本文關(guān)鍵詞：巴西橡膠樹(shù)HbICE1基因酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及互作蛋白的篩選

  更多相關(guān)文章： 巴西橡膠樹(shù) HbICE 酵母雙雜 蛋白互作 冷耐受

【摘要】：寒害是我國(guó)植膠區(qū)的主要自然災(zāi)害之一,不僅影響橡膠產(chǎn)量還威脅到橡膠樹(shù)的生存。擬南芥中,ICE1是低溫脅迫信號(hào)通路中的重要轉(zhuǎn)錄激活因子,但橡膠樹(shù)冷脅迫信號(hào)途徑中包括Hb ICE1在內(nèi)的大部分關(guān)鍵基因尚未被克隆與鑒定,與Hb ICE1蛋白發(fā)生互作的蛋白也不清楚,成為嚴(yán)重阻礙橡膠樹(shù)抗寒分子機(jī)理研究的瓶頸。為了篩選和鑒定與巴西橡膠樹(shù)Hb ICE1蛋白發(fā)生互作的蛋白,闡明橡膠樹(shù)抵御寒害脅迫的分子機(jī)理,本文首先通過(guò)PCR擴(kuò)增出Hb ICE1基因的編碼序列(約1400 bp),然后將目標(biāo)序列插入p GBKT-7載體,構(gòu)建酵母雙雜交誘餌載體;將該載體轉(zhuǎn)入酵母Y2H菌株感受態(tài)細(xì)胞中,并在缺陷型培養(yǎng)基上檢測(cè)其自激活活性,發(fā)現(xiàn)Hb ICE1基因的自轉(zhuǎn)錄激活在含有30 mmol/L和更高濃度3-AT(3-氨基-1,2,4-三氮唑)的培養(yǎng)基上能得到有效抑制;進(jìn)一步通過(guò)與橡膠樹(shù)c DNA文庫(kù)進(jìn)行酵母雙雜交,篩選出一些可能與Hb ICE1發(fā)生互作的蛋白,包括DNA結(jié)合蛋白、核糖體蛋白和功能未知蛋白。本研究結(jié)果為橡膠樹(shù)抗寒機(jī)理研究提供了重要理論依據(jù)。
【作者單位】： 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 巴西橡膠樹(shù) HbICE 酵母雙雜 蛋白互作 冷耐受
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31560197) 海南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(20153092) 海南省教育廳項(xiàng)目(Hnky2015-4) 海南大學(xué)科研啟動(dòng)基金資助(kyqd1437)~~
【分類號(hào)】：S794.1
【正文快照】： This work was supported by grants from the National Natural Science Foundation of China(31560197),Natural Science Founda-tion of Hainan Province(20153092),Education Department Foundation of Hainan Province(Hnky2015-4),and Scientific Re-search Starting Fo

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