懸液(C組)以及hBMP-2基因質(zhì)粒加脂質(zhì)體(D組)作為對照。4組裸鼠均于4周后取材、脫鈣、切片,行HE染色及阿爾新藍(lán)染色觀察新骨形成情況。結(jié)果 hBMP-2基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞在培養(yǎng)48 h和3周時(shí)均可表達(dá)分泌外源基因hBMP-2,免疫組織化學(xué)染色呈陽性,且成骨分化的ALP比活性明顯高于兩對照組(P0.05)。轉(zhuǎn)染細(xì)胞能良好貼附于HA表面生長。動物實(shí)驗(yàn)中,A組3只裸鼠6側(cè)背脊肌內(nèi)4側(cè)有較多新骨生成;B組3只裸鼠中的1只雙側(cè)背脊肌內(nèi)有新骨生成;C組未發(fā)現(xiàn)新骨生成;D組1只裸鼠1側(cè)背脊肌內(nèi)發(fā)現(xiàn)少量成骨。結(jié)論 hBMP-2基因轉(zhuǎn)染修飾的h BMSCs與HA復(fù)合培養(yǎng)構(gòu)建的組織工程骨,可瞬時(shí)和穩(wěn)定表達(dá)分泌hBMP-2,并能促進(jìn)裸鼠肌肉組織內(nèi)異位成骨。
【作者單位】： 北京大學(xué)深圳醫(yī)院脊柱外科·深圳市脊柱外科重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 組織工程骨 BMSCs BMP- 基因治療 轉(zhuǎn)染
【基金】：廣東省醫(yī)學(xué)科研基金資助項(xiàng)目(A2014654)~~
【分類號】：R68
【正文快照】： 自體骨植骨促進(jìn)骨組織再生愈合是臨床治療骨缺損和脊柱融合的經(jīng)典方法,重組BMP蛋白類的骨誘導(dǎo)因子也已廣泛應(yīng)用于臨床,但自體骨取骨并發(fā)癥和來源不足以及重組蛋白的異化致炎性和釋放不可控性等問題常會影響臨床療效,研發(fā)促進(jìn)骨再生的新方法意義重大[1-2]。骨再生需要在局部和

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李瑞琦;張國平;任立中;沙子義;高宏陽;董威;趙峰;王偉;;液態(tài)納米組織工程骨對兔實(shí)驗(yàn)性股骨頭缺血性壞死的修復(fù)作用[J];河北醫(yī)藥;2008年08期

2 陳濱,裴國獻(xiàn),王珂,金丹,魏寬海,任高宏;大動物體內(nèi)促組織工程骨成骨及血管化手段的研究[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2003年01期

3 趙御森;王海波;孟憲勇;張瑛;楊新明;;組織工程骨修復(fù)超臨界骨缺損研究進(jìn)展[J];河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年01期

4 郭書權(quán);許建中;梁文杰;羅飛;吳雪暉;;異基因組織工程骨修復(fù)豬脛骨缺損術(shù)后外周血T淋巴細(xì)胞亞群的檢測[J];免疫學(xué)雜志;2007年01期

5 劉杰;王序全;吳雪暉;許建中;羅飛;謝肇;代飛;何清義;;個(gè)體化組織工程骨修復(fù)小兒長骨缺損的影像學(xué)觀察[J];華南國防醫(yī)學(xué)雜志;2008年02期

6 趙琳;史志勇;周晟;賈有福;劉佳;王軍勝;;組織工程骨膜異體體內(nèi)成骨修復(fù)兔骨缺損的初步觀察[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2008年02期

7 藍(lán)旭;葛寶豐;劉雪梅;;凍存保護(hù)劑對低溫保存的組織工程骨修復(fù)骨缺損的影響[J];創(chuàng)傷外科雜志;2007年04期

8 羅曉中,楊志明,鄧力,李秀群;低溫保存的組織工程骨修復(fù)骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2005年07期

9 黃愛文;金丹;裴國獻(xiàn);曾憲利;胡稷杰;林海寧;;復(fù)合PRP的可注射型組織工程骨修復(fù)兔橈骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2007年14期

10 李建軍,劉建國,徐莘香;組織工程骨修復(fù)中骨與血供的聯(lián)合重建[J];中國骨腫瘤骨病;2003年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 羅曉中;楊志明;鄧力;李秀群;;低溫保存的組織工程骨修復(fù)骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[A];2005'中國修復(fù)重建外科論壇論文匯編[C];2005年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 熊艷;用組織工程骨替代缺損肋骨[N];中國醫(yī)藥報(bào);2000年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蔣佳;雙基因修飾組織工程骨的構(gòu)建及其成骨的研究[D];上海交通大學(xué);2008年

2 程偉;胎牛松質(zhì)骨來源組織工程骨的構(gòu)建及其理化、生物學(xué)特性研究[D];南京大學(xué);2015年

3 江汕;組織工程骨原位構(gòu)建修復(fù)股骨缺損的示蹤研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

4 常正奇;富含功能蛋白的凍干組織工程骨的構(gòu)建及成骨效果與成骨機(jī)制的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2014年

5 王永剛;感覺神經(jīng)及運(yùn)動神經(jīng)束構(gòu)建神經(jīng)化組織工程骨修復(fù)兔股骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2006年

6 芮鋼;成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)合異種骨脫細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)建組織工程骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2004年

7 畢霞;人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7基因強(qiáng)化的組織工程骨的構(gòu)建及對兔骨缺損的修復(fù)作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

8 范偉;VEGF基因修飾組織工程骨促進(jìn)兔大段骨缺損修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

9 楊明;VEGF165、BMP4基因復(fù)合生物活性玻璃組織工程骨的構(gòu)建及修復(fù)骨缺損的研究[D];中南大學(xué);2013年

10 彭吾訓(xùn);組織工程骨修復(fù)兔股骨頭壞死模型的實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2006年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 拓振合;應(yīng)用組織工程骨膜及其脫蛋白骨輔助支架修復(fù)兔橈骨大段骨缺損[D];蘭州大學(xué);2014年

2 吳治林;個(gè)體化組織工程骨修復(fù)人長骨缺損的回顧性對比研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2014年

3 劉杰;組織工程骨修復(fù)長骨缺損實(shí)驗(yàn)與臨床初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

4 靳慧勇;用于組織工程骨成骨機(jī)制研究的小鼠模型的建立及其初步應(yīng)用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

5 姚旺祥;血管神經(jīng)化組織工程骨修復(fù)兔股骨缺損的早期組織學(xué)觀察[D];南方醫(yī)科大學(xué);2007年

6 賈yN佳;轉(zhuǎn)bFGF基因的組織工程骨修復(fù)兔骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

7 任廣鐵;組織工程骨膜修復(fù)兔橈骨大段骨缺損的早期觀察及BMP-2對組織工程骨膜體外成骨能力的影響[D];蘭州大學(xué);2014年

8 周權(quán);同種異體胎兔BMSCs為種子細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];南華大學(xué);2015年

9 畢龍;抗感染組織工程骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

10 宋擇眾;通過檢測堿性磷酸酶和骨鈣素2的表達(dá)水平定量分析組織工程骨成骨影響因素[D];山東大學(xué);2015年

，

本文編號：972470