本文關鍵詞：靶向人CD106基因RNAi慢病毒載體的構建與鑒定

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【摘要】：目的:構建人CD106基因RNAi慢病毒載體。方法:設計4條靶向CD106的RNA干擾靶點序列(Target 1、2、3、4),合成短發(fā)卡結構shRNA并退火成雙鏈DNA,與慢病毒載體重組形成siRNA表達載體,利用PCR和測序鑒定驗證獲得連接正確的克隆。經(jīng)由293T細胞包裝siRNA慢病毒顆粒,隨后將其感染人口腔鱗癌HN12細胞,分別采用Real-time PCR和Western blot方法檢測靶基因在mRNA和蛋白質水平的沉默效率。結果:構建的慢病毒載體的PCR鑒定和測序正確,包裝病毒后滴度至少達到1×109TU/ml。siRNA慢病毒感染人HN12細胞,經(jīng)Real-time PCR和Western blot檢測目的基因CD106的mRNA和蛋白表達較陰性對照載體慢病毒感染組明顯下降。結論:成功構建了人靶向CD106RNAi慢病毒載體,并能夠在細胞水平上有效沉默靶基因。
【作者單位】： 濱州醫(yī)學院附屬醫(yī)院口腔外科;濱州醫(yī)學院附屬醫(yī)院內鏡中心;青島市東南口腔診所;
【關鍵詞】： CD RNA干擾 慢病毒載體
【基金】：山東省自然科學基金(編號:ZR2013HL008) 山東省教育廳科技計劃項目(編號:J12LK08)
【分類號】：R739.8
【正文快照】： CD106(血管細胞黏附分子-1,vascular cell ad-hesion molecule-1,VCAM-1)是一種重要的細胞黏附分子[1]。既往研究認為:它主要分布在血管內皮細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞表面,關于其作用的研究主要集中在免疫炎性反應[2],例如動脈粥樣硬化[3]等,在惡性腫瘤的研究中尚不多見。Di

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