本文關(guān)鍵詞：藍(lán)色相關(guān)基因轉(zhuǎn)化‘Robina’百合的研究

  更多相關(guān)文章： Robina百合 胚性愈傷 小鱗片 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化 F3’5’H基因

【摘要】：花色是花卉最具視覺沖擊力的審美特征,同時也是決定花卉的觀賞價值的最重要因素之一。百合是單子葉植物綱百合科百合屬多年生草本球根植物,是世界上著名的五大切花之一,在世界花卉交易中占有非常重要的市場份額。百合中由于缺乏F3’5’H基因而缺乏飛燕草素,所以自然界中沒有紫色或藍(lán)色的百合花。因此,創(chuàng)造藍(lán)色百合成為很多育種家追求的目標(biāo)。本研究以百合(Lilium spp.)OT(Oriental×Trumpet)系雜交品種‘Robina’懸浮細(xì)胞團和小鱗片作為轉(zhuǎn)化受體材料,使用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化含有蝴蝶蘭F3’5’H基因載體(p1300-pPZP-F3’5’H-DFR)。對其遺傳轉(zhuǎn)化體系進行了優(yōu)化,得到了百合潮霉素抗性植株。對得到的植株進行PCR檢測、RT-PCR檢測、southern blot檢測分析,表明載體導(dǎo)入到百合基因組中,并獲得6個百合轉(zhuǎn)基因株系。研究取得的主要結(jié)果如下:1.為了獲得胚性愈傷組織,對不同大小的花苞的花絲、花柱和子房進行誘導(dǎo),花苞大小為8~10cm時,胚性愈傷組織的誘導(dǎo)率最高,花絲為35.77%,子房為22.22%,花柱為18.13%。同時花苞大小為5~7 cm時,子房的不定芽產(chǎn)生率最高,為40.74%。誘導(dǎo)的胚性愈傷組織和不定芽為后面的轉(zhuǎn)化提供了材料。2.對胚性愈傷組織進行了懸浮培養(yǎng),成功得到胚性愈傷組織的懸浮培養(yǎng)系。分別進行了懸浮培養(yǎng)系的成苗試驗和再生小鱗片的不定芽誘導(dǎo)試驗,確定了最適合小鱗片誘導(dǎo)不定芽的NAA濃度為1.5 mg·L-1。對前期獲得的百合轉(zhuǎn)基因苗進行了移栽和馴化,經(jīng)過培養(yǎng)成功獲得高度為15~20cm的百合苗。3.為了優(yōu)化遺傳轉(zhuǎn)化過程,分別對預(yù)培養(yǎng)時間,侵染的菌液濃度,共培養(yǎng)時間以及AS(乙酰丁香酮)濃度經(jīng)行了評估。最終得到的胚性愈傷組織細(xì)胞團的最適條件是預(yù)培養(yǎng)2天,OD600為0.6,共培養(yǎng)3天,AS濃度為100μM時,穩(wěn)定轉(zhuǎn)化率最高為13.33%。小鱗片的最適條件是預(yù)培養(yǎng)3天,OD600為0.8,共培養(yǎng)3天,AS濃度為100μM時,穩(wěn)定轉(zhuǎn)化率最高為12.78%。4.分別對百合的懸浮細(xì)胞團和小鱗片進行了潮霉素抗性濃度做了評估。當(dāng)潮霉素濃度為20mg·L-1時,小鱗片的分化率為1.67%,此時細(xì)胞團的分化率僅為0.67%,當(dāng)潮霉素濃度為25mg·L-1時,無論小鱗片還是懸浮細(xì)胞團全部褐化死亡,確定兩者最適的潮霉素濃度都為20mg·L-1。試驗選用的抑菌素為羧芐青霉素,最終選用200mg·L-1的羧芐青霉素作為兩者的抑菌濃度。5.對研究獲得的187株潮霉素抗性植株中的80株進行PCR檢測,得到15株P(guān)CR陽性植株,然后經(jīng)過RT-PCR,并進行southern blot分析,其中有6個株系表現(xiàn)為陽性。
【關(guān)鍵詞】：Robina百合 胚性愈傷 小鱗片 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化 F3’5’H基因
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S682.29
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 第一章 文獻綜述12-23
• 1.1 百合概述12
• 1.2 藍(lán)色相關(guān)基因的研究進展12-17
• 1.2.1 藍(lán)色花形成過程中的關(guān)鍵酶12-14
• 1.2.2 花青素的生物合成14-17
• 1.2.3 利用F3’5’H基因產(chǎn)生藍(lán)色花17
• 1.3 百合轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)的建立17-19
