本文關(guān)鍵詞：牛TDGF1基因?qū)Τ杉〖?xì)胞增殖作用的分子機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 牛 基因表達(dá)畸胎瘤衍化生長(zhǎng)因子 信號(hào)通路 肌肉生成抑制素 成肌細(xì)胞

【摘要】：在畜牧生產(chǎn)中,肉牛的經(jīng)濟(jì)效益與其產(chǎn)肉量密切相關(guān),研究肉牛肌肉發(fā)育相關(guān)基因功能以及調(diào)控機(jī)理,有望提高產(chǎn)肉量�；チ鲅芑L(zhǎng)因子(teratocarcinoma-derived growth factor-1,TDGF1),是一個(gè)調(diào)控細(xì)胞存活、增殖、分化和遷移的小分子糖基磷脂酰肌醇(GPI)結(jié)合蛋白。TDGF1作為輔因子參與TGF-β超家族成員多個(gè)細(xì)胞信號(hào)通路的傳遞,并參與調(diào)控多條控制細(xì)胞增殖和凋亡的信號(hào)通路。以往有關(guān)TDGF1的報(bào)道集中于腫瘤或胚胎發(fā)育,最近研究發(fā)現(xiàn),其參與骨骼肌發(fā)育調(diào)控。有文獻(xiàn)報(bào)道小鼠TDGF1可抑制MSTN信號(hào)并促進(jìn)骨骼肌的發(fā)育,但牛TDGF1基因?qū)∪獍l(fā)育的影響尚不清楚。為研究牛TDGF1基因?qū)Τ杉〖?xì)胞的增殖作用,本試驗(yàn)構(gòu)建了TDGF1真核表達(dá)載體,并在C2C12細(xì)胞中過(guò)表達(dá),研究其對(duì)細(xì)胞增殖的影響以及對(duì)MSTN的調(diào)控作用,通過(guò)MSTN信號(hào)通路調(diào)控成肌細(xì)胞的增殖。為明確牛TDGF1基因?qū)趋兰〉纳飳W(xué)作用及其機(jī)制提供參考。為明確牛TDGF1對(duì)成肌細(xì)胞增殖的影響。利用定向克隆和細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)獲得可穩(wěn)定過(guò)表達(dá)牛TDGF1基因的C2C12細(xì)胞系,Western Blotting(WB)和熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)TDGF1在C2C12細(xì)胞系的表達(dá)量,Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide(MTT)法檢測(cè)C2C12細(xì)胞增殖。本試驗(yàn)成功構(gòu)建了pIRES2-EGFP-TDGF1真核表達(dá)載體,牛TDGF1基因在C2C12細(xì)胞中表達(dá)量顯著上調(diào),并成功表達(dá)出TDGF1蛋白,過(guò)表達(dá)牛TDGF1基因可抑制成肌細(xì)胞增殖,在30 h時(shí)抑制作用最顯著。為明確TDGF1過(guò)表達(dá)對(duì)MSTN的調(diào)控作用以及對(duì)C2C12細(xì)胞增殖的影響。選取兩個(gè)C2C12細(xì)胞增殖相關(guān)基因MyoD1、Myf5基因,向可穩(wěn)定過(guò)表達(dá)牛TDGF1基因的C2C12細(xì)胞系以及空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染對(duì)照組中添加不同濃度MSTN蛋白,利用MTT法檢測(cè)不同MSTN蛋白濃度、TDGF1調(diào)控MSTN對(duì)C2C12細(xì)胞增殖的影響。添加不同濃度MSTN蛋白,對(duì)C2C12細(xì)胞增殖均有抑制作用,MSTN濃度為10μM抑制作用最強(qiáng)。轉(zhuǎn)染組pIRES2-EGFP-TDGF對(duì)C2C12的抑制作用顯著高于空質(zhì)粒組pIRES2-EGFP。利用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)MyoD1、Myf5基因相對(duì)表達(dá)量,研究TDGF1調(diào)控MSTN后對(duì)C2C12細(xì)胞增殖基因的轉(zhuǎn)錄水平影響,結(jié)果說(shuō)明Myf5基因的表達(dá)主要是由TDGF1直接調(diào)控的,TDGF1介導(dǎo)的MSTN是通過(guò)下調(diào)MyoD1基因的表達(dá)量從而抑制C2C12細(xì)胞增殖作用。Western Blotting檢測(cè)添加TDGF1和不同蛋白濃度,Smad2蛋白在小鼠C2C12細(xì)胞系的表達(dá)情況。本研究結(jié)果表明,TDGF1調(diào)控MSTN并激活其信號(hào)通路,從而啟動(dòng)Smad蛋白磷酸化,導(dǎo)致MyoD1基因表達(dá)量顯著下調(diào)從而抑制C2C12細(xì)胞的增殖作用。
【關(guān)鍵詞】：牛 基因表達(dá)畸胎瘤衍化生長(zhǎng)因子 信號(hào)通路 肌肉生成抑制素 成肌細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S823
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 前言9-10
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述10-18
• 第一章 肌肉發(fā)育研究以及相關(guān)基因的研究進(jìn)展10-12
• 1.1 骨骼肌發(fā)育過(guò)程10
• 1.2 生肌調(diào)節(jié)因子作用研究10-12
• 第二章 MSTN基因的研究進(jìn)展12-14
• 2.1 MSTN基因的特點(diǎn)12
• 2.2 MSTN基因的作用機(jī)制12-13
• 2.3 MSTN基因信號(hào)通路13
• 2.4 MSTN基因的展望13-14
• 第三章 TDGF1基因的研究進(jìn)展14-18
• 3.1 TDGF1調(diào)節(jié)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑14-15
• 3.2 TDGF1與胚胎發(fā)育及腫瘤的關(guān)系15-16
• 3.3 TDGF1與成肌細(xì)胞及MSTN的關(guān)系16-17
• 3.4 展望17-18
• 第二篇 研究?jī)?nèi)容18-38
• 第一章 牛TDGF1基因過(guò)表達(dá)對(duì)成肌細(xì)胞增殖影響的研究18-30
• 1.1 材料18-19
• 1.2 試驗(yàn)方法19-24
• 1.3 結(jié)果24-28
• 1.4 討論28-29
• 1.5 小結(jié)29-30
• 第二章 TDGF1調(diào)控MSTN對(duì)C2C12細(xì)胞增殖的影響30-38
• 2.1 材料30-31
• 2.2 試驗(yàn)方法31-32
• 2.3 結(jié)果與分析32-35
• 2.4 討論35-37
• 2.5 小結(jié)37-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-47
• 作者簡(jiǎn)介47-48
• 致謝48

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本文編號(hào)：926856