本文關(guān)鍵詞：microRNA-216a及其靶基因JAK2、CSK在胰腺癌中的表達(dá)及臨床意義

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【摘要】：背景與目的胰腺癌是一種侵襲性極高的消化道腫瘤,其發(fā)病隱匿,診斷明確時(shí)往往已處于中晚期,并且治愈率極低,5年生存率僅有1-4%,預(yù)后差[1]。目前尚未發(fā)現(xiàn)一種能夠準(zhǔn)確判斷胰腺癌的標(biāo)志物。因胰腺癌惡性程度極高,且臨床的診治手段目前效果均不佳,我們迫切需要發(fā)展診治該腫瘤的新方法。隨著分子生物學(xué)理論及技術(shù)的發(fā)展,在此領(lǐng)域內(nèi)探討胰腺癌的發(fā)病機(jī)理和探求新的診斷和治療手段成為最近期間的熱點(diǎn)。有最新研究表明胰腺癌的病程演化至少經(jīng)歷了20余年[2],如果能早于臨床影像學(xué)提早診斷出胰腺癌,在早期就對(duì)其發(fā)展進(jìn)行干預(yù),將有可能從根本上使胰腺癌的治療和預(yù)后得到一定程度的改觀。目前據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[3],許多種腫瘤標(biāo)志物將被用于胰腺癌的診斷,但其特異性和敏感性都不太理想,尤其對(duì)于早期診斷意義較小。專家們對(duì)胰腺癌的研究,主要集中于在胰腺癌早期發(fā)病時(shí)發(fā)生變化的特殊的標(biāo)志物方面及對(duì)分子生物學(xué)的研究方面。對(duì)于基因芯片技術(shù),研究者可以進(jìn)行多基因聯(lián)合檢測(cè),可以提供新的方向在基因的診斷上;也可以快捷、高效地分析基因在胰腺癌標(biāo)本中表達(dá)所具有的潛在價(jià)值,從而使它們?cè)谠\斷疾病、判斷預(yù)后以及制定治療方案方面的應(yīng)用價(jià)值得到確定[4]。隨著國(guó)內(nèi)外研究人員對(duì)惡性腫瘤越來越多的了解,發(fā)現(xiàn)miRNA(微小RNA)就是一種小分子,它與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。最近幾年來,研究人員越來越重視對(duì)非編碼RNA的研究,發(fā)現(xiàn)miRNA是一種很重要的非編碼RNA;miRNAs由大小約21-23個(gè)堿基的單鏈小分子組成,是由Dicer酶加工單鏈RNA而成,而此單鏈RNA是由具有大約70個(gè)-90個(gè)堿基大小發(fā)夾結(jié)構(gòu)組成[5-6]。Lin-4和let-7是最早發(fā)現(xiàn)的miRNA,最早發(fā)現(xiàn)于線蟲中,隨后在果蠅、植物、人類等多種生物中也逐漸發(fā)現(xiàn)和鑒別出數(shù)百種miRNA。在研究過程中,專家們發(fā)現(xiàn)miRNA與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的聯(lián)系,大量研究表明[7],micro RNA調(diào)節(jié)靶基因的方式是抑制或降解靶基因miRNA的翻譯來完成的;參與調(diào)節(jié)很多種生物學(xué)信號(hào)通路。miRNA參與到生命活動(dòng)的各個(gè)環(huán)節(jié),從細(xì)胞的生成到蛋白質(zhì)的合成、能量的代謝,以及我們?nèi)梭w神經(jīng)的傳遞等。因此尋求一種敏感性和特異性均相對(duì)較高的標(biāo)志物將對(duì)胰腺癌的早期診斷和預(yù)后的判斷產(chǎn)生重大意義。對(duì)miRNA進(jìn)行深入的研究,有助于我們對(duì)癌癥的提前的診斷,并且在疾病發(fā)現(xiàn)后進(jìn)行積極有效的治療上有很大的幫助。有研究發(fā)現(xiàn)[8-10]miR216a在胃癌、乳腺癌、前列腺癌等發(fā)病中起著重要的作用,而在胰腺癌中研究較少。有研究提示miR216a在胰腺癌中屬于抑癌基因,本研究主要針對(duì)胰腺癌組織及癌旁組織,驗(yàn)證micro RNA-216a及其靶基因JAK2、CSK在胰腺癌中的作用機(jī)制及臨床意義。目的通過檢測(cè)胰腺癌、癌旁正常石蠟包埋組織中miR216a的表達(dá),檢測(cè)miR216a的作用靶基因JAK2、CSK的蛋白表達(dá)水平,探討miR216a及JAK2、CSK蛋白表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系,及其相關(guān)性。方法收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2011年3月至2014年11月間因胰腺癌行手術(shù)切除的石蠟包埋組織45例,并收集癌旁正常組織45例作為對(duì)照。按照3um厚度切片3um,HE染色,病理組織學(xué)診斷均為胰腺導(dǎo)管腺癌,所有病例術(shù)前均未接受放、化療。應(yīng)用鎖定核酸原位雜交法測(cè)定64例胰腺癌及其配對(duì)的癌旁正常組織中miR216a的表達(dá)情況,免疫組織化學(xué)法檢測(cè)JAK2、CSK蛋白的表達(dá)情況,并分析三者之間的相關(guān)性,及其各自與胰腺癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系。采用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,miR216a、JAK2、CSK三者之間的關(guān)系應(yīng)用Spearman相關(guān)分析法,檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05,P0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.