本文關(guān)鍵詞：NF-κB熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)的構(gòu)建及驗(yàn)證

  更多相關(guān)文章： NF-κB 熒光素酶NanoLuc 報(bào)告基因系統(tǒng)

【摘要】：為了定量檢測(cè)NF-κB的活化效果及篩選與NF-κB活化調(diào)控相關(guān)的藥物,通過(guò)去除逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pQCXIP原有的CMV啟動(dòng)子,并分別插入NF-κB增強(qiáng)子序列及熒光素酶NanoLuc報(bào)告基因序列,構(gòu)建了一種新的含有NF-κB增強(qiáng)子序列和NanoLuc(NLuc)報(bào)告基因序列的表達(dá)載體,并進(jìn)一步建立受NF-κB調(diào)控的穩(wěn)定表達(dá)NLuc熒光素酶的細(xì)胞系。酶切鑒定及測(cè)序結(jié)果表明成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pQCXIP-NF-κB-NLuc;NF-κB信號(hào)通路的刺激物腫瘤壞死因子TNF-α作用于構(gòu)建的穩(wěn)定表達(dá)NLuc的細(xì)胞系后出現(xiàn)特異性的熒光素酶反應(yīng),且該酶反應(yīng)與TNF-α的刺激呈良好的時(shí)間、劑量依賴性,該結(jié)果表明受NF-κB調(diào)控的穩(wěn)定表達(dá)NLuc熒光素酶的細(xì)胞系構(gòu)建成功。實(shí)例驗(yàn)證中,NF-κB抑制劑雷公藤甲素對(duì)此細(xì)胞系NLuc熒光素酶表達(dá)的抑制呈劑量效應(yīng)。綜上,本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的受NF-κB調(diào)控的穩(wěn)定表達(dá)NLuc熒光素酶的報(bào)告基因系統(tǒng)可用于NF-κB的活化效果的定量檢測(cè)及篩選與NF-κB活化調(diào)控相關(guān)的藥物,具有研究和應(yīng)用價(jià)值。
【作者單位】： 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院;中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院骨科;
【關(guān)鍵詞】： NF-κB 熒光素酶NanoLuc 報(bào)告基因系統(tǒng)
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(Nos.31170829,81171762,81550017,81473418) 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院自主選題項(xiàng)目(No.zz2015015)資助~~
【分類號(hào)】：Q78
【正文快照】： Received:May 5,2016;Accepted:June 20,2016Supported by:National Natural Science Foundation of China(Nos.31170829,81171762,81550017,81473418),Research Project ofCACMS(No.zz2015015).Corresponding authors:Changzhen Liu.Tel:+86-10-64089526;E-mail:lcz0220@163.

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