本文關(guān)鍵詞：短日照處理菊花成花過程中DNA甲基化及相關(guān)基因表達(dá)分析

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【摘要】：本研究分別對菊花品種“荷花仙子”、“秋水長流”以及“南農(nóng)紅袖”進(jìn)行短日照處理,觀察記錄植株高度及開花時間,利用甲基化敏感擴(kuò)增多態(tài)性(MSAP)和高效液相色譜(HPLC)技術(shù)對其成花過程中DNA甲基化水平進(jìn)行檢測,分析短日照處理下菊花成花過程中DNA甲基化的動態(tài)變化,以揭示短日照處理下DNA甲基化與菊花成花的相關(guān)性;利用實時熒光定量PCR技術(shù)對“南農(nóng)紅袖”成花過程中開花基因FT以及DNA甲基化去甲基化相關(guān)基因的表達(dá)量進(jìn)行分析,從而嘗試揭示菊花成花過程中DNA甲基化變化的作用機(jī)制。取得的研究結(jié)果如下:(1)短日照對菊花株高的影響:短日照處理43 d后,兩個品種的處理組株高均顯著低于對照組,在短日照處理28 d時,晚花品種處理組株高與對照差異不明顯,說明早花品種對短日照的處理更加敏感,進(jìn)入生殖生長所需要的短日照誘導(dǎo)的時間較短,而晚花品種所需要的短日照誘導(dǎo)時間較長。(2)短日照對菊花成花的影響:短日照處理后,早花品種花蕾出現(xiàn)時間、初花時間及花蕾發(fā)育時間與對照相比顯著提前。晚花品種花蕾出現(xiàn)時間和初花時間與對照相比顯著提前,花蕾發(fā)育時間區(qū)別不大。(3)短日照處理菊花成花過程中DNA甲基化變化趨勢:MSAP和HPLC結(jié)果表明,菊花在成花過程中DNA甲基化處于動態(tài)變化中,早花品種在開花前DNA甲基化比率主要集中在42.2%-51.3%之間,開花后DNA甲基化比率主要集中在30.5%-44.5%之間。晚花品種在開花前DNA甲基化比率主要集中在43.5%-56.0%之間,開花后DNA甲基化比率主要集中在37.2%-44.9%之間,兩個品種在開花前后DNA甲基化都顯著降低。(4)短日照處理菊花初花期時DNA甲基化變化:同時期短日照處理組與對照相比DNA甲基化顯著降低,但早花品種的下降幅度要大于晚花品種。(5)短日照處理菊花生長過程中FT基因表達(dá)分析:進(jìn)入現(xiàn)蕾期后CmFT表達(dá)量明顯升高,且現(xiàn)蕾期以及初花期短日照處理組明顯高于對照組。(6)短日照處理菊花成花過程中DNA甲基化及去甲基化相關(guān)基因表達(dá)分析:CmMET1和CmCMT3表達(dá)量在菊花成花過程中呈現(xiàn)下降趨勢,短日照處理組同時期與對照相比降低幅度更大;CmDRM2的表達(dá)量在菊花成花過程中呈現(xiàn)上升趨勢,在前三時期對照組表達(dá)量低于短日照處理組;去甲基化基因CmDME的表達(dá)量在前三個時期表達(dá)量變化不大,盛花期時表達(dá)升高。
【關(guān)鍵詞】：短日照 菊花 成花 DNA甲基化 基因表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：Q943.2;S682.11
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 縮寫詞10-11
• 1 緒論11-19
• 1.1 研究背景11
• 1.2 植物成花研究11-12
• 1.3 光周期途徑調(diào)控植物開花研究12-14
• 1.4 DNA甲基化研究14-15
• 1.5 DNA甲基化與花期調(diào)控15-16
• 1.6 DNA甲基化相關(guān)基因研究16-17
• 1.7 研究的目的、意義以及主要內(nèi)容17-19
• 2 短日照處理菊花成花過程中DNA甲基化變化19-39
• 2.1 材料和方法19-20
• 2.1.1 實驗材料19
• 2.1.2 實驗藥品、試劑及配制方法19-20
• 2.2 實驗方法20-26
• 2.2.1 成花進(jìn)程統(tǒng)計方法20-21
• 2.2.2 MSAP實驗流程21-26
• 2.3 HPLC實驗流程26
• 2.4 數(shù)據(jù)分析方法26
• 2.5 結(jié)果與分析26-36
• 2.5.1 短日照對菊花株高的影響26-27
• 2.5.2 短日照對菊花成花的影響27-28
• 2.5.3 短日照處理下菊花成花過程中DNA甲基化的變化28-36
• 2.6 小結(jié)與討論36-39
• 3 相關(guān)基因表達(dá)分析39-51
• 3.1 實驗材料39
• 3.2 實驗藥品、試劑及試劑的配制39-40
• 3.2.1 實驗藥品、試劑39
• 3.2.2 試劑配制39-40
• 3.3 實驗方法40-45
• 3.3.1 RNA的提取40-41
• 3.3.2 cDNA第一條鏈反轉(zhuǎn)錄41
• 3.3.3 DNA甲基化相關(guān)基因部分序列的獲得41-42
• 3.3.4 目的片段的回收42-43
• 3.3.5 目的片段與T載體連接43
• 3.3.6 熱擊法轉(zhuǎn)化大腸桿菌43-44
• 3.3.7 熒光定量實驗流程44-45
• 3.4 結(jié)果與分析45-49
• 3.4.1 DNA甲基化相關(guān)基因部分序列克隆45-46
• 3.4.2 短日照處理菊花生長過程中開花基因表達(dá)分析46
• 3.4.3 短日照處理菊花生長過程中甲基化相關(guān)基因表達(dá)分析46-48
• 3.4.4 短日照處理菊花生長過程中去甲基化基因CmDRM表達(dá)分析48-49
• 3.5 小結(jié)與討論49-51
• 4 結(jié)論51-53
• 參考文獻(xiàn)53-63
• 致謝63-64

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