發(fā)布時間：2017-10-02 12:33

  本文關(guān)鍵詞：黃梁木蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因克隆及其表達模式分析

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【摘要】：黃梁木(Neolamarckia cadamba),又稱團花樹,茜草科團花屬樹種,在食用、藥用以及工業(yè)用途等眾多方面都發(fā)揮著不容小覷的作用,是一種重要的速生經(jīng)濟樹種。而蔗糖為根部、生殖結(jié)構(gòu)、儲存和發(fā)育器官等的異養(yǎng)細胞提供大量的營養(yǎng)物質(zhì),為了確保這些異樣的庫組織的生長和發(fā)育接收到足夠量的蔗糖,蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白在整個植物中對蔗糖的膜運輸及分布起到關(guān)鍵作用。因此,對黃梁木的蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因的研究,有助于進一步了解蔗糖在黃梁木中轉(zhuǎn)運機制和作用機理以便充分加以利用。本文通過對轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的比對設(shè)計引物從黃梁木中克隆得到三個蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因的全長cDNA,分別命名為NcSUT2、NcSUT3和NcSUT4。這三個基因分別編碼522、623、505個氨基酸;對它們進行生物信息學分析表明,這三個基因編碼的蛋白質(zhì)均屬于疏水性蛋白,且均具有蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白典型的十二個跨膜結(jié)構(gòu)域。NcSUT2-GFP、NcSUT3-GFP和NcSUT4-GFP融合蛋白在擬南芥和黃梁木原生質(zhì)體的瞬時表達定位顯示,NcSUT2定位在質(zhì)膜上,NcSUT3可能定位在質(zhì)膜或葉綠體上,NcSUT4定位在葉綠體上。熒光定量分析發(fā)現(xiàn),NcSUT2、NcSUT3、NcSUT4在韌皮部、嫩葉、根部、樹皮上均有表達,但表達量存在明顯差異,且隨著生長季的不同而有所變化,同時在不同樹齡之間也會存在表達差異。
【關(guān)鍵詞】：黃梁木 蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白 基因克隆 表達模式
【學位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S792.99
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 1.前言8-20
• 1.1 黃梁木概述8-9
• 1.2 蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白概述9-16
• 1.2.1 植物蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白的存在10-11
• 1.2.2 植物蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白的分類11-12
• 1.2.3 植物蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白的亞細胞定位12-13
• 1.2.4 植物蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白的表達調(diào)控13-16
• 1.2.5 植物蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白的功能16
• 1.3 基因克隆的方法16-18
• 1.3.1 功能克隆16-17
• 1.3.2 轉(zhuǎn)座子標簽法17
• 1.3.3 圖位克隆法17
• 1.3.4 差異表達分析法17
• 1.3.5 同源克隆法17-18
• 1.4 基因表達定量分析方法概述18-19
• 1.4.1 RNA印跡18
• 1.4.2 核糖核酸酶保護分析18
• 1.4.3 蛋白質(zhì)印跡18
• 1.4.4 實時熒光定量PCR18-19
• 1.5 研究目的意義及主要內(nèi)容19-20
• 1.5.1 研究目的意義19
• 1.5.2 主要內(nèi)容19-20
• 2.材料與方法20-37
• 2.1 材料20-22
• 2.1.1 植物材料20
• 2.1.2 菌株和質(zhì)粒20
• 2.1.3 主要試劑及試劑盒20
• 2.1.4 主要儀器及設(shè)備20
• 2.1.5 主要試劑及材料配方20-22
• 2.2 方法22-37
• 2.2.1 黃梁木蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因NcSUTs的克隆22-27
• 2.2.2 黃梁木NcSUTs生物信息學分析27-28
• 2.2.3 黃梁木NcSUTs-GFP原生質(zhì)體瞬時表達的定位觀察28-33
• 2.2.4 黃梁木NcSUTs gDNA全長擴增33-36
• 2.2.5 黃梁木NcSUTs表達量分析36-37
• 3.結(jié)果與分析37-54
• 3.1 黃梁木RNA提取37-38
• 3.2 黃梁木NcSUTs核苷酸序列的同源克隆38-44
• 3.3 黃梁木NcSUTs生物信息學分析44-47
• 3.3.1 蛋白理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)預(yù)測分析44-46
• 3.3.2 蛋白亞細胞定位分析46-47
• 3.4 黃梁木NcSUTs-GFP原生質(zhì)體瞬時表達的定位分析47-51
• 3.5 黃梁木NcSUTs基因表達量分析51-54
• 3.5.1 黃梁木同一器官不同基因的表達量分析51-52
• 3.5.2 黃梁木同一基因在不同器官的表達量分析52-53
• 3.5.3 黃梁木韌皮部不同樹齡NcSUTs表達量分析53-54
• 4.結(jié)論與討論54-58
• 4.1 結(jié)論54-55
• 4.2 討論55-58
• 4.2.1 黃梁木NcSUTs基因克隆及同源比對分析55
• 4.2.2 黃梁木NcSUTs亞細胞定位55-56
• 4.2.3 黃梁木NcSUTs基因的表達分析56-58
• 致謝58-60
• 參考文獻60-63
• 附錄63-66

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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本文編號：959672