本文關(guān)鍵詞：牙周膜細(xì)胞內(nèi)miRNA-23a,30a發(fā)揮調(diào)控作用的靶基因篩選

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【摘要】：牙周炎是慢性炎癥導(dǎo)致的骨吸收病變,具有很大的危害性�，F(xiàn)在治療牙周炎的常規(guī)方式為基礎(chǔ)治療,藥物治療以及手術(shù)治療等,但理想的牙周骨組織再生修復(fù)效果卻難以達(dá)到。成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞協(xié)同完成維持了骨代謝的平衡。而成骨相關(guān)細(xì)胞在炎性環(huán)境下生成受抑,基質(zhì)分泌礦化受阻則是造成牙周炎性骨代謝失衡的關(guān)鍵原因。細(xì)胞成骨分化可由多種炎癥因子通過不同的信號通路調(diào)控,這一點(diǎn)已由大量研究證實(shí)。miRNA在這類炎癥因子中占有重要的一部分。miRNA的發(fā)現(xiàn)使人們將注意力將人們將注意力放到轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)節(jié)上。miRNAs是一類非編RNA,長度約22nt,進(jìn)化上高度保守,參與轉(zhuǎn)錄后水平的基因調(diào)控,緊密參與了生理過程中和某些疾病產(chǎn)生進(jìn)程內(nèi)的調(diào)節(jié)與控制。相關(guān)研究認(rèn)為,牙周炎的發(fā)生與某些miRNAs表達(dá)改變有關(guān)。到現(xiàn)在為止,國內(nèi)外學(xué)者研究了一群特定的miRNAs,但是對共同調(diào)節(jié)著牙周炎和骨分化的分子:miR-23a和miR-30a以及它們對牙周炎性骨缺失發(fā)生機(jī)制的研究相對較少。同時(shí),基因芯片分析技術(shù)發(fā)展起來,此技術(shù)是基于過表達(dá)或沉默miRNA后,通過檢測基因表達(dá)水平變化來篩選判斷miRNA靶基因。基于以上研究背景,本實(shí)驗(yàn)即通過計(jì)算機(jī)生物信息學(xué)軟件miRanda,Target Scan和Pic Tar預(yù)測miR-23a和miR-30a可能的靶基因,繼而體外干預(yù)炎癥牙周膜細(xì)胞內(nèi)miR-23a和miR-30a的表達(dá)水平,檢測已經(jīng)預(yù)測到的可能靶基因的表達(dá)情況,從而篩選出在牙周膜細(xì)胞中,miR-23a和miR-30a發(fā)揮調(diào)控作用的靶基因。研究目的(1)確定候選靶基因。(2)從候選靶基因中篩選鑒定出miR-23a的靶基因并驗(yàn)證。(3)從候選靶基因中篩選鑒定出miR-30a的靶基因并驗(yàn)證。研究方法(1)miRanda[53](http://www.microma.org),Target Scan[54](http://www.targetscan.org)和Pic Tar[55](http://pictar.bio.nyu.edu/)三個(gè)數(shù)據(jù)庫對miRN As的靶基因進(jìn)行生物預(yù)測,取三個(gè)軟件預(yù)測的靶基因的交集,確定分值較高的作為候選靶基因。(2)通過體外轉(zhuǎn)染miR-23a的mimics和inhibitor,實(shí)現(xiàn)miR-23a的過表達(dá)和低表達(dá)。用Real-time PCR以及Western-Blot(免疫印跡法)檢測相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)水平。(3)通過體外轉(zhuǎn)染miR-30a的mimics和inhibitor,實(shí)現(xiàn)miR-30a的過表達(dá)和低表達(dá)。用Real-time PCR以及Western-Blot(免疫印跡法)檢測相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)最終圈定CAMTA1,CNTTBIP,PPPAR,Runx2,STAT1,SATB1以及STAT5B為miR-23a和miR-30a的候選靶基因。(2)升高miR-23a的表達(dá)之后,Real-time PCR以及Western-Blot檢測相關(guān)基因STAT5B及蛋白的表達(dá)下降,相反,抑制miR-23a的表達(dá)后,Real-time PCR以及Western-Blot檢測基因STAT5B及蛋白的表達(dá)上升。由此可確定STAT5B為miR-23a的靶基因,其他候選靶基因結(jié)果為陰性,被排除。(3)升高miR-30a的表達(dá)之后,Real-time PCR以及Western-Blot檢測相關(guān)基因Runx2及蛋白的表達(dá)下降,相反,抑制miR-30a的表達(dá)后,Real-time PCR以及Western-Blot檢測基因Runx2及蛋白的表達(dá)上升。由此可確定Runx2為miR-30a的靶基因,其他候選靶基因結(jié)果為陰性,被排除。結(jié)論(1)miR-23a和miR-30a參與調(diào)控炎性微環(huán)境下牙周膜細(xì)胞的生物學(xué)活性。(2)升高miR-23a和miR-30a的表達(dá)可抑制牙周膜細(xì)胞成骨作用。
【關(guān)鍵詞】：靶基因 miRNA 炎癥
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R781.4
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-12
• 文獻(xiàn)回顧12-30
• 實(shí)驗(yàn)一 生物信息學(xué)軟件預(yù)測miR-23a和miR-30a可能靶基因30-35
• 1 材料30
• 2 方法30-31
• 3 結(jié)果31-32
• 4 討論32-35
• 實(shí)驗(yàn)二 mRNA水平牙周膜細(xì)胞中miR-23a和miR-30a靶基因的篩選35-48
• 1 材料35-36
• 2 方法36-41
• 3 結(jié)果41-45
• 4 討論45-48
• 實(shí)驗(yàn)三 蛋白水平牙周膜細(xì)胞中miR-23a和miR-30a靶基因的驗(yàn)證48-54
• 1 材料48-49
• 2 方法49-52
• 3 結(jié)果52
• 4 討論52-54
• 小結(jié)54-56
• 參考文獻(xiàn)56-62
• 個(gè)人簡歷和研究成果62-63
• 致謝63

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 毛釗;影響牙周膜細(xì)胞生物學(xué)功能的相關(guān)因素[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2003年06期

2 凌均h，

本文編號：935886