本文關(guān)鍵詞：靶向人CD106基因RNAi慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定

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【摘要】：目的:構(gòu)建人CD106基因RNAi慢病毒載體。方法:設(shè)計(jì)4條靶向CD106的RNA干擾靶點(diǎn)序列(Target 1、2、3、4),合成短發(fā)卡結(jié)構(gòu)shRNA并退火成雙鏈DNA,與慢病毒載體重組形成siRNA表達(dá)載體,利用PCR和測(cè)序鑒定驗(yàn)證獲得連接正確的克隆。經(jīng)由293T細(xì)胞包裝siRNA慢病毒顆粒,隨后將其感染人口腔鱗癌HN12細(xì)胞,分別采用Real-time PCR和Western blot方法檢測(cè)靶基因在mRNA和蛋白質(zhì)水平的沉默效率。結(jié)果:構(gòu)建的慢病毒載體的PCR鑒定和測(cè)序正確,包裝病毒后滴度至少達(dá)到1×109TU/ml。siRNA慢病毒感染人HN12細(xì)胞,經(jīng)Real-time PCR和Western blot檢測(cè)目的基因CD106的mRNA和蛋白表達(dá)較陰性對(duì)照載體慢病毒感染組明顯下降。結(jié)論:成功構(gòu)建了人靶向CD106RNAi慢病毒載體,并能夠在細(xì)胞水平上有效沉默靶基因。
【作者單位】： 濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院口腔外科;濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)鏡中心;青島市東南口腔診所;
【關(guān)鍵詞】： CD RNA干擾 慢病毒載體
【基金】：山東省自然科學(xué)基金(編號(hào):ZR2013HL008) 山東省教育廳科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):J12LK08)
【分類號(hào)】：R739.8
【正文快照】： CD106(血管細(xì)胞黏附分子-1,vascular cell ad-hesion molecule-1,VCAM-1)是一種重要的細(xì)胞黏附分子[1]。既往研究認(rèn)為:它主要分布在血管內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞表面,關(guān)于其作用的研究主要集中在免疫炎性反應(yīng)[2],例如動(dòng)脈粥樣硬化[3]等,在惡性腫瘤的研究中尚不多見(jiàn)。Di

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