發(fā)布時間：2017-09-27 01:21

  本文關鍵詞：牛TDGF1基因?qū)Τ杉〖毎鲋匙饔玫姆肿訖C制研究

  更多相關文章： 牛 基因表達畸胎瘤衍化生長因子 信號通路 肌肉生成抑制素 成肌細胞

【摘要】：在畜牧生產(chǎn)中,肉牛的經(jīng)濟效益與其產(chǎn)肉量密切相關,研究肉牛肌肉發(fā)育相關基因功能以及調(diào)控機理,有望提高產(chǎn)肉量。畸胎瘤衍化生長因子(teratocarcinoma-derived growth factor-1,TDGF1),是一個調(diào)控細胞存活、增殖、分化和遷移的小分子糖基磷脂酰肌醇(GPI)結(jié)合蛋白。TDGF1作為輔因子參與TGF-β超家族成員多個細胞信號通路的傳遞,并參與調(diào)控多條控制細胞增殖和凋亡的信號通路。以往有關TDGF1的報道集中于腫瘤或胚胎發(fā)育,最近研究發(fā)現(xiàn),其參與骨骼肌發(fā)育調(diào)控。有文獻報道小鼠TDGF1可抑制MSTN信號并促進骨骼肌的發(fā)育,但牛TDGF1基因?qū)∪獍l(fā)育的影響尚不清楚。為研究牛TDGF1基因?qū)Τ杉〖毎脑鲋匙饔?本試驗構(gòu)建了TDGF1真核表達載體,并在C2C12細胞中過表達,研究其對細胞增殖的影響以及對MSTN的調(diào)控作用,通過MSTN信號通路調(diào)控成肌細胞的增殖。為明確牛TDGF1基因?qū)趋兰〉纳飳W作用及其機制提供參考。為明確牛TDGF1對成肌細胞增殖的影響。利用定向克隆和細胞轉(zhuǎn)染技術獲得可穩(wěn)定過表達牛TDGF1基因的C2C12細胞系,Western Blotting(WB)和熒光定量PCR技術檢測TDGF1在C2C12細胞系的表達量,Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide(MTT)法檢測C2C12細胞增殖。本試驗成功構(gòu)建了pIRES2-EGFP-TDGF1真核表達載體,牛TDGF1基因在C2C12細胞中表達量顯著上調(diào),并成功表達出TDGF1蛋白,過表達牛TDGF1基因可抑制成肌細胞增殖,在30 h時抑制作用最顯著。為明確TDGF1過表達對MSTN的調(diào)控作用以及對C2C12細胞增殖的影響。選取兩個C2C12細胞增殖相關基因MyoD1、Myf5基因,向可穩(wěn)定過表達牛TDGF1基因的C2C12細胞系以及空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染對照組中添加不同濃度MSTN蛋白,利用MTT法檢測不同MSTN蛋白濃度、TDGF1調(diào)控MSTN對C2C12細胞增殖的影響。添加不同濃度MSTN蛋白,對C2C12細胞增殖均有抑制作用,MSTN濃度為10μM抑制作用最強。轉(zhuǎn)染組pIRES2-EGFP-TDGF對C2C12的抑制作用顯著高于空質(zhì)粒組pIRES2-EGFP。利用熒光定量PCR技術檢測MyoD1、Myf5基因相對表達量,研究TDGF1調(diào)控MSTN后對C2C12細胞增殖基因的轉(zhuǎn)錄水平影響,結(jié)果說明Myf5基因的表達主要是由TDGF1直接調(diào)控的,TDGF1介導的MSTN是通過下調(diào)MyoD1基因的表達量從而抑制C2C12細胞增殖作用。Western Blotting檢測添加TDGF1和不同蛋白濃度,Smad2蛋白在小鼠C2C12細胞系的表達情況。本研究結(jié)果表明,TDGF1調(diào)控MSTN并激活其信號通路,從而啟動Smad蛋白磷酸化,導致MyoD1基因表達量顯著下調(diào)從而抑制C2C12細胞的增殖作用。
【關鍵詞】：牛 基因表達畸胎瘤衍化生長因子 信號通路 肌肉生成抑制素 成肌細胞
【學位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S823
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 前言9-10
• 第一篇 文獻綜述10-18
• 第一章 肌肉發(fā)育研究以及相關基因的研究進展10-12
• 1.1 骨骼肌發(fā)育過程10
• 1.2 生肌調(diào)節(jié)因子作用研究10-12
• 第二章 MSTN基因的研究進展12-14
• 2.1 MSTN基因的特點12
• 2.2 MSTN基因的作用機制12-13
• 2.3 MSTN基因信號通路13
• 2.4 MSTN基因的展望13-14
• 第三章 TDGF1基因的研究進展14-18
• 3.1 TDGF1調(diào)節(jié)的細胞內(nèi)信號傳導途徑14-15
• 3.2 TDGF1與胚胎發(fā)育及腫瘤的關系15-16
• 3.3 TDGF1與成肌細胞及MSTN的關系16-17
• 3.4 展望17-18
• 第二篇 研究內(nèi)容18-38
• 第一章 牛TDGF1基因過表達對成肌細胞增殖影響的研究18-30
• 1.1 材料18-19
• 1.2 試驗方法19-24
• 1.3 結(jié)果24-28
• 1.4 討論28-29
• 1.5 小結(jié)29-30
• 第二章 TDGF1調(diào)控MSTN對C2C12細胞增殖的影響30-38
• 2.1 材料30-31
• 2.2 試驗方法31-32
• 2.3 結(jié)果與分析32-35
• 2.4 討論35-37
• 2.5 小結(jié)37-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻39-47
• 作者簡介47-48
• 致謝48

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