本文關鍵詞：表達人CD47基因的巴馬小型豬創(chuàng)建及其表達分析

  更多相關文章： 整合素相關蛋白(CD) 異種移植 巨噬細胞 表達特征 巴馬小型豬

【摘要】：異種器官移植是解決供體器官短缺的有效途徑之一,豬(Sus scrofa)是人類(Homo sapiens)異種器官移植的理想供體。然而,異種移植物進入受體后將被受體巨噬細胞清除,其主要原因是巨噬細胞表面的受體-信號調節(jié)蛋白α(singal regulatory proteinα,SIRPα)不能特異地識別異種細胞表面的整合素相關蛋白(integrin associated protein,IAP又稱CD47),導致移植物細胞被受體內的巨噬細胞吞噬并清除。本研究在敲除α-1,3-半乳糖基轉移酶基因(α-1,3-galactosyltransferase knockout,GTKO)的巴馬小型豬基礎上,轉入h CD47基因,制備表達h CD47基因的GTKO/h CD47巴馬小型豬,可避免超急性排斥反應并減弱受體巨噬細胞對移植物細胞的吞噬。首先構建巨細胞病毒增強子和雞β肌動蛋白啟動子(cytomegalovirus early enhancer/chickenβ-actin promoter,CAG)調控的h CD47基因表達載體p CAGGS-h CD47-Neo,轉染GTKO巴馬小型豬的耳成纖維細胞,然后通過體細胞克隆技術制備轉基因克隆豬。利用PCR對克隆仔豬進行轉基因鑒定,通過q RT-PCR、Western blot和免疫組化等方法分析h CD47在轉基因豬的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胰腺等組織的表達。抽取存活仔豬血液進行生理指標檢測,監(jiān)測其健康狀況。通過體細胞克隆技術獲得了13頭轉基因克隆豬,PCR鑒定均為h CD47基因陽性豬。q RT-PCR結果顯示,h CD47基因在各器官中的表達量由高至低依次為胰腺、肝臟、肺臟、脾臟、腎臟和心臟。Western blot及免疫組化結果進一步證實h CD47基因在胰腺、肝臟等中均具有較強表達,與q RT-PCR結果一致。血液生理指標顯示,存活仔豬健康狀況良好。本研究成功制備了表達h CD47基因的GTKO巴馬小型豬,確證了h CD47基因在主要器官中的表達特征,將有助于探究h CD47基因在減弱受體巨噬細胞對異種移植各器官的排斥反應。
【作者單位】： 甘肅農業(yè)大學生命科學技術學院;中國農業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所/農業(yè)部畜禽遺傳資源與種質創(chuàng)新重點實驗室;甘肅農業(yè)大學動物科學技術學院;
【關鍵詞】： 整合素相關蛋白(CD) 異種移植 巨噬細胞 表達特征 巴馬小型豬
【基金】：國家科技重大專項(No.2014ZX0801203B-002) 國家重點基礎研究發(fā)展規(guī)劃(973)項目(No.2015CB554103)
【分類號】：S865.1;R617
【正文快照】：

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前2條

1 潘登科;張莉;周艷榮;馮沖;龍川;劉曉;董恩球;王樹臣;萬榮;張健;陳紅星;;體細胞核移植生產轉ω-3脂肪酸去飽和酶基因sFat-1克隆豬[J];中國科學(C輯:生命科學);2009年03期

2 楊述林;任紅艷;王恒;馮書堂;甘世祥;王愛德;李奎;;中國實驗用小型豬種群血液生理指標分析[J];中國畜牧獸醫(yī);2007年02期

【共引文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

1 李西睿;馮沖;龍川;紀慧麗;魏靜;石寧寧;曾國敏;蔣應弟;潘登科;田興華;;CRISPR/Cas9介導的ASGR1基因敲除豬制備[J];農業(yè)生物技術學報;2016年08期

2 曾國敏;蔣應弟;馮沖;石寧寧;龍川;李西睿;魏靜;紀慧麗;潘登科;劉霞;;表達人CD47基因的巴馬小型豬創(chuàng)建及其表達分析[J];農業(yè)生物技術學報;2016年08期

3 張茂;張冠冠;劉德武;蔡更元;吳珍芳;李紫聰;;轉β-甘露聚糖酶基因克隆豬的制備與分析[J];中國農業(yè)科學;2016年08期

4 丁言偉;周大鵬;史o偪，

本文編號：941294