本文關(guān)鍵詞：毛果楊半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3的基因克隆和原核表達(dá)分析

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【摘要】：為研究毛果楊半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3的酶學(xué)特征和生理功能,本實(shí)驗(yàn)對(duì)PtCP3進(jìn)行了基因克隆和原核表達(dá)分析。從毛果楊(Populus trichocarpa Torr.Gray)中克隆得到半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3,將其克隆至pMD-18T載體。進(jìn)一步構(gòu)建原核表達(dá)載體pET30a-PtCP3,并在大腸桿菌(Escherichia coli)中成功誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白,然后通過(guò)包涵體洗滌法對(duì)目的蛋白進(jìn)行純化。測(cè)序結(jié)果表明,PtCP3基因CDS序列全長(zhǎng)1074 bp,含有木瓜蛋白酶的保守催化位點(diǎn)和組織蛋白酶B的保守結(jié)構(gòu)域。序列分析結(jié)果顯示,半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3編碼357個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)N-末端含有長(zhǎng)度為27個(gè)氨基酸殘基的信號(hào)肽序列,去除信號(hào)肽后蛋白酶大小為36.515 kDa,理論等電點(diǎn)為7.44。SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示,可以檢測(cè)到大小約為42 kDa的目的條帶,并可通過(guò)包涵體洗滌法在體外得到了高表達(dá)量、單一的重組蛋白PtCP3。
【作者單位】： 北京林業(yè)大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 毛果楊 半胱氨酸蛋白酶 基因克隆 原核表達(dá) 蛋白純化
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目“楊樹(shù)CEP1類半胱氨酸蛋白酶參與木質(zhì)部細(xì)胞分化和程序化死亡的分子機(jī)制研究”(31570582),“楊樹(shù)4CL基因家族調(diào)控木質(zhì)素生物合成機(jī)制研究”(30671697),“楊樹(shù)半胱氨酸蛋白酶基因結(jié)構(gòu)與酶學(xué)特性研究”(J1103516)
【分類號(hào)】：S792.11
【正文快照】： 0引言半胱氨酸蛋白酶是植物體內(nèi)一類十分龐大的蛋白酶家族,廣泛參與到植物的各個(gè)生理過(guò)程。很多研究發(fā)現(xiàn),植物各組織器官的衰老均與半胱氨酸蛋白酶有著密切的關(guān)系,而木本植物的PCD過(guò)程主要表現(xiàn)為木質(zhì)部形成以及葉衰老等方面,因此作為基礎(chǔ)研究的一個(gè)環(huán)節(jié),深入開(kāi)展對(duì)于毛果楊半

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本文編號(hào)：900745