本文關(guān)鍵詞：扁桃脫水素基因AcDHN1的克隆及抗逆功能分析

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【摘要】：扁桃主要種植于新疆南疆地區(qū),周期性的凍害天氣對(duì)扁桃產(chǎn)業(yè)有很大的影響,所以扁桃的抗寒性機(jī)制一直受到較多的關(guān)注。脫水素是一類與胚胎發(fā)育和抗逆相關(guān)的基因,在抗非生物脅迫時(shí)有重大的作用,但目前關(guān)于扁桃脫水素基因的研究未見相關(guān)報(bào)道。本研究從新疆栽培扁桃中克隆獲得了AcDHN1基因,進(jìn)行了序列分析及功能驗(yàn)證,研究結(jié)果如下:1.AcDHN1基因克隆及序列分析:從新疆扁桃‘紙皮’中克隆得到ORF開放閱讀框?yàn)?24 bp的Ac DHN1基因(Gen Bank登錄號(hào):KT949395)。生物信息學(xué)分析顯示,該序列編碼308個(gè)氨基酸,蛋白分子質(zhì)量32.4 kD,信號(hào)肽預(yù)測(cè)結(jié)果顯示其不含信號(hào)肽且沒有跨膜結(jié)構(gòu)域,亞細(xì)胞定位于細(xì)胞核。結(jié)構(gòu)分析表明該序列有兩個(gè)Y片段,四個(gè)K片段,屬于Y2Kn型脫水素基因。氨基酸序列結(jié)果顯示,扁桃AcDHN1與其他脫水素K片段一致性較高,系統(tǒng)進(jìn)化分析表明,扁桃AcDHN1和碧桃聚為一類,與蘋果、白梨親緣關(guān)系較近。2.表達(dá)分析:通過熒光定量PCR分析表明,扁桃AcDHN1在低溫、鹽及干旱脅迫下均有表達(dá)。其中,受低溫脅迫的誘導(dǎo)比較強(qiáng)烈。3.亞細(xì)胞定位分析:構(gòu)建表達(dá)載體p1304-AcDHN1通過農(nóng)桿菌浸染洋蔥表皮,對(duì)AcDHN1蛋白進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析表明在洋蔥表皮細(xì)胞核內(nèi)能檢測(cè)到綠色熒光蛋白,說明AcDHN1基因定位于細(xì)胞核。4.原核表達(dá)分析:構(gòu)建原核表達(dá)載體,在大腸桿菌(DE3)中表達(dá)大約為52 kD的蛋白質(zhì)。對(duì)誘導(dǎo)條件進(jìn)行優(yōu)化結(jié)果表明,重組蛋白pET-AcDHN1在IPTG濃度為0.1 mmol/L、誘導(dǎo)3 h時(shí),表達(dá)量達(dá)到最佳。5.轉(zhuǎn)基因功能驗(yàn)證:將AcDHN1構(gòu)建到p CAMBIA1303載體上,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化煙草。Kan篩選后通過PCR檢測(cè)證實(shí)外源基因AcDHN1已經(jīng)成功轉(zhuǎn)入煙草中。對(duì)不同逆境脅迫下轉(zhuǎn)基因煙草及對(duì)照組煙草進(jìn)行生理生化指標(biāo)測(cè)定,結(jié)果證實(shí)Ac DHN1基因在煙草中的過表達(dá)增強(qiáng)了其對(duì)非生物逆境脅迫的耐受性。
【關(guān)鍵詞】：扁桃 AcDHN1 qRT-PCR 亞細(xì)胞定位 原核表達(dá)分析 轉(zhuǎn)基因煙草
【學(xué)位授予單位】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：Q943.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 縮略語表7-8
• 第1章 引言8-17
• 1.1 脫水素基因結(jié)構(gòu)及分類8-10
• 1.2 脫水素基因在植物組織中的定位、亞細(xì)胞定位10-12
• 1.3 脫水蛋白體外功能的研究12-13
• 1.4 脫水素基因的表達(dá)與調(diào)控13-14
• 1.5 課題的研究意義14-17
• 第2章 扁桃Ac DHN1基因的克隆及生物信息學(xué)分析17-29
• 2.1 材料17-18
• 2.2 試驗(yàn)方法18-22
• 2.3 結(jié)果與分析22-28
• 2.4 討論28-29
• 第3章 扁桃Ac DHN1基因功能的初步分析29-40
• 3.1 材料29-31
• 3.2 方法31-34
• 3.3 結(jié)果與分析34-38
• 3.4 討論38-40
• 第4章 轉(zhuǎn)基因煙草及抗逆功能分析40-56
• 4.1 材料40-42
• 4.2 方法42-47
• 4.3 結(jié)果與分析47-54
• 4.4 討論54-56
• 第5章 結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-63
• 致謝63-64
• 作者簡(jiǎn)歷64

【相似文獻(xiàn)】

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1 王敏;扁桃脫水素基因AcDHN1的克隆及抗逆功能分析[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：901006