• 1.3.1 愈傷組織再生系統(tǒng)建立18
• 1.3.2 不定芽再生系統(tǒng)建立18-19
• 1.3.3 體細(xì)胞胚的再生系統(tǒng)建立19
• 1.4 百合農(nóng)桿菌介導(dǎo)法的研究19-21
• 1.4.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法的介紹20
• 1.4.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法在百合研究中的應(yīng)用20-21
• 1.5 本研究的目的和意義21-23
• 第二章 ‘Robina’百合遺傳轉(zhuǎn)化受體系的建立23-31
• 2.1 材料23
• 2.1.1 植物材料23
• 2.1.2 主要試劑23
• 2.2 試驗方法23-24
• 2.2.1 胚性愈傷組織的誘導(dǎo)23
• 2.2.2 胚性愈傷組織的懸浮培養(yǎng)23
• 2.2.3 胚性愈傷組織的再生23-24
• 2.2.4 組培苗小鱗片誘導(dǎo)植株再生24
• 2.2.5 潮霉素濃度篩選和抑菌素濃度的確定24
• 2.2.6 移栽馴化培養(yǎng)24
• 2.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析24
• 2.3 結(jié)果與分析24-29
• 2.3.1 百合花苞的大小對其胚性愈傷組織誘導(dǎo)的影響24-25
• 2.3.2 胚性愈傷組織的懸浮培養(yǎng)25-26
• 2.3.3 激素對組培苗小鱗片誘導(dǎo)植株再生的影響26
• 2.3.4 兩種轉(zhuǎn)化材料的獲得26-27
• 2.3.5 潮霉素濃度篩選27-28
• 2.3.6 羧芐青霉素抑菌濃度的確定28
• 2.3.7 移栽馴化植株的成長變化28-29
• 2.4 討論29
• 2.5 小結(jié)29-31
• 第三章 蝴蝶蘭F3’5’H結(jié)合輔助基因轉(zhuǎn)化‘Robina’百合的研究31-40
• 3.1 材料31
• 3.1.1 植物材料31
• 3.1.2 菌株和載體31
• 3.2 試劑和儀器31-32
• 3.2.1 主要試劑31-32
• 3.2.2 主要儀器32
• 3.3 方法32-33
• 3.3.1 農(nóng)桿菌菌液制備32
• 3.3.2 轉(zhuǎn)化受體的預(yù)培養(yǎng)32
• 3.3.3 侵染及共培養(yǎng)32
• 3.3.4 脫菌處理及篩選培養(yǎng)32-33
• 3.4 結(jié)果與分析33-35
• 3.4.1 預(yù)培養(yǎng)時間對轉(zhuǎn)化效率的影響33
• 3.4.2 菌液濃度OD600對轉(zhuǎn)化效率的影響33-34
• 3.4.3 共培養(yǎng)時間對轉(zhuǎn)化效率的影響34
• 3.4.4 AS濃度對轉(zhuǎn)化效率的影響34-35
• 3.5 轉(zhuǎn)基因植株檢測35-36
• 3.5.1 轉(zhuǎn)化植株的PCR檢測35
• 3.5.2 轉(zhuǎn)基因植株的RT-PCR檢測35-36
• 3.5.3 轉(zhuǎn)基因植株的southern blot檢測36
• 3.6 結(jié)果與分析36-38
• 3.6.1 轉(zhuǎn)基因植株P(guān)CR檢測結(jié)果36-37
• 3.6.2 轉(zhuǎn)基因植株RT-PCR檢測結(jié)果37
• 3.6.3 southern blot檢測的結(jié)果37-38
• 3.7 討論38-39
• 3.8 小結(jié)39-40
• 第四章 結(jié)論40-41
• 參考文獻41-47
• 縮略詞47-48
• 致謝48-49
• 作者簡介49

【相似文獻】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 劉愛玲;藍(lán)色相關(guān)基因轉(zhuǎn)化‘Robina’百合的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

2 田菲菲;‘Robina’百合懸浮胚性愈傷組織遺傳轉(zhuǎn)化的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2014年

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本文編號：899229