鎖定核酸原位雜交法顯示miR216a陽性染色呈藍(lán)色,定位于細(xì)胞漿或細(xì)胞核,在胰腺癌組織中多為弱陽性(附圖ABC);miR216a在胰腺癌組織中的陽性表達(dá)率為37.8%(17/45),在癌旁正常組織的陽性表達(dá)率為71.1%(32/45),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c2=10.080,P0.05);免疫組化法顯示JAK2蛋白染色均定位于胞漿,陽性染色為呈棕黃色或棕褐色(附圖DEF),JAK2蛋白在胰腺癌組織、癌旁正常組織中蛋白的陽性表達(dá)率分別為60%(27/45)、35.6%(16/45)),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c2=5.388,P0.05);免疫組織化學(xué)法染色顯示CSK蛋白染色均定位于胞漿,陽性染色為呈棕黃色或棕褐色(附圖GHI),在胰腺癌組織中及癌旁正常組織中的陽性表達(dá)率分別為17.8%(8/45)、73.3%(33/45),差異仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c2=27.999,P0.05)。miR216a的表達(dá)水平與胰腺癌的TNM分期有關(guān),而與患者性別、年齡、腫瘤分化的程度,局部淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處的轉(zhuǎn)移無關(guān)(P0.05);JAK2蛋白、CSK蛋白的表達(dá)均和胰腺癌的分化程度有關(guān)系,而與患者年齡、性別、TNM分期,局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)(P0.05)。2.miR216a在胰腺癌TNM I-II期、TNM III-IV期的陽性表達(dá)率為34.8%(8/23),9.1%(2/22),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);miR216a的表達(dá)與患者的性別、年齡、分化程度、門靜脈或腹腔神經(jīng)侵犯、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。JAK2在高、中、低分化胰腺癌細(xì)胞中的陽性表達(dá)率分別為20%(1/5)、68.9%(20/29)、81.8%(9/11);CSK在高、中、低分化胰腺癌細(xì)胞中的陽性表達(dá)率分別為80%(4/5)、20.7%(6/29)、27.2%(3/11),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。JAK2、CSK與胰腺癌患者的性別、年齡、TNM分期、門靜脈或腹腔神經(jīng)侵犯、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。(表2)3.spearman相關(guān)性分析顯示,miR216a在胰腺癌組織中的表達(dá)水平與JAK2呈負(fù)相關(guān)(r=-0.436,P0.05),miR216a在胰腺癌組織中的表達(dá)水平與CSK呈正相關(guān)(r=0.223,P0.05),JAK2與CSK在胰腺癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.443,P0.05)。結(jié)論1.miR216a在胰腺癌組織中表達(dá)下調(diào),JAK2在胰腺癌組織中表達(dá)上調(diào),CSK在胰腺癌組織中表達(dá)下調(diào),miR216a可能通過靶向調(diào)節(jié)JAK2、CSK的表達(dá),對(duì)胰腺癌的發(fā)病起到一定的抑制作用。2.miR216a與胰腺癌TNM分期相關(guān),胰腺癌的TNM分期越高,miR216a表達(dá)越低;JAK2與胰腺癌的分化程度存在一定的關(guān)系,JAK2蛋白表達(dá)水平越高,胰腺癌的分化程度越低,胰腺癌的惡性程度越高;CSK蛋白與胰腺癌的分化程度有關(guān)系,CSK蛋白表達(dá)越低,胰腺癌的分化程度越低,胰腺癌的惡性程度越高。3.miR216a的表達(dá)與JAK2蛋白呈負(fù)相關(guān),而與CSK蛋白表達(dá)呈正相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：胰腺癌 miR216a JAK2 CSK 鎖定核酸原位雜交 免疫組織化學(xué)
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.9
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-14
• 中英文略縮詞對(duì)照表14-15
• 前言15-18
• 材料和方法18-26
• 結(jié)果26-29
• 討論29-35
• 結(jié)論35-36
• 附圖36-37
• 參考文獻(xiàn)37-43
• 綜述 胰腺癌相關(guān)基因的研究進(jìn)展43-60
• 參考文獻(xiàn)55-60
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷及在校期間發(fā)表的論文60-61
• 致謝61-62

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本文編號(hào)：960021