本文關(guān)鍵詞：花生iso-ARah3基因克隆及多克隆抗體制備

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【摘要】：類花生致敏原3(iso-ARah3)是花生致敏原3的同系物,其表達活性與干旱及黃曲霉侵染相關(guān)。本研究通過RT-PCR技術(shù)從花生種子cDNA文庫中克隆獲得iso-ARah3的開放閱讀框(ORF),全長1533bp,編碼510個氨基酸,N端預(yù)測有20個氨基酸的信號肽序列。通過序列比對發(fā)現(xiàn),該克隆序列有1處缺失突變,其N端210個氨基酸序列與胰蛋白酶抑制因子的同源性較高,達83.60%。通過構(gòu)建原核表達載體pET28a-isoARah3,轉(zhuǎn)化進大腸桿菌BL21,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達,利用SDS-PAGE檢測表明,融合蛋白His-isoARah3獲得高效表達,分子量約54kD。His-isoARah3經(jīng)純化和富集,對新西蘭兔進行4次免疫,純化獲得的iso-ARah3多克隆抗血清,通過間接ELISA檢測,表明獲得了效價比(1∶512000)很好的抗體。通過對融合蛋白的誘導(dǎo)前和純化后樣品進行Western Blot分析,結(jié)果顯示僅在純化樣品相應(yīng)位置(54kD)有明顯信號,表明所制備的抗體具有很高靈敏度和特異性。本研究結(jié)果為深入研究花生iso-ARah3基因的功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 山東省花生研究所;哈爾濱工業(yè)大學(xué)市政環(huán)境工程學(xué)院;青島科技大學(xué)化工學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 花生 黃曲霉毒素 序列分析 原核表達 多克隆抗體
【基金】：2014年國家“萬人計劃”青年拔尖人才 國家花生產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項目(CARS-14) 山東省自然科學(xué)基金項目(ZR2014YL011;ZR2014YL012) 國家自然科學(xué)基金項目(31200211) 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院青年科研基金項目(2016YQN14)
【分類號】：S565.2
【正文快照】： 黃曲霉毒素是由真菌類的黃曲霉和寄生曲霉代謝產(chǎn)生的一類真菌毒素,普遍存在于土壤、作物種子及其各種制品中,花生是受黃曲霉侵染和危害最嚴(yán)重的作物之一,已成為全球花生產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要限制因素之一[1-3]。目前,國內(nèi)外學(xué)者普遍認(rèn)為解決花生黃曲霉毒素污染問題經(jīng)濟有效的可行途

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本文編號：943501