本文關(guān)鍵詞：豬TRIM11基因克隆及其促進(jìn)豬偽狂犬病毒在體外增殖的研究

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【摘要】：為初步研究豬TRIM11的免疫學(xué)功能,以豬頜下淋巴結(jié)cDNA為模板擴(kuò)增TRIM11基因cDNA并對該基因進(jìn)行了蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測和組織表達(dá)譜分析,將該基因與PiggyBac載體相連獲得真核表達(dá)載體PB-TRIM11,之后轉(zhuǎn)染PK15細(xì)胞獲得穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系。用豬偽狂犬病毒(PRV)刺激過表達(dá)TRIM11PK15細(xì)胞和對照組細(xì)胞后,于不同時間收獲細(xì)胞上清,比較兩組細(xì)胞上清中病毒滴度變化。結(jié)果表明,豬TRIM11的ORF長度為1 407bp,編碼468個氨基酸,該氨基酸序列含有3個TRIM家族保守的結(jié)構(gòu)域。組織表達(dá)譜分析顯示,豬TRIM11在脂肪組織、肺的表達(dá)量較高,而在心、回腸、十二指腸、直腸中的轉(zhuǎn)錄量較低。成功克隆了豬TRIM11cDNA序列并構(gòu)建了真核轉(zhuǎn)錄載體PB-TRIM11,qRT-PCR檢測結(jié)果表明TRIM11在PK15細(xì)胞系中成功表達(dá)。檢測感染PRV后過表達(dá)TRIM11PK15細(xì)胞和對照組細(xì)胞上清液病毒的TCID50發(fā)現(xiàn)過表達(dá)TRIM11組的病毒滴度始終高于對照組。過表達(dá)TRIM11有一定的促進(jìn)PRV增殖的作用,為進(jìn)一步研究豬TRIM11在天然免疫中的作用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)部動物生化與營養(yǎng)重點開放實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 三基序結(jié)合蛋白 豬偽狂犬病毒 病毒增殖 穩(wěn)定細(xì)胞系
【基金】：國家自然科學(xué)基金(3149600030) 農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因?qū)ｍ?2014ZX0801015B) 河南省基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究計劃項目(142300413209)
【分類號】：S852.4
【正文快照】： 三基序結(jié)合蛋白(TRIM)家族在人上已發(fā)現(xiàn)超過70個家族成員。所有的TRIM蛋白都含有一個由鋅指結(jié)構(gòu)、1或2個B-box、1個卷曲螺旋(RBCC)組成的N端三結(jié)構(gòu)域[1]。TRIM蛋白功能多種多樣,除了參與細(xì)胞增殖、分化、發(fā)育、形態(tài)發(fā)生和細(xì)胞凋亡,也在免疫相關(guān)信號通路和抗病毒免疫反應(yīng)中發(fā)揮

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本文編號：915727