本文關鍵詞：基因修飾人BMSCs構建組織工程骨的實驗研究

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【摘要】：目的探索構建可穩(wěn)定表達修飾基因人BMP-2(human BMP-2,hBMP-2)的細胞組織工程骨促進骨再生的可行性。方法從成人肌肉組織中以RT-PCR方法克隆hBMP-2基因全長,連接構建真核質粒載體,經(jīng)脂質體轉染人BMSCs(humanBMSCs,hBMSCs)。設定hBMP-2基因轉染細胞組、空質粒載體轉染細胞組以及同代細胞正常培養(yǎng)組,經(jīng)G418篩選培養(yǎng)后,分別行細胞ALP比活性測定、細胞hBMP-2免疫組織化學染色、hBMP-2 mRNA表達水平的RT-PCR檢測及細胞上清的hBMP-2分泌水平的免疫酶斑點(dot-ELISA)檢測。然后將基因轉染細胞與羥基磷灰石(hydroxyapatite,HA)材料進行復合培養(yǎng),觀察組織工程骨的構建情況。動物實驗分4組,每組3只裸鼠,于裸鼠雙側背脊肌內(nèi)分別植入hBMP-2基因轉染細胞與HA材料復合培養(yǎng)體(A組),空載質粒轉染細胞復合HA材料(B組)、單純基因轉染細胞懸液(C組)以及hBMP-2基因質粒加脂質體(D組)作為對照。4組裸鼠均于4周后取材、脫鈣、切片,行HE染色及阿爾新藍染色觀察新骨形成情況。結果 hBMP-2基因轉染細胞在培養(yǎng)48 h和3周時均可表達分泌外源基因hBMP-2,免疫組織化學染色呈陽性,且成骨分化的ALP比活性明顯高于兩對照組(P0.05)。轉染細胞能良好貼附于HA表面生長。動物實驗中,A組3只裸鼠6側背脊肌內(nèi)4側有較多新骨生成;B組3只裸鼠中的1只雙側背脊肌內(nèi)有新骨生成;C組未發(fā)現(xiàn)新骨生成;D組1只裸鼠1側背脊肌內(nèi)發(fā)現(xiàn)少量成骨。結論 hBMP-2基因轉染修飾的h BMSCs與HA復合培養(yǎng)構建的組織工程骨,可瞬時和穩(wěn)定表達分泌hBMP-2,并能促進裸鼠肌肉組織內(nèi)異位成骨。
【作者單位】： 北京大學深圳醫(yī)院脊柱外科·深圳市脊柱外科重點實驗室;
【關鍵詞】： 組織工程骨 BMSCs BMP- 基因治療 轉染
【基金】：廣東省醫(yī)學科研基金資助項目(A2014654)~~
【分類號】：R68
【正文快照】： 自體骨植骨促進骨組織再生愈合是臨床治療骨缺損和脊柱融合的經(jīng)典方法,重組BMP蛋白類的骨誘導因子也已廣泛應用于臨床,但自體骨取骨并發(fā)癥和來源不足以及重組蛋白的異化致炎性和釋放不可控性等問題常會影響臨床療效,研發(fā)促進骨再生的新方法意義重大[1-2]。骨再生需要在局部和